王彩紅 劉國(guó)霞 陰軍英

(濱州學(xué)院化學(xué)與化工系，濱州 256603)

苯甲酸、山梨酸均為有機(jī)酸類防腐劑，在酸性條件下具有較強(qiáng)的抗真菌性能，是目前化妝品中常用防腐劑。防腐劑雖然對(duì)抑制和殺滅化妝品中的各種細(xì)菌有良好效果，但對(duì)人體也有潛在的毒副作用，因此國(guó)家《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》[1]規(guī)定了防腐劑的使用限制。目前，測(cè)定苯甲酸和山梨酸的方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜法等[2-7]。筆者采用反相高效液相色譜法，使用0.02 mol/L乙酸銨-甲醇(體積比為85∶15)為流動(dòng)相，較好地分離了苯甲酸和山梨酸，且保留時(shí)間較短。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜儀：LC-10AT型，配SPD-10A紫外檢測(cè)器，日本島津公司；

電子天平：AUY120型，日本島津公司；

臺(tái)式低速離心機(jī)：TD4型，湖南赫西儀器裝備有限公司；

超聲波清洗器：KQ-500B型，昆山市超聲儀器有限公司；

甲醇：色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；

乙酸銨：分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠；

山梨酸：優(yōu)級(jí)純，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；

苯甲酸：優(yōu)級(jí)純，德國(guó)Merck公司；

實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Sinochrom C18色譜柱(4.6 mm×250 mm， 5 μm)；流動(dòng)相：0.02 mol/L乙酸銨-甲醇(體積比為85∶15)；柱溫：室溫；流速：2.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；紫外吸收檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：濃度均為100 μg/mL，準(zhǔn)確稱取苯甲酸、山梨酸各0.010 g，用甲醇溶解配制而成。

苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別吸取適量苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，配成濃度為2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00 μg/mL系列苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品處理

準(zhǔn)確稱取0.500 g樣品于具塞離心管中，加入6.00 mL甲醇，超聲提取15 min，以4 000 r/min離心15 min，將上層清液轉(zhuǎn)移至比色管中。下層沉淀用甲醇超聲提取2次，每次使用甲醇4.00 mL，合并上層清液，用甲醇定容至20 mL。取清液經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，濾液供液相色譜儀測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

山梨酸和苯甲酸紫外光譜顯示，二者在220～290 nm范圍內(nèi)均有吸收，山梨酸紫外最大吸收為254 nm，苯甲酸紫外最大吸收為226 nm，考慮兩種被測(cè)組分的靈敏度，在實(shí)驗(yàn)中選擇分析波長(zhǎng)為230 nm[8]。

2.2 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸氫鈉、甲醇-乙酸銨不同組合、不同配比的流動(dòng)相，最后選定以體積比為85∶15的0.02 mol/L乙酸銨-甲醇混合溶液作流動(dòng)相，在此條件下，化妝品中的對(duì)羥基苯甲酸酯類[9]防腐劑色譜峰不出現(xiàn)，減少了色譜干擾。苯甲酸、山梨酸在10 min內(nèi)出峰且分離效果較好。圖1為兩組分的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.3 工作曲線方程

在1.2色譜條件下，分別取2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00 μg/mL苯甲酸、山梨酸系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣測(cè)定，分別以苯甲酸和山梨酸的質(zhì)量濃度x(μg/mL)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在2.00～12.00 μg/mL范圍內(nèi)，苯甲酸和山梨酸的質(zhì)量濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.999 55、0.999 21，回歸方程分別為y=22 124.623 4x-4 117.958 4，y=30 934.363 5x+849.511。按照3倍信噪比(S/N=3)計(jì)算最低檢出限，得到苯甲酸和山梨酸酸最低檢出限分別為0.055 μg/mL和0.057 μg/mL。

2.4 精密度試驗(yàn)

在選定色譜條件下，分別取濃度為4.00 μg/mL和8.00 μg/mL的苯甲酸和山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果列于表1。由表1可知，RSD為1.16～1.59，說(shuō)明方法的精密度良好。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.5 回收試驗(yàn)

取一定量的化妝品，分別加入一定量的苯甲酸和山梨酸，按樣品處理方法制成待測(cè)溶液，進(jìn)行回收試驗(yàn)，結(jié)果列于表2。

表2 苯甲酸和山梨酸回收試驗(yàn)結(jié)果

從表2可看出，苯甲酸的回收率為97.5%～103.3%，山梨酸的回收率為95.2%～97.2%，說(shuō)明測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

2.6 樣品分析

在與測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品相同色譜條件下對(duì)處理好的化妝品樣品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表3。以護(hù)發(fā)素、眼影為例其色譜圖分別如圖2、圖3所示。

表3 化妝品分析結(jié)果

圖2 護(hù)發(fā)素色譜圖

圖3 眼影色譜圖

我國(guó)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 7916-1987規(guī)定：化妝品中限用防腐劑苯甲酸和山梨酸的最大允許濃度分別為0.5%和0.6%。由表3可知，所檢測(cè)的化妝品中的兩種防腐劑的含量均在規(guī)定范圍內(nèi)。

3 結(jié)語(yǔ)

采用反相高效液相色譜法，選用0.02 mol/L乙酸銨-甲醇為流動(dòng)相測(cè)定了化妝品中苯甲酸和山梨酸的含量。該方法操作簡(jiǎn)便，快速，結(jié)果可靠，可用于日?；瘖y品防腐劑的分析檢測(cè)工作。

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