徐紅珍 王露

兩種方法檢測乙肝血清學標志物的比較分析

徐紅珍 王露

目的 探討用酶聯免疫吸附實驗法（ELISA）和時間分辨熒光免疫法（TRFIA）檢測乙肝兩對半的差異。方法 分別用ELISA法和TRFIA法對102例標本進行檢測，分析兩種方法的檢測結果及其檢出模式。研究兩種方法檢測乙肝表面抗原（HBsAg）的線性范圍和最低檢測濃度。結果 兩種方法檢測乙肝兩對半的HBsAg、表面抗體(HBsAb)和e抗原(HBeAg)無顯著差異(P＞0.05),e抗體（HBeAb）和核心抗體（HBcAb）有顯著差異(P＜0.05)。2種方法檢測135、13模式，其結果一致，檢測其它幾種常見模式及少見模式，結果有差別。兩法相比，TRFIA法檢測HBsAg具有相當寬的線性范圍和最低檢測濃度。結論 TRFIA法定量檢測乙肝兩對半具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點，是一種理想的乙肝兩對半定量檢測方法。

酶聯免疫吸附實驗；時間分辨熒光免疫；乙肝兩對半

乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的疾病，血清學標志物乙肝兩對半的檢測為臨床醫(yī)師提供了可靠的依據[1]。ELISA法具有快速簡便、成本低等優(yōu)點，是目前各級醫(yī)院檢驗科免疫學檢測的主要技術手段[2],但該法靈敏度低，存在前滯現象，易受環(huán)境、操作等多種因素的影響造成臨床的誤診和漏診[3]，并且由于ELISA只能定性判斷而無法定量檢測，無法滿足臨床檢測病情、觀察療效、評價預后的需要。TRFIA法是近年來發(fā)展起來的新型免疫標記技術，它是采用鑭系稀土元素及其螯合物（如Eu3+）作為示蹤物標記抗體或抗原來檢測標本中的相應抗原或抗體的技術，是一種靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好的定量檢測方法，極大地滿足了臨床的需求。

筆者將102例標本用ELISA法和TRFIA法檢測，進行分析對比，結果如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

我院自2010年4～10月感染科門診、住院患者及健康體檢人群102例，其中男62例，女40例，平均年齡40.5歲?？崭共杉瘶吮?。

1.2 儀器和試劑

Thermo Moltiskan Mk3酶標儀Elx50洗板機，上海新波EFFICUTA全自動時間分辨儀及其配套試劑，上海新波ANYTEST全自動熒光儀。ELISA法診斷試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司。全自動前處理系統(tǒng)操作，結果由全自動熒光儀測定。為表述方便，用1、2、3、4、5分別表示HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb5項。

1.3.2 用幾份高陽性混合血清進行倍比稀釋，分析兩種方法的線性范圍和最低檢測濃度。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSSI3.0統(tǒng)計軟件進行數據統(tǒng)計與分析，資料組間采用配對x2檢驗。

2 結果

2.1 兩種方法陽性檢出比較（結果見表1）。兩種方法檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg時相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，檢測HBeAb、HbcAb時相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.2 兩種方法檢出陽性模式比較見表2。TRFIA法檢出12種模式，ELISA法檢出9種模式、兩種方法檢測135、13、全陰模式一致，其它模式不一致。

2.3 兩種方法檢測HBsAg的線性范圍見表3。TRFIA法檢測HBsAg最低濃度為0.12ng/ml,ELISA法最低檢測陽性結果為0.50ng/ml。TRFIA法濃度與稀釋比呈線性關系。

3 討論

3.1 通過對比檢測發(fā)現兩種方法在檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg時基本一致，相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；檢測HBeAb、HbcAb時不一致，相比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。表1中HBsAg、HBsAb、HBeAg檢出差異的幾例，均是低濃度表達。HBeAb、

表1 ELISA和TRFIA檢測HBV-M的比較

表2 ELISA和TRFIA檢測HBV-M 組合模式的結果

表3 兩種方法檢測HBsAg的線性范圍

1.3 方法

1.3.1 分別用ELISA法和TRFIA法對102份標本進行檢測，分析他們的陽性檢測情況并作統(tǒng)計學分析，ELISA法為手工法，結果由酶標儀判讀（OD值＞0.105為陽性）。TRFIA法由HBcAb的檢測差異，除了有低濃度的原因外，還有因為在ELISA手工法時，手工操作的誤差造成了假陰性。從表2中發(fā)現，135與13的模式兩種方法檢出一致，可能是135、13大部分是高濃度表達的原因。對其他幾種常見模式的檢出兩種方法不一致，大多是因為ELISA法對低濃度的檢測受限，以致檢出模式發(fā)生變化。對于少見模式的檢出，TRFIA法高于ELISA法，表2中的1245的模式可能是新的亞型再感染，或病毒發(fā)生變異后，表達量低，也有可能是145向245的轉變過程，1235模式可能是亞臨床或非典型性感染早期，也有可能在感染乙肝的窗口期注射了乙肝疫苗；1345模式可能是急性HBV感染趨向恢復慢性攜帶者，135模式向145模式的轉換過程，ELISA法不能檢出低濃度的HbeAg。由表3中可見TRFIA法具有較寬的線性范圍，檢測HBsAg濃度與稀釋比呈線性關系，最低檢測濃度為0.12ng/ml,而ELISA法濃度與稀釋比不成線性關系，最低檢測濃度為0.50ng/ml，表明ELISA法檢測低濃度的標本存在漏檢問題，特別是隱匿性乙型肝炎。

3.2 ELISA法只能提供“陰”、“陽”性結果，而TRFIA法能定量檢測，能為臨床上評價藥物療效提供動態(tài)數據，為疾病的預防、治療、預后提供參考依據。①通過監(jiān)測HBsAg水平變化可評估乙肝病情的發(fā)展。②HBsAb水平反映了疫苗接種效果以及機體對乙肝病毒的免疫狀況。③HBeAg持續(xù)高濃度提示HBV持續(xù)感染。④高濃度的HBeAb提示病情的好轉，在某些時候可能與病情惡化有關，如肝癌、肝硬化。《慢性乙肝防治指南》認為，抗病毒治療的三大治療終點之一就是：HBeAg/HBeAb血清學轉化，定量檢測能動態(tài)觀察HBeAg/HBeAb的濃度變化過程。⑤HBcAb是最敏感的乙肝感染指標，有研究表明抗-HBc濃度波動與病情呈平行關系，與病毒增殖和肝細胞損害有關。

3.3 綜上所述，TRFIA法是一種先進的免疫檢驗新技術，它與傳統(tǒng)的ELISA法相比具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、動態(tài)范圍寬、試劑貨架期長等優(yōu)點[4]，并且彌補了ELISA法不能量化的缺憾，更好地滿足了臨床診斷要求。

[1] 劉磊，劉新啟.HBsAg攜帶者乙肝血清學標志物模式分析[J].當代醫(yī)學.2011，17（6）：28-29

[2] 葉應嫵，王毓，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學出版社，2006:11.

[3] 張運洪，秦蘇，何靜波，等.ELISA法結合MEIA能有效檢測低水平HBsAg[J]. 臨床檢驗雜志，2002,20（2）:103.

[4] 戴長生.Anytest-2000時間分辨熒光分析儀介紹[J].標記免疫分析與臨床，2005，12（2）:121-122.

Objective To explore the difference of ELISA and TRFIA while detecting f ve markers of Hepatitis B virus. Methods 102 samples were measured by ELISA and TRFIA to study their positive rates, then their detecting model were researched, their repetitiveness was checked. The linearity range and stability of two methods was evaluated. Results There are no big differences while HBsAg, HBsAb and HBeAg are detected with the two methods-ELISA and TRFIA(P＞0.05). But there are signif cant differences while HBeAb and HBcAb are detected with thetwo methods(P＜0.05). Their results are the same while 135 and 13 modes are detected. But their results are different while other common modes and seldom modes are detected. The repetitiveness of TRFIA is better than that of ELISA. There are the wider linearity range and the lowest limit of detection of TRFIA.Conclusion TRFIA is a sensitive, specif c, stable and quantitative assay. So it is an ideal method to detect f ve markers of Hepatitis B virus.

Enzyme linked immunosorbentassay; Tim-resolved f uorescence immunoassay; Five makers of hepatitis B virus

10.3969/j.issn.1009-4393.2011.19.016

225500 姜堰市人民醫(yī)院檢驗科（徐紅珍 王露）