張學(xué)才， 章淑玲

(福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園藝園林系， 福建 福州 350119)

蝴蝶蘭Phalaenopsisamabilis又名蝶蘭，為蘭科蝴蝶蘭屬常綠草本植物，有“蘭花皇后”的美稱。近年來蝴蝶蘭在福建省的種植面積在不斷擴(kuò)大，筆者發(fā)現(xiàn)蝴蝶蘭苗期根部常發(fā)生腐爛，為探明福建省蝴蝶蘭根腐病發(fā)生的原因，筆者于2010-2011年對蝴蝶蘭根部及介質(zhì)中的真菌種類進(jìn)行了分離和鑒定。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

從福州、廈門、泉州、漳州、龍巖等地采集蝴蝶蘭根腐病的病植株及根際栽培介質(zhì)，用塑料袋密封并帶回實(shí)驗(yàn)室及時分離。

1.2 病組織中真菌的分離

洗凈蝴蝶蘭病根，切取長約5 mm的病健交界處的新鮮組織數(shù)段，根段經(jīng)表面消毒后移入含氯霉素馬鈴薯蔗糖瓊脂平板(PSA)上，25 ℃培養(yǎng)，形成菌落后，及時純化[1]。栽培介質(zhì)經(jīng)表面消毒后培養(yǎng)方法同病根。

1.3 菌株鑒定

分離純化的菌株經(jīng)顯微形態(tài)特征觀察，參照文獻(xiàn)[2-5]進(jìn)行種類鑒定。

1.4 優(yōu)勢菌的致病性測定

從園藝場中選擇健壯無病蝴蝶蘭苗株，植入經(jīng)高壓蒸汽滅菌的栽培介質(zhì)中，待1周成活后分別將分離獲得的優(yōu)勢純菌株制成菌絲懸浮液和孢子懸浮液用以灌根接種，以無菌水作對照，每一菌株接種處理10株，其中5株經(jīng)過針刺傷根處理。接種后進(jìn)行觀察，待植株出現(xiàn)根部腐爛癥狀時，對根部病組織進(jìn)行分離培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀

受感染的蝴蝶蘭植株表現(xiàn)為生長緩慢，根部成段變褐(圖1A )，隨后根系逐漸腐爛，導(dǎo)致葉片萎蔫并由綠色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，進(jìn)而根全部腐爛至植株枯死。根際介質(zhì)中常布滿大量黃褐色菌絲 (圖1B )。該病以蝴蝶蘭苗期最為常見。

A-B.病株；C.立枯絲核菌;D.茄病鐮孢;E.尖孢鐮孢;F.禾谷鐮孢; G.康氏木霉;H.長枝木霉; I.哈茨木霉;J.盤多毛孢;K.多主枝孢霉;L.?，F(xiàn)青霉;M.擬青霉;N.匐枝根霉。圖1 蝴蝶蘭根腐病癥狀及病原菌Figure 1 Fungi speices of butterfly orchid root-rot disease

2.2 根際真菌的鑒定

從蝴蝶蘭根腐病的病根及栽培介質(zhì)中共分離出210株真菌菌株，經(jīng)鑒定為8個屬，12個種，見表1。其中立枯絲核菌、茄病鐮孢和尖孢鐮孢為優(yōu)勢菌，分別占分離物總株數(shù)的26.19%、15.71%和10.95%。立枯絲核菌為蝴蝶蘭根腐病的栽培介質(zhì)中優(yōu)勢菌群，發(fā)病重的植株介質(zhì)中均可分離到該菌。病根中則以茄病鐮孢居多，其次是尖孢鐮孢和立枯絲核菌。

表1 蝴蝶蘭根腐病中根際真菌的形態(tài)特征及分離率

續(xù)表1

病原菌種類形態(tài)特征分離數(shù)(株)病根介質(zhì)合計(jì)株數(shù)分離率%?，F(xiàn)青霉Penicillium frequentans在PSA平板上,菌落絨狀,正面灰綠色;培養(yǎng)基反面米黃色,有些具明顯的輪紋或呼吸滴。分生孢子梗短,頂端稍膨大,帚狀分枝,小梗4-6個密集;分生孢子球形或近球形(圖1L)。94136.19擬青霉Penicilomycessp.在PSA平板上,菌落生長較慢,中間綠色往外迅速變淺為橙黃色,外圈為白色。菌落在培養(yǎng)基反面可見洋紅色輪紋。分生孢子梗和分枝比較分散,分生孢子串生,單胞,卵圓形到紡錘形,無色(圖1M)。5273.33葡枝根霉Rhizopus stolonifer在PSA平板上,菌落初期白色,老熟后灰褐色或黑色;生長后期產(chǎn)生氣生菌絲,并且在基物表面形成緊貼基質(zhì)表面的匍匐絲。假根非常發(fā)達(dá),根狀,褐色;孢囊梗直立,通常2-4株成束,不分枝,光滑,灰褐色;孢子囊近球形,灰褐色,菌絲上一般不形成厚垣孢子(圖1N)。98178.11合計(jì)12288210100

2.3 致病性測定

分別接種立枯絲核菌、茄病鐮孢及尖孢鐮孢于蝴蝶蘭植株，其根部均表現(xiàn)出不同程度的腐爛癥狀。立枯絲核菌傷根接種，發(fā)病率達(dá)80%，無傷接種，發(fā)病率為30%；茄病鐮孢傷根接種，發(fā)病率為60%，無傷接種發(fā)病率為20%；尖孢鐮孢傷根接種，發(fā)病率為50%，無傷接種，發(fā)病率為0。將所有表現(xiàn)發(fā)病癥狀的根進(jìn)行再分離，均得到原接種的病原菌，回分離率達(dá)100%。無菌水對照未表現(xiàn)癥狀，也未分離到以上3種病原菌。

3 討論

蝴蝶蘭根腐病是近年來福建省蝴蝶蘭苗期發(fā)現(xiàn)的一種新病害，也是較嚴(yán)重的一種根部病害，關(guān)于該病的描述較少[6]。本研究發(fā)現(xiàn)蝴蝶蘭苗期根腐病的根際真菌有12種，分別為立枯絲核菌、茄病鐮孢、尖孢鐮孢、禾谷鐮孢、康氏木霉、長枝木霉、哈茨木霉、盤多毛孢、多主枝孢霉、常現(xiàn)青霉、擬青霉和匍枝根霉。其中立枯絲核菌、茄病鐮孢和尖孢鐮孢為優(yōu)勢菌，分別占分離物總株數(shù)的26.19%、15.71%和10.95%。通過柯赫證病過程，證實(shí)以上3種優(yōu)勢菌均可致病。從病原菌分離率和致病性測定來看，立枯絲核菌是主要致病菌，茄病鐮孢次之，再次是尖孢鐮孢。從試驗(yàn)中可以看出，通過傷口侵入是病原菌侵染的主要途徑。因此，蝴蝶蘭在栽培和移栽過程中所造成的人為傷口及地下害蟲的危害均可加重根腐病的發(fā)生。

[1] 方中達(dá).植病研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社,1998：123-124.

[2] 中國科學(xué)院微生物所.常見與常用真菌[M].北京:科學(xué)出版社,1978:77-250.

[3] 王拱辰,鄭重,葉琪明，等.常見鐮刀菌鑒定指南[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社,1996:33-42.

[4] 裘維蕃.菌物大全[M].北京:科學(xué)出版社,1998:885.

[5] 文成敬,陶家風(fēng),陳文瑞.中國西南地區(qū)木霉屬分類研究[J].真菌學(xué)報(bào),1993,12(2):118-130.

[6] 周亞麗.長春地區(qū)蝴蝶蘭根腐病病原菌鑒定及化學(xué)防治效果研究[D].長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院,2007.