侯金蓮 磨美蘭* 林廣津 黃柏成 趙志偉

(廣西大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院 南寧 530004)

1例混合感染引起關(guān)節(jié)炎的診斷

侯金蓮 磨美蘭* 林廣津 黃柏成 趙志偉

(廣西大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院 南寧 530004)

*通訊作者：momeilan@163.com

近年來，廣西多個(gè)養(yǎng)雞場發(fā)生多發(fā)性關(guān)節(jié)炎病例，給養(yǎng)殖場帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失。2010年6月廣西某三黃雞養(yǎng)殖場雞群發(fā)生了一起以局部關(guān)節(jié)腫脹和跛行為主要表現(xiàn)的病例。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室檢測，診斷為雞傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌混合感染。現(xiàn)將情況報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 流行病學(xué)

全群三黃雞共10000羽，25日齡左右起開始發(fā)病，臨床癥狀以局部關(guān)節(jié)腫脹、跛行為主，發(fā)病率約1.5%，出現(xiàn)零星死亡。雞群未接種過禽呼腸孤病毒（ARV）弱毒疫苗。相同的雞苗飼養(yǎng)在另外養(yǎng)殖場，沒有發(fā)生關(guān)節(jié)炎。

1.2 臨床癥狀

病雞食欲減少，不愿走動，消瘦，單側(cè)或雙側(cè)跗關(guān)節(jié)腫大，跛行。

1.3 大體剖檢

全部撲殺送檢的8羽35日齡病雞，并記錄病理變化。

1.4 細(xì)菌分離鑒定

同時(shí)取病雞關(guān)節(jié)液和肝臟無菌操作劃線接種血平板，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后挑取可疑菌落接種于新的血平板和麥康凱培養(yǎng)基，純培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落涂片染色鏡檢。疑似沙門氏菌的，挑取菌落接種木糖賴氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）平板（青島海博生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，如果長出黑色半透明菌落（典型沙門氏菌）或長出粉紅色菌落（H2S陰性的變種沙門氏菌），再用沙門氏菌屬群特異性血清(寧波天潤生物藥業(yè)出品)進(jìn)行平板凝集試驗(yàn)鑒定菌屬；疑似其他菌的接種微量生化反應(yīng)管（杭州天和微生物試劑公司產(chǎn)品）進(jìn)行生化鑒定。

1.5 藥敏試驗(yàn)

挑取單個(gè)菌落，用生理鹽水稀釋后均勻涂于血平板表面，待菌液吸收后，貼上藥敏紙片（杭州天和微生物試劑有限公司），37℃培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果并測量抑菌圈的大小。

1.6 ARV的分離及RT-PCR檢測

無菌采集病雞典型病變的關(guān)節(jié)液及其組織和少量肝臟組織，剪碎后充分研磨，并用滅菌生理鹽水制成1∶5懸液，反復(fù)凍融3次后3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清使用ARV的特異性引物進(jìn)行RT-PCR檢測，以ARV疫苗株S1133為陽性對照。同時(shí)取部分上清加入雙抗，置于4℃冰箱作用4小時(shí)后卵黃囊接種7日齡SPF雞胚。96小時(shí)后取其部分尿囊液，按上述同樣方法進(jìn)行樣品ARV的RT-PCR檢測。

2 結(jié)果

2.1 剖檢病變

送檢的8羽病雞病變及所占比例如下：關(guān)節(jié)腫大(8/8)、關(guān)節(jié)腔干酪樣（2/8）及漿液樣滲出物（6/8）、腳趾漿液樣滲出物（6/8）、脾臟腫大(2/8)、肝臟黃染(1/8)、十二指腸出血(1/8)、心包炎（1/8）和心臟壞死（4/8）。

2.2 細(xì)菌分離及鑒定結(jié)果

結(jié)果表明，8羽病雞肝臟細(xì)菌分離均為陰性；4羽病雞關(guān)節(jié)液細(xì)菌分離為陰性，另4羽病雞關(guān)節(jié)液細(xì)菌分離到2種明顯不同的細(xì)菌，見表1。其中一種在普通瓊脂板形成濕潤、光滑、隆起、不透明和灰白色的圓形菌落，直徑1～2毫米，乳白色；在鮮血瓊脂平板上形成濕潤、光滑、隆起、邊緣整齊及直徑1～2毫米的菌落，菌落周圍有溶血環(huán)；涂片鏡檢可見大量均勻一致、單個(gè)、成雙或不規(guī)則的葡萄串狀排列或團(tuán)塊狀的革蘭氏陽性球菌，初步鑒定為葡萄球菌。進(jìn)一步作生化試驗(yàn)將分離菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明符合金黃色葡萄球菌的特征，見表2。另一種細(xì)菌純培養(yǎng)后在麥康凱培養(yǎng)基生長緩慢，長成無色、細(xì)小、圓形和露滴狀菌落，涂片鏡檢見到兩端鈍圓的革蘭氏陰性短小桿菌，初步鑒定為沙門氏菌，進(jìn)一步用鑒定培養(yǎng)基XLD平板培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，長出粉紅色菌落，表明該菌為H2S陰性的變種沙門氏菌，然后再進(jìn)一步用沙門氏菌屬群特異性血清進(jìn)行平板凝集試驗(yàn)鑒定其菌屬，結(jié)果表明該菌為雞傷寒沙門氏菌。

表1 病雞不同部位細(xì)菌分離情況

表2 葡萄球菌生化試驗(yàn)結(jié)果

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明，2種細(xì)菌均對頭孢噻肟、頭孢哌酮和頭孢曲松高度敏感。

2.4 ARV的分離及RT-PCR檢測結(jié)果

接種SPF雞胚96小時(shí)后，雞胚不死，胚體及內(nèi)臟器官未觀察到明顯肉眼可見的病變。病料直接檢測和接種雞胚尿囊液檢測結(jié)果均為ARV陰性。根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢變化及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，診斷為雞傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌感染。

表3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 根據(jù)發(fā)病流行情況、臨床癥狀、剖檢病變和實(shí)驗(yàn)室檢查，診斷該病為雞傷寒沙門氏菌和金色葡萄球菌混合感染。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明這2種細(xì)菌對頭孢噻肟、頭孢哌酮和頭孢曲松均高度敏感。

3.2 本文所分離到的雞傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌均是環(huán)境常在菌。沙門氏菌可通過種蛋垂直傳播，也可通過雛雞互相水平傳播。葡萄球菌在自然界分布廣泛，空氣、飼養(yǎng)環(huán)境、土壤、孵化房、禽類加工車間、健康雞的體表、結(jié)膜及腸道中均有存在。根據(jù)相同的雞苗飼養(yǎng)在另外養(yǎng)殖場沒有發(fā)生關(guān)節(jié)炎可以推測，本病的發(fā)生主要與環(huán)境污染、飼養(yǎng)密度和飼養(yǎng)管理等因素有直接關(guān)系。因此加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和消毒，減少環(huán)境中各種機(jī)會性病原的存在，是控制本病的關(guān)鍵之一。

3.3 禽呼腸孤病毒、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、滑膜支原體、多殺性巴氏桿菌及丹毒桿菌均可引起雞關(guān)節(jié)炎。金黃色葡萄球菌通常是禽呼腸孤病毒或滑膜支原體感染后的機(jī)會性病原，沙門氏菌感染則會造成雞局部或者全身性感染，關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎是其后遺癥之一。本病例雖然未檢測到禽呼腸孤病毒，但也不能放松對禽呼腸孤病毒的防控。同時(shí)也不能忽略其他免疫抑制性疾病的預(yù)防。

S858.3

B

1008-3847（2011）04-0037-03

曹偉勝