衛(wèi) 強(qiáng)， 孫曉燕

(安徽新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽合肥230088)

隨著中草藥資源的深入研究，對(duì)藥材有效部位的開發(fā)已經(jīng)呈現(xiàn)較好的應(yīng)用前景，如益心酮片來(lái)源于山楂葉，七葉神安片來(lái)自三七葉［1］。國(guó)內(nèi)外研究了菊花中總黃酮、黃酮苷、揮發(fā)油和微量元素等有效成分的提取分離及應(yīng)用［2-7］，對(duì)菊葉的研究文獻(xiàn)較少。菊葉是菊的有效應(yīng)用部位，其化學(xué)成分與菊花相似。菊葉資源蘊(yùn)藏量十分豐富，如貢菊和杭菊年產(chǎn)量在5 000噸左右［8］，采收菊花時(shí)丟棄菊葉造成很大的浪費(fèi)。菊葉與菊花功效相似，可以治療瘡、癰疽、頭風(fēng)、目眩等病癥［9］，菊葉提取液有抗菌、抗氧化、保護(hù)心肌缺血作用［10］。國(guó)內(nèi)目前已經(jīng)對(duì)菊花和莖、葉中總黃酮成分進(jìn)行了提取工藝研究［11-12］，本文研究了菊葉中多糖的含量測(cè)定方法，以期為研究其有效成分提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱(廈門德儀設(shè)備有限公司);SHZD(Ⅲ)型防腐臺(tái)式循環(huán)水真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司);FA1004型電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);722型可見分光光度儀(天津市托普儀器有限公司);滁菊開發(fā)有限公司提供菊葉，安徽科技學(xué)院劉漢珍副教授鑒定為滁菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的莖上葉;葡萄糖(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)040310);所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 樣品溶液的制備

菊葉陰干后，置于干燥箱中50℃干燥12 h，粉碎成細(xì)粉。精密稱取菊葉粉末5 g，量取100 mL石油醚，索氏提取至無(wú)色;樣品不變，依法再用乙醚、乙酸乙酯、95%乙醇、50%乙醇索氏提取各3 h，棄去提取液。取提取樣品，揮干溶劑，一部分置于燒杯中，加入蒸餾水200 mL超聲提取5 h，另一部分加入蒸餾水200 mL進(jìn)行回流提取5 h。將上述提取液濃縮，應(yīng)用Sevag法(正丁醇-氯仿-樣品=1∶5∶25)除去蛋白質(zhì)4次，再加入10%雙氧水60℃脫色12 h，趁熱抽濾，濃縮，濾液加入乙醇至醇濃度90%進(jìn)行醇沉，放入冰箱中4℃靜置24 h，抽濾，用少許95%乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，低溫烘干，即得。精密稱取以上精制多糖50 mg，蒸餾水溶解，定容至50 mL，待測(cè)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL量瓶中，加水至刻度，使其葡萄糖濃度為1 mg/mL。

將上述葡萄糖溶液稀釋成100 μg/mL，精密吸取4、6、8、10、12 mL置25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。分別吸取上述不同濃度溶液2 mL，另吸取蒸餾水2 mL作空白對(duì)照，移入20 mL具塞刻度試管，依次加入5%苯酚溶液1 mL、濃硫酸5 mL振搖，于100℃水浴中加熱15 min，冷卻30 min，定容至10 mL，再冷卻至室溫后置紫外分光光度儀下490 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。得到 A=30.85C－0.437 7，r=0.999 02，n=5。結(jié)果表明，在 8～24 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 菊葉中多糖的含量測(cè)定

精密吸取2.1項(xiàng)下樣品溶液各2 mL，分別置于25 mL量瓶中，定容。按照2.2項(xiàng)下“加水至刻度……”起進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度值，計(jì)算菊葉中多糖的含量。結(jié)果見表1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為100 μg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液4 mL，按照2.2項(xiàng)下“加水至刻度……”起進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度值，按此方法平行做5個(gè)樣，得RSD=1.34%。

表1 菊葉中多糖的含量(n=4)

2.4.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取樣品溶液2 mL，按2.2項(xiàng)下的方法測(cè)定吸光度，每隔30 min測(cè)1次，結(jié)果表明樣品溶液在2 h顯色穩(wěn)定，RSD=0.78%。

2.4.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 精密稱取同批菊葉樣品5份各5 g，按2.1項(xiàng)下的方法(后續(xù)處理運(yùn)用回流提取法)同時(shí)制取5份樣品溶液，按2.2項(xiàng)下的方法測(cè)定吸光度，計(jì)算多糖的含量。結(jié)果表明，平均含量為7.56%，RSD=2.21%。

2.4.4 回收率實(shí)驗(yàn) 取樣品溶液2 mL，置于25 mL量瓶中，吸取1 mL，加入濃度為0.1 mg/mL葡萄糖對(duì)照品溶液1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法操作，平均回收率為96.32%，RSD=3.02%(n=5)。

3 討論

3.1 比較了超聲提?。?3］和水浴回流提取兩種方法，結(jié)果表明，水浴回流提取的多糖含量比超聲提取高2.14%。超聲提取后的多糖顏色呈淺棕色，水浴回流提取后多糖呈褐色。

3.2 本實(shí)驗(yàn)采用10%過(guò)氧化氫［14］脫色，脫色時(shí)間較長(zhǎng)，其對(duì)多糖的影響有待進(jìn)一步考察。

3.3 本實(shí)驗(yàn)初步建立了菊葉中多糖的含量測(cè)定方法，方法簡(jiǎn)便、可靠、穩(wěn)定性好，為菊葉的研究開發(fā)提供了一定基礎(chǔ)。

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