許慧君， 吉 祥， 張?zhí)m桐*， 鐘 穎， 易 自

(1．河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物分析教研室，河北石家莊050017;2．河北石家莊樂(lè)仁堂制藥有限責(zé)任公司，河北石家莊050000)

棗仁安神膠囊來(lái)源于中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》11冊(cè)［1］(標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-B-2164-96)。棗仁安神膠囊是以酸棗仁(炒)、丹參、五味子(醋炙)等藥味制成內(nèi)服的制劑，具有補(bǔ)心養(yǎng)肝，安神益智功效，用于神經(jīng)衰弱患者心肝血虛證引起的失眠，兼有頭暈、健忘等功效。方中五味子性味酸、溫，歸入肺、腎、心經(jīng)，具有斂肺滋腎、生津斂汗、寧心安神之功效，與酸棗仁配伍用于心悸怔忡及失眠［2-6］。目前文獻(xiàn)報(bào)道僅對(duì)棗仁安神膠囊中單一成分進(jìn)行質(zhì)量控制［7-12］。故測(cè)定五味子中多個(gè)木脂素類(lèi)有效成分的量對(duì)于棗仁安神膠囊的質(zhì)量控制具有非常重要的意義。本研究采用高效液相色譜法測(cè)定了棗仁安神膠囊中7種木脂素類(lèi)成分，進(jìn)一步為棗仁安神膠囊的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1200液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司);BP211D型電子分析天平(德國(guó)Satrorius公司)。乙腈、甲醇(色譜純，美國(guó)Tedia公司);水為重蒸水。對(duì)照品由復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院提供。棗仁安神膠囊購(gòu)于貴州同濟(jì)堂制藥有限公司。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件 色譜柱為 Brava BDS C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:A 相為乙腈，B 相為水;柱溫:30℃;體積流量:0．8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):225 nm;進(jìn)樣量:20 μL;線性梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序Tab．1 Gradient elution program

2．2 對(duì)照品溶液的制備 分別稱(chēng)取對(duì)照品戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素適量，精密稱(chēng)定，加甲醇分別制成約1 mg/mL的對(duì)照品溶液。分別取各對(duì)照品適量加甲醇制成適當(dāng)質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品貯備液，搖勻，0．45 μm 濾膜濾過(guò)，備用。

2．3 供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的棗仁安神膠囊內(nèi)容物1．0 g，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解，并定容于25 mL量瓶中，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)充所失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，離心，0．45 μm 濾膜濾過(guò)，棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2．4 陰性溶液的制備 按處方比例制備缺五味子的陰性空白樣品，，并按2．3項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2．5 方法專(zhuān)屬性考察 分別精密吸取前述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性供試品溶液各20 μL，按2．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1。戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素與其它峰分離度均大于1．5，分離度良好，各對(duì)照品對(duì)應(yīng)色譜峰理論塔板數(shù)大于2 000，不受其他組分的干擾。

2．6 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品貯備液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0 mL 置 10 mL 量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度。精密吸取20 μL，注入液相色譜儀測(cè)定。以質(zhì)量濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程，線性范圍及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。

2．7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一混合對(duì)照品溶液各20 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰的峰面積。結(jié)果戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的RSD值分別為 0．59%、0．85%、0．64%、0．81%、0．68%、0．92%和0．48%，均符合精密度試驗(yàn)的要求，說(shuō)明該方法的精密度良好。

圖1 對(duì)照品(A)，棗仁安神膠囊(B)和陰性樣品(C)的HPLC色譜圖Fig．1 HPLC chromatograms of reference substances(A)，Zaoren Anshen Capsules(B)and negative samples(C)

表2 7種有效成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍Tab．2 Regression equations，correlation coefficient and linearity ranges of the seven compounds

2．8 重復(fù)性試驗(yàn) 取棗仁安神膠囊5份，每份精密稱(chēng)取內(nèi)容物約1．0 g，按2．3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20 μL進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值(n=5)分別為1．651、2．247、0．732、0．877、0．433、5．710、0．941 mg/g;RSD 值分別為 0．62%、0．59%、0．48%、0．83%、0．74%、0．68% 和 0．55%。均符合規(guī)定，表明本方法重復(fù)性良好。

2．9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一棗仁安神膠囊供試品溶液分別于 0、4、8、12、18、24 h 進(jìn)樣分析，記錄峰面積。戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的RSD值分別為 0．67%、0．52%、0．86%、0．73%、0．70%、0．62%和0．59%。結(jié)果表明供試品于溶液室溫條件下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2．10 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取2．9項(xiàng)下已測(cè)定的棗仁安神膠囊內(nèi)容物0．5 g，共6份，分別精密加入對(duì)照品適量，按2．3項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液并進(jìn)樣分析。結(jié)果戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的平均回收率分別為 99．50%、99．95%、99．72%、99．78%、100．51%、99．93% 和 99．23%。RSD 值分別為 0．80%、0．57%、1．35%、0．73%、1．27%、0．26%和0．93%。結(jié)果表明該方法回收率良好，見(jiàn)表3。

2．11 樣品測(cè)定 取3批棗仁安神膠囊，按2．3項(xiàng)下制備供試品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積，將樣品中7種木脂素的峰面積代入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。每批樣品測(cè)定3份，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 7種成分加樣回收率考察結(jié)果Tab．3 The results of recovery

表4 棗仁安神膠囊中7種有效成分測(cè)定結(jié)果(n=3)Tab．4 The contents of the seven compounds in Zaoren Anshen Capsules(n=3)

3 討論

本研究建立了HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定棗仁安神膠囊中7種木脂素類(lèi)成分，其分別為戈米辛H、五味子醇甲、五味子醇乙、戈米辛F、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素。在該色譜條件下7種有效成分均能完全分離，陰性溶液無(wú)干擾，經(jīng)精密度、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)證明該方法簡(jiǎn)便、快捷，準(zhǔn)確度較好且靈敏度高，可以為棗仁安神膠囊的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

流動(dòng)相選擇中，考察了甲醇-水、乙腈-水等條件，結(jié)果乙腈-水作為流動(dòng)相對(duì)多個(gè)木脂素類(lèi)成分的洗脫較為理想，再一系列的摸索，確定梯度洗脫條件后，各有效成分保留時(shí)間均在65 min內(nèi)，并且各色譜峰分離度較好，理論塔板數(shù)較高。由于本研究中待測(cè)組分均為木脂素類(lèi)成分，結(jié)構(gòu)較為相近，化學(xué)性質(zhì)也進(jìn)而相近。故在檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇中，以各成分共同的最大吸收波長(zhǎng)225 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

本研究中對(duì)棗仁安神膠囊的提取方法進(jìn)行了考察，采用了加熱回流和超聲提取。經(jīng)比較，結(jié)果表明超聲提取所需溶劑量少、時(shí)間短并且提取效率高。從而對(duì)超聲提取中的各個(gè)影響因素進(jìn)行考察，包括溶劑的選擇、溶劑的量以及提取時(shí)間的影響。最終確定其提取條件為90%乙醇作為溶劑，固液比為1∶25(g/mL)，最佳提取時(shí)間為30 min。

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