顧媛媛，馮麗娜

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040)

復(fù)方腎炎靈膠囊是由炙黃芪、白茯苓、石蓮子、桑螵蛸、炙甘草、杜仲炭等藥材組成，具有健脾益腎，固精止血之功效。臨床用于治療慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、糖尿病腎病和高血壓腎病等疾病。為更好地發(fā)揮藥效，本實(shí)驗(yàn)以黃芪甲苷和甘草酸銨的含量為指標(biāo)［1－2］，采用正交試驗(yàn) L9(34)法對(duì)醇提、水提工藝進(jìn)行篩選并進(jìn)行優(yōu)化研究。

1 儀器與試藥

Waters600E－2487型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司);蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(Alltech 2000);2487型紫外檢測(cè)器;DGG－9240B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱;BP211D型電子天平(德國(guó)Sartorius公司);電熱恒溫水浴鍋(江蘇南通縣通海電器廠);所有藥材購(gòu)于北京同仁堂藥店哈爾濱分店;黃芪甲苷(批號(hào)110781－200512)、甘草酸銨(批號(hào)110731－200614)均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所;甲醇、乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 醇提部分工藝條件的選擇［3］

2．1．1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)浸出原理和影響浸出因素，選定了4個(gè)因素，包括乙醇濃度、用量、提取時(shí)間和提取次數(shù)，每個(gè)因素分3個(gè)水平。見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

2．1．2 提取方法

按處方量稱取黃芪等藥材，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)。加一定濃度的乙醇加熱回流提取，濾過(guò)，收集濾液，回收乙醇，濃縮至稠浸膏，干燥，稱量，粉碎，按照2005版《中國(guó)藥典》炙黃芪項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，用ELSD－HPLC法測(cè)定黃芪甲苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2，表3。

表2 L9(34)計(jì)算表

表3 方差分析表

2．2 水提部分工藝條件的選擇［4］

選定4個(gè)因素，包括浸泡時(shí)間、用水量、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)，每個(gè)因素選3個(gè)水平，見(jiàn)表4。

表4 因素水平表

2．3 提取方法

按處方量稱取炙甘草、白茯苓、桑螵蛸等藥材，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)。加一定量的水煎煮提取，濾過(guò)，收集濾液，濃縮至稠膏，干燥，稱量，粉碎，用流動(dòng)相即甲醇:0.02mol/L 乙酸銨:冰乙酸(76∶24∶1)溶解，按照2005版《中國(guó)藥典》甘草項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，用HPLC法測(cè)定甘草酸銨的含量，結(jié)果見(jiàn)表5，表6。

表5 L9(34)計(jì)算表

表6 方差分析

3 最佳工藝條件的確定

3．1 醇提工藝條件的確定 經(jīng)直觀分析，知B＞A＞D＞C，方差分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則最佳工藝條件為A3B2C3D1，即用5倍量80%乙醇提取2次，每次2h。按照此條件驗(yàn)證3批，結(jié)果與正交試驗(yàn)基本一致，說(shuō)明此工藝穩(wěn)定可行。

3．2 水提工藝條件的確定 方差分析表明，只有因素B有顯著影響，從直觀分析來(lái)看以A2C3D3最佳，但考慮到實(shí)際生產(chǎn)和能源消耗，D因素采用1水平為宜，則最佳工藝條件為B3C3D1A2，即用12倍水，煎煮3次，每次1h，浸泡時(shí)間為60min。按照此條件驗(yàn)證3批，結(jié)果與正交試驗(yàn)基本一致，說(shuō)明此工藝穩(wěn)定可行。

4 討論

根據(jù)本復(fù)方中藥物的化學(xué)成分和主要藥理藥效關(guān)系，工藝中采取了醇提和水提兩部分制備，黃芪為君藥，所以采用黃芪甲苷的含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，黃芪甲苷在紫外200nm處有較弱吸收，且干擾大，靈敏度低。而蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)是一種通用型檢測(cè)器，不但雜質(zhì)峰較少，而且方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。水提部分則選用甘草酸銨作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明所選工藝條件簡(jiǎn)便易行，質(zhì)量控制可靠，適用于大生產(chǎn)。

［1］楊海燕，徐長(zhǎng)根．HPLC－ELSD測(cè)定痛寧片中黃芪甲苷的含量［J］．中成藥，2007，29(3):467 －468．

［2］吳雨川，莊舒翔，尋延濱，等．HPLC法測(cè)定復(fù)方鋁酸鉍片中甘草酸含量［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，37(4):56 －57．

［3］熊汝菊，毛春芹，談瑄忠．多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)化更年康顆粒醇提工藝［J］．中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2008，15(4):61 －63．

［4］劉玉紅，崔紅梅，陳燕，等．正交試驗(yàn)法研究甘草的提取工藝［J］．中成藥，2004，26(3):239 －241．