史志剛

射干抗病毒注射液黃酮類成分的含量測定

史志剛

射干抗病毒注射液為八味中藥組成的復(fù)方制劑,僅對綠原酸、次野鳶尾黃素等個別指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測定,不足以保證其有效性。本文通過實驗建立了對射干抗病毒注射液中四種活性成分鳶尾苷、野鳶尾苷、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的含量同時進(jìn)行測定的方法,實現(xiàn)了該制劑的多指標(biāo)含量控制。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 儀器Agilent 1100型液相色譜儀(配有DAD檢測器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、自動進(jìn)樣器), ChemStation工作站(Agilent科技有限公司)。

藥品與試劑乙腈(色譜純,山東禹王實業(yè)有限公司禹城化工廠),冰乙酸(色譜純,天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心),無水乙醇(分析純,康科德科技有限公司),水為去離子水。鳶尾苷(TED)、野鳶尾苷(IRD)、野鳶尾黃素(IRG)、次野鳶尾黃素(IRF)(自制,純度≥99.3%),S1-S10為10批自制SGKBDI供試品溶液,M1-M 9市售SGKBDI供試品溶液,由西安高科陜西金方藥業(yè)有限公司(批號:07030201、070312、 07030501、070314、070313、07030601)、陜西金麒麟藥業(yè)有限公司(批號:07052202、07052201、07052102)提供。

1.2 溶液的制備 對照品溶液的制備 分別精密稱取鳶尾苷、野鳶尾苷、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的對照品適量(自制,純度≥99.3%)置同一個25m l量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成含鳶尾苷 836μg/ml、野鳶尾苷 221μg/ ml、野鳶尾黃素19μg/ml和次野鳶尾黃素 152μg/ml的混合對照品儲備液。精密量取儲備液 5ml,置 10ml量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

自制SGKBDI供試品溶液的制備取自制SGKBDI 1m l,置 10ml量瓶中,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻,用 0.45μm濾膜濾過后作自制SGKBDI供試品溶液。

市售SGKBDI供試品溶液取同批市售SGKBDI 5支混勻,用0.45μm濾膜濾過后作市售SGKBDI供試品溶液。

1.3 色譜條件 CenturySIL C18 BDS(250mm×4.6mm,5 μm)色譜柱,流動相系統(tǒng)見下表流速1.0ml/min,紫外檢測波長265nm,柱溫(30.00±0.15)℃,進(jìn)樣量20μL。

表1 梯度洗脫程序

2 結(jié)果

取10批自制SGKBDI和9批市售SGKBDI樣品,按“1.2”項下處理制備供試品溶液,各進(jìn)樣分析三次,測定結(jié)果見表2。

表2 含量測定結(jié)果

直觀比較發(fā)現(xiàn),10批自制SGKBDI供試品溶液除S3、S5外,其余 8批樣品中 4種成分的含量變化趨勢相似,3批陜西金麒麟SGKBDI(M7、M 8、M 9)與這8批樣品的變化趨勢也較類似。6批金方SGKBDI中4種成分的含量變化趨勢相似,但與其他樣品有很大差別。以上結(jié)果說明兩個廠家生產(chǎn)SGKBDI所有射干藥材來源基本固定,陜西金麒麟所用射干藥材用自制8批合格SGKBDI所用射干藥材的這四種黃酮類成分分布比例相似,而金方藥業(yè)與它們的相似度較差。

自制SGKBDI供試品溶液濃度為處方注射液濃度的4%,所以自制SGKBDI中實際鳶尾苷、野鳶尾苷、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素的含量應(yīng)為其供試品溶液濃度的 25倍。所以自制SGKBDI中4種黃酮類成分的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于市售SGKBDI。

3 討論

3.1 多指標(biāo)定量成分的選擇 射干抗病毒注射液由八味藥材組方,射干為其君藥,即針對主病或主證,起主要作用的藥物,而黃酮類化合物又為其主要活性物質(zhì),所以本文選擇射干中的鳶尾苷、野鳶尾苷、野鳶尾黃素及次野鳶尾黃素這四種重要的黃酮類物質(zhì),作為指標(biāo)性成分進(jìn)行同時含量測定,可以較科學(xué)、可靠、簡便的控制射干抗病毒注射液的質(zhì)量。

3.2 流動相的選擇 射干抗病毒注射液藥味較多,成分復(fù)雜,要選擇一種流動相系統(tǒng)對其進(jìn)行四種組分同時定量難度很大,本文參照射干藥材中的異黃酮類成分含量測定的流動相條件,對流動相系統(tǒng)及梯度程序進(jìn)行優(yōu)化,分別考察了水(含0.05%磷酸)-乙腈、水(含1%醋酸)-乙腈(含1%醋酸)、水(含 1%醋酸)-乙腈等系統(tǒng),經(jīng)過多次梯度程序優(yōu)化,最終確定了本文的流動相條件。

本文利用HPLC法對射干抗病毒注射液中的四種黃酮類成分進(jìn)行了同時定量分析,分別測定了 10批自制制劑及 9批兩個廠家市售制劑,結(jié)果表明自制射干抗病毒注射液中這四種成分的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于市售射干抗病毒注射液。本方法快速簡便、準(zhǔn)確可靠,可以用于射干抗病毒注射液的質(zhì)量控制。

134001鞍山市食品藥品檢驗所