羅巧明 張建

甲狀腺微小乳頭狀癌中MC和TPO的表達(dá)及意義

羅巧明 張建

目的 探討甲狀腺微小乳頭狀癌中MC及TPO的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組化EnVision法檢測(cè)21例甲狀腺微小乳頭狀癌中MC和TPO的表達(dá)水平。結(jié)果 MC在甲狀腺微小乳頭狀癌中呈中至重度陽(yáng)性表達(dá)，只有1例呈弱陽(yáng)性，而在甲狀腺良性病變中呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)。甲狀腺微小乳頭狀癌中有18例TPO呈陰性表達(dá)，3例呈弱陽(yáng)性，21例良性病變均呈中至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)論 MC及TPO聯(lián)合檢測(cè)將進(jìn)一步提高甲狀腺微小乳頭狀癌診斷的準(zhǔn)確性。

甲狀腺腫瘤；微小乳頭狀癌；MC；TPO

甲狀腺微小乳頭狀癌（papillary thyroid microcarcinoma，PTM）是指直徑≤1cm的甲狀腺乳頭狀癌，是甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC）中常見(jiàn)的亞型之一，由于其體積小，發(fā)病隱匿，大體檢查時(shí)容易忽略；在組織學(xué)中，一些病例中不典型細(xì)胞核的改變常導(dǎo)致診斷上的困難。本文通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)間皮細(xì)胞 (Mesothelial Cell,MC)和甲狀腺過(guò)氧化物酶 (Thyroid Peroxidase,TPO)在PTM中的表達(dá)水平并探討其在鑒別診斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇肇慶市端州區(qū)人民醫(yī)院病理科2006年10月～2010年10月診斷為PTM的手術(shù)切除標(biāo)本病例21例，男性7例，女性14例；年齡33～69歲，中位年齡50歲。腫瘤組織直徑從0.2～1cm。

1.2 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)組織處理，石蠟包埋，連續(xù)切片（切片厚4μm），常規(guī)HE染色。免疫組織化學(xué)采用EnVision二步法進(jìn)行MC、TPO染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用診斷明確的甲狀腺乳頭狀癌作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。MC（鼠抗單克隆抗體）購(gòu)自福州邁新公司，TPO（鼠抗單克隆抗體）購(gòu)自上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判斷 MC陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞膜，TPO陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，棕黃色細(xì)胞顆粒為陽(yáng)性。著色根據(jù)Beesley[1]分級(jí)方法，按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比并參考著色強(qiáng)度確定分級(jí)：無(wú)明顯陽(yáng)性細(xì)胞或著淺黃色為（-）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%，顆粒棕黃色為（+）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%，顆粒棕黃色為（++）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%，顆粒深棕色為（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用x2檢驗(yàn)，并按照《臨床流行病學(xué)》[2]介紹的診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)計(jì)算MC及TPO的敏感度（Sen）、特異度（Spe）、準(zhǔn)確度(Acc)。

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)特征 在21例PTM中，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫（結(jié)甲）合并PTM 6例，毒性甲狀腺腫（甲亢）合并PTM 8例，橋本甲狀腺炎合并PTM 3例，甲狀腺腺瘤合并PTM 4例。腫瘤細(xì)胞以乳頭狀排列為主12例，以濾泡狀排列為主9例；瘤細(xì)胞核呈毛玻璃樣核改變15例， 占71.4%（圖1）；間質(zhì)明顯膠原化的14例，可見(jiàn)砂粒體的3例。

2.2 MC及TPO的表達(dá) MC在PTM中的陽(yáng)性表達(dá)以中到重度為主，而在良性病變（包括結(jié)甲、甲亢、橋本及腺瘤）僅2例陽(yáng)性，均為弱陽(yáng)性；TPO在PTM的陽(yáng)性表達(dá)只有3例，均為弱陽(yáng)性，而在良性病變中均為陽(yáng)性。MC及TPO在PTM的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%、14.3%，而在良性病變的陽(yáng)性表達(dá)率分別9.5%、100%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表1）。MC及TPO的陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖2-4。合應(yīng)用。

圖1 經(jīng)典型PTM的毛玻璃樣核(HE, ×)

圖2 MC在PTM瘤細(xì)胞胞膜陽(yáng)性表達(dá)（EnVision法, × )

圖3 TPO在PTM中缺表達(dá)（EnVision法, × )

圖4 TPO在甲狀腺乳頭狀增生陽(yáng)性表達(dá)（EnVision法, × )

TPO是一種糖基化血紅素蛋白，存在于甲狀腺濾泡細(xì)胞游離面，是一種與甲狀腺激素合成相關(guān)的酶，在T3T4合成中起重要的催化作用。有學(xué)者曾用RT-PCR方法檢測(cè)甲狀腺組織中TPOmRNA的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)大部分甲狀腺乳頭狀癌、濾泡癌TPOmRNA呈陰性表達(dá)，而大部分結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、橋本病和腺瘤TPOmRNA呈陽(yáng)性表達(dá)[7]。由于TPOmRNA方法儀器設(shè)備要求高，試劑價(jià)格昂貴，操作復(fù)雜，不能做組織定位及回顧性分析，在我國(guó)基層醫(yī)院難以擴(kuò)廣，因此在甲狀腺癌的診斷與鑒別診斷中的作用不理想。何春年等[8]應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡狀腺瘤及良性乳頭狀病變中TPO的表達(dá)情況，其陽(yáng)性表達(dá)率分別為：15.6%、88.9%、100.0%，其敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為：84.4%、94.1%、90.8%。本研究用EnVison法測(cè)定PTM及甲狀腺良性病變中TPO的表達(dá)，陽(yáng)性率分別為：14.3%、100.0%，敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為85.7%、100.0%、92.9%，

表1 MC和TPO在PTM與良性病變中的表達(dá)情況

2.3 MC與TPO的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度比較 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 MC與TPO的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度比較（%）

3 討論

PTM通常是由于其他原因切除甲狀腺或尸檢中的偶然發(fā)現(xiàn)。本文研究的21例手術(shù)病例中，是因?yàn)榧卓海?例，占38.1%）、結(jié)甲（6例，占28.6%）、腺瘤（4例，占19.0%）及橋本甲狀腺炎（3例，占14.3%）切除甲狀腺而發(fā)現(xiàn)PTM的。WHO分類標(biāo)準(zhǔn)[3]，指出PTC細(xì)胞核典型特征是：毛玻璃樣核、核重疊、核溝及核內(nèi)假包涵體。但并非所有PTC都具有上述特征，本文病例中具有毛玻璃樣核特征的15例（71.4%）。在一些良性病變中常見(jiàn)到乳頭狀增生病變，雖然細(xì)胞核沒(méi)有上述的典型特征，當(dāng)出現(xiàn)核增大、淡染等不典型性改變；或乳頭狀結(jié)構(gòu)不明顯，細(xì)胞核呈空泡狀、出現(xiàn)核溝，就難與乳頭狀癌鑒別。Asioli等[4]分析12例橋本甲狀腺炎中出現(xiàn)的實(shí)性細(xì)胞巢，細(xì)胞核均見(jiàn)核溝，其中10例可見(jiàn)空泡狀核，與PTM很難鑒別。當(dāng)組織學(xué)難以鑒別時(shí)，可通過(guò)免疫組織化學(xué)標(biāo)記幫助鑒別。

MC是間皮表面微絨毛的抗原成分，主要用于惡性間皮瘤的診斷，近年來(lái)應(yīng)用于甲狀腺腫瘤的鑒別診斷。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，MC在PTC中的陽(yáng)性表達(dá)率為100.0%[5]。王儀等[6]研究顯示MC在PTC中的陽(yáng)性率100.0%，而在甲狀腺濾泡癌的陽(yáng)性率為87.5%，在PTC中的敏感度更高。本研究中MC的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度分別為：100.0%、90.5%、95.2%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，可見(jiàn)MC在PTM的診斷中敏感度最高，而特異度較差，最好結(jié)合其他標(biāo)記聯(lián)與文獻(xiàn)報(bào)道相符。

所有抗體均會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性，單項(xiàng)指標(biāo)應(yīng)存在局限性。本研究MC在PTM的診斷中敏感度高，特異度不高，而TPO相反，其敏感度不高，特異度高；而且MC和TPO在甲狀腺組織中為反向表達(dá)，在實(shí)際工作中可將兩種指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可起到相互補(bǔ)充的作用，結(jié)合臨床及組織學(xué)將進(jìn)一步提高PTM診斷的準(zhǔn)確性。

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Objective To explore the expression and signifi cance of MC and TPO in papillary thyroid microcarcinoma. Methods The expression of MC and TPO was detected by EnVision immunohistochemical method in 21 cases of papillary thyroid microcarcinoma. Results The moderate to strong staining for MC was observed in papillary thyroid microcarcinoma and only one case was mild staining ,but negative to mild in benign thyroid lesions. 18 cases of papillary thyroid microcarcinoma showed negative for TPO and weakly positive in 3 cases, all cases of benign lesions showed medium to stong positive for TPO. Conclusion The combined detection with MC and TPO will further improve the accuracy of papillary thyoid microcarcinoma.

Thyroid tumor ; Papillary microcarcinoma; MC; TPO

10.3969/j.issn.1009-4393.2011.23.006

526060 廣東省肇慶市第二人民醫(yī)院（羅巧明 張建）