侯大平，曲秀梅，方 芳，李 冬，張志國(guó)

佳木斯大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，黑龍江佳木斯154002

己氯軟膏是經(jīng)過(guò)我院藥劑科和婦科幾代專家和教授摸索、循證研制的制劑。其既具有增強(qiáng)陰道局部抵抗力的作用，又能有效殺滅致病菌，治愈率及總有效率較高，深受廣大老年婦女歡迎，此制劑亦為我院特色制劑之一。為保證藥品質(zhì)量和制劑標(biāo)準(zhǔn)提高需要，本文建立了HPLC法測(cè)定己氯軟膏中氯霉素的含量測(cè)定方法，該法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高，結(jié)果滿意。

1 儀器與試劑

大連伊利特P230Ⅱ高效液相色譜儀，UV230Ⅱ紫外-可見檢測(cè)器，EC2006色譜數(shù)據(jù)處理工作站。

甲醇（色譜純，天津凱通化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）；氯霉素對(duì)照品（批號(hào)：130555-200602，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；己氯軟膏（本院制劑室生產(chǎn)）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Sinochrom ODS2 色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-水（59∶41）；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：272 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 試驗(yàn)溶液的制備

精密稱取本品約2 g，置100 ml碘瓶中，用甲醇超聲提取 2 次（20、15 ml），每次 20 min，冷至室溫，轉(zhuǎn)移至 50 ml量瓶中；用少量甲醇洗滌殘?jiān)暗馄?次，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取4 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為樣品溶液。按照處方比例及制備工藝，制備不含氯霉素的陰性樣品，同法制備不含氯霉素的空白溶液。精密稱取氯霉素對(duì)照品102.5 mg，置50 ml容量瓶用中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻，作為對(duì)照品貯備溶液。精密量取貯備溶液1 ml，置25 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度（含氯霉素0.082 mg/ml），作為對(duì)照品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液和空白溶液按色譜條件進(jìn)樣，色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn)

分別取對(duì)照品貯備溶液 0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 ml，分別置25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，分別進(jìn)樣20 μl測(cè)定，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得方程為：Y=13.954X+125.98，r=0.9957，氯霉素濃度在 57.4～106.6μg/ml范圍內(nèi)與峰面積成良好線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

分別取濃度為82 μg/ml對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣7次，記錄面積，RSD為1.58%，儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取0906144批號(hào)樣品(含量100.29%)按“2.1”項(xiàng)下制備提取并進(jìn)樣7次，記錄峰面積，RSD為1.68%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

按處方分別精密取己烯雌酚、氯霉素和輔料，按工藝規(guī)程配制樣品軟膏（含氯霉素49.84 mg/g），按樣品溶液制備方法分別制備樣品溶液7份，按測(cè)定方法測(cè)定含量，檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1 回收率檢測(cè)結(jié)果（±s，n=3）

表1 回收率檢測(cè)結(jié)果（±s，n=3）

加入量（mg/ml） 測(cè)得量（mg/ml）0.082 8±0.007 6 0.080 1±0.005 7 0.079 4±0.000 9 0.079 2±0.005 7 0.078 8±0.003 1 0.078 4±0.001 3 0.081 5±0.002 8平均回收率（%）RSD（%）0.081 2 0.079 1 0.080 1 0.079 2 0.080 3 0.079 6 0.079 8回收率（%）101.89 101.24 99.24 100.05 98.16 98.54 102.11 100.181.48

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

樣品溶液配制完成后， 分別在 1、3、5、7、22、28 h 進(jìn)樣，記錄峰面積，RSD為0.97%，結(jié)果表明樣品28 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品檢測(cè)

按處方和工藝流程配制樣品軟膏15批次，按樣品溶液制備方法分別制備樣品溶液，按測(cè)定方法測(cè)定含量，檢測(cè)結(jié)果見表2。

表2 樣品檢測(cè)結(jié)果

由表2可見，最高含量為108.13%，最低含量為92.57%。

3 討論

筆者曾力圖按文獻(xiàn)[1-2]報(bào)道的方法同時(shí)測(cè)定氯霉素和己烯雌酚含量，不僅分離效果不佳，而且含量太低致使己烯雌酚峰高太小，噪聲較大，無(wú)法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于氯霉素的檢測(cè)波長(zhǎng)，文獻(xiàn)報(bào)道的有 241[1-3]、240[4]、280[5]、和 272[6]nm，本文作者配制含氯霉素0.082 mg/ml的甲醇溶液，在220～300 nm波長(zhǎng)進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在272 nm處有最大吸收，與文獻(xiàn)[6]和2005年版《中國(guó)藥典》二部氯霉素含量測(cè)定項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)一致。造成差異的原因可能是與其他作者需要同時(shí)檢測(cè)兩種成分含量有關(guān)。在進(jìn)行流動(dòng)相選擇時(shí)，經(jīng)過(guò)篩選，以方焱等試驗(yàn)使用的甲醇-水（59∶41）較好，因而選擇了此流動(dòng)相。

由樣品檢測(cè)結(jié)果可見，本實(shí)驗(yàn)氯霉素最高含量108.13%，最低含量92.57%，鑒于制劑實(shí)際情況和檢測(cè)方法剛開始使用，因此，確定軟膏中含氯霉素（C11H12Cl2N2O5）應(yīng)為標(biāo)示含量的90%～110%。

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