趙華嗣，王華啟，李晟磊，張國俊

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南鄭州450052;2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南省腫瘤病理重點(diǎn)實(shí)驗室，河南鄭州 450052）

肺鱗癌組織中磷脂酶A2蛋白表達(dá)的相關(guān)性及臨床病理意義

趙華嗣1，王華啟1，李晟磊2，張國俊1

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南鄭州450052;2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南省腫瘤病理重點(diǎn)實(shí)驗室，河南鄭州 450052）

目的探討分泌型磷脂酶A2(sPLA2－Ⅱa）及胞漿型磷脂酶A2(cPLA2）蛋白表達(dá)與肺鱗癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)S－P法檢測60例肺鱗癌組織及20例正常肺黏膜組織中sPLA2－Ⅱa及cPLA2蛋白表達(dá)。結(jié)果肺鱗癌組織中sPLA2－Ⅱa(68.3%）及cPLA2(61.7%）蛋白陽性表達(dá)率均顯著高于正常肺黏膜組織中兩者蛋白陽性表達(dá)率(15.0%、10.0%），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.239、16.027，P＜0.05）;肺鱗癌組織中sPLA2－Ⅱa蛋白陽性表達(dá)率與腫瘤的組織學(xué)分級、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=9.243、4.501及8.287，P＜0.05）;cPLA2蛋白陽性表達(dá)率與腫瘤的組織學(xué)分級、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=6.160、8.013 及4.785，P ＜0.05）。sPLA2－Ⅱa與 cPLA2的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.274，P ＜0.05）。結(jié)論sPLA2－Ⅱa及cPLA2在肺鱗癌的浸潤、轉(zhuǎn)移及癌變過程中起重要作用，sPLA2－Ⅱa及cPLA2的聯(lián)合檢測可望成為肺鱗癌早期診斷和判斷預(yù)后的分子指標(biāo)之一。

分泌型磷脂酶A2;胞漿型磷脂酶A2;肺鱗癌;免疫組織化學(xué)

磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2）是一種具有分解甘油磷脂作用的酶類，在生物界分布較廣泛［1］。既往研究表明，PLA2可合成具有不同生物活性的物質(zhì)，并在磷脂的代謝和更換中發(fā)揮關(guān)鍵作用，PLA2及其代謝產(chǎn)物除具有炎性介質(zhì)作用外，還參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長增殖，與惡性腫瘤關(guān)系密切［2］。關(guān)于PLA2與肺癌浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究，迄今國內(nèi)外均未見報道。本文采用免疫組織化學(xué)S－P法檢測分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2，sPLA2－Ⅱa）及胞漿型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2，cPLA2）在 60 例肺鱗癌組織、20例正常肺黏膜組織中的表達(dá)情況，探討sPLA2－Ⅱa及cPLA2在肺癌發(fā)生、發(fā)展和浸潤、轉(zhuǎn)移中的作用，以期尋找肺癌早期診斷和判斷預(yù)后的分子指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 組織來源 選取2006年6月至2007年6月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院肺癌根治術(shù)中手術(shù)切除的肺癌組織石蠟包埋的標(biāo)本60例(術(shù)前均未行手術(shù)及放、化療），每例肺鱗癌組織切片均有病理學(xué)專家確診，其中男性34例，女性26例，年齡38～75(60.3±8.9）歲。20例正常肺黏膜組織取自非癌患者手術(shù)切除標(biāo)本中的正常肺黏膜組織，其中男性12例，女性8例，年齡27～58(43.9±5.1）歲。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及其他治療。

1.2 主要試劑 兔抗人sPLA2－Ⅱa及cPLA2多克隆抗體購自英國abcam公司，S－P免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色方法 采用免疫組織化學(xué)S－P法，sPLA2－Ⅱa及cPLA2抗體稀釋倍數(shù)均為1∶100及1∶120，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。染色步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性切片作為陽性對照。

1.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定 sPLA2－Ⅱa及 cPLA2陽性信號呈黃色顆粒樣物質(zhì)，均位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。高倍鏡下隨機(jī)選取5個視野(每個視野觀察細(xì)胞數(shù)不少于200個），按陽性細(xì)胞所占百分率及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。采用9分評分制:按照陽性細(xì)胞比例≤10%為1分，10% ～50%為2分，＞50%為3分;按染色強(qiáng)弱:陰性為0分;淡黃色染色為1分;中度黃色染色為2分，棕黃色染色為3分。然后按照“陽性細(xì)胞得分×染色強(qiáng)弱得分”計算總分，總分＜3為陰性，總分≥3為陽性［3－4］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，行χ2檢驗和Spearman相關(guān)分析，檢驗水準(zhǔn) α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 sPLA2－Ⅱa蛋白在肺鱗癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 sPLA2－Ⅱa蛋白陽性表達(dá)主要位于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)中，呈淺黃色至深黃色顆粒樣物質(zhì)(圖1）。其在肺鱗癌組織中的陽性表達(dá)率(68.3%）顯著高于其在正常肺黏膜組織(15.0%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.239，P ＜0.05）(表 1）。sPLA2－Ⅱa 蛋白陽性表達(dá)率與肺鱗癌的組織學(xué)分級、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05）;與患者性別及年齡無關(guān)(P ＞0.05）(表2）。

2.2 cPLA2蛋白在肺鱗癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 cPLA2蛋白陽性著色定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或深黃色顆粒樣物質(zhì)(圖2）。其在肺鱗癌組織中的陽性表達(dá)率(61.7%）顯著高于其在正常肺黏膜組織(10.0%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.027，P ＜0.05）(表 1）。cPLA2蛋白陽性表達(dá)率與肺鱗癌的組織學(xué)分級、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P ＜0.05）;與患者性別及年齡無關(guān)(P ＞0.05）(表2）。

表1 sPLA2－Ⅱa及cPLA2在肺鱗癌組織及正常肺黏膜組織中的表達(dá)

2.3 sPLA2－Ⅱa及cPLA2蛋白在肺鱗癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 在60例肺鱗癌組織中，sPLA2－Ⅱa陽性表達(dá)41例中，其cPLA2蛋白表達(dá)陽性占29例;而sPLA2－Ⅱa表達(dá)陰性的19例中，其cPLA2蛋白表達(dá)陰性的占11例。sPLA2－Ⅱa及cPLA2蛋白在肺鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.274，P ＜0.05）(表3）。

表2 sPLA2－Ⅱa及cPLA2蛋白表達(dá)與肺鱗癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

表3 sPLA2－Ⅱa及cPLA2蛋白在肺鱗癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

肺鱗癌是我國常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤之一，隨著人類生活環(huán)境和飲食結(jié)構(gòu)的改變，肺鱗癌的發(fā)病率雖然呈下降趨勢，但仍是肺部惡性腫瘤的主要類型之一。肺鱗癌的發(fā)生與發(fā)展是一個多因素作用的過程，其中細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路上某些蛋白的異常對細(xì)胞惡變的影響已引起研究者的關(guān)注。長期以來，如何從分子水平尋找肺鱗癌可能的分子治療靶點(diǎn)倍受關(guān)注。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色對比研究了肺鱗癌組織及正常肺黏膜組織中sPLA2－Ⅱa及cPLA2蛋白的變化規(guī)律及其與肺鱗癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。

研究證實(shí)，PLA2是炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵酶，可水解膜磷脂分子中的脂酰鍵，將其水解為各種磷脂酸和氨基醇，產(chǎn)生以花生四烯酸為主的游離脂肪酸及溶血磷脂，進(jìn)一步代謝生成前列腺素、白三烯等活性物質(zhì)并參與炎癥反應(yīng)［5］。既往研究表明，PLA2可合成具有不同生物活性的物質(zhì)，在磷脂的代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用，并參與機(jī)體的多種生理或病理過程，如磷脂重建、肺泡表面活性物質(zhì)代謝、細(xì)胞信號傳遞、宿主反應(yīng)、促進(jìn)血液凝固等［6］。近年來有研究發(fā)現(xiàn)PLA2及其代謝產(chǎn)物除具有炎性介質(zhì)作用外，還參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長增殖，與惡性腫瘤關(guān)系密切［7－8］。

sPLA2－Ⅱa廣泛分布于哺乳動物的組織和細(xì)胞中，但酶的活性變化相當(dāng)大［6］。取人組織標(biāo)本提取液用放射化學(xué)法測定sPLA2－Ⅱa的酶活性得出:消化道、軟骨、腮腺、前列腺含大量sPLA2－Ⅱa，而在骨骼、骨骼肌、心、腦、腎、肝、肺、脾、胰腺、胎盤和羊膜中其活性卻很低［9］。研究表明，sPLA2－Ⅱa可被許多物理、化學(xué)、生物因素及一些細(xì)胞因子激活，sPLA2－Ⅱa可使膜磷脂Sn－2位的脂酰鍵水解后，通過環(huán)氧化酶及脂加氧酶途徑，產(chǎn)生溶血磷脂及不飽和脂肪酸，其既是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的下游效應(yīng)物，也可作為脂質(zhì)炎癥介質(zhì)，參與機(jī)體的一系列生理或病理過程［10］。cPLA2廣泛存在于人類各種組織中，其含量較sPLA2－Ⅱa相對穩(wěn)定，在肺組織和腦海馬組織中含量略高。與sPLA2－Ⅱa一樣，cPLA2的激活也受到許多物理、化學(xué)、生物因素及一些細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。在缺乏Ca2+升高的情況下，cPLA2也能被激活。cPLA2被激活后，水解磷脂，生成花生四烯酸等活性物質(zhì)，啟動炎癥反應(yīng)，引起機(jī)體多種疾?。?1］。

本研究結(jié)果顯示:sPLA2－Ⅱa和 cPLA2在肺鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于正常肺黏膜組織，表明sPLA2－Ⅱa和cPLA2基因激活與肺鱗癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，sPLA2－Ⅱa和cPLA2參與了肺鱗癌的發(fā)病過程，并可能在其中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果還表明，不同組織學(xué)分級及TNM分期肺鱗癌組織中sPLA2－Ⅱa和cPLA2蛋白的表達(dá)亦不同，隨組織學(xué)分級降低，其表達(dá)增高;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者sPLA2－Ⅱa和cPLA2蛋白陽性表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，說明sPLA2－Ⅱa和cPLA2與肺鱗癌的惡性程度有關(guān)系。隨著組織學(xué)分級降低，惡性程度升高，sPLA2－Ⅱa和 cPLA2表達(dá)增高，證明sPLA2－Ⅱa和cPLA2基因在肺鱗癌進(jìn)展過程中與細(xì)胞分化和腫瘤的發(fā)生有關(guān)，而腫瘤的組織學(xué)分級影響腫瘤的預(yù)后，提示sPLA2－Ⅱa和cPLA2與腫瘤的預(yù)后及生物學(xué)行為有關(guān)。作者認(rèn)為sPLA2－Ⅱa和cPLA2可能作為一個影響肺鱗癌浸潤行為和預(yù)后評估的指標(biāo)。但對其作用的分子機(jī)制及其潛在的作用，還有待于進(jìn)一步深入研究。

總之，對sPLA2－Ⅱa及cPLA2的深入研究有利于我們進(jìn)一步了解肺鱗癌的生物學(xué)特性，為肺鱗癌的早期診斷和治療提供一個新的思路。

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The Correlation and Clinical Pathological Significance of the Expressions of Phospholipase A2Proteins in Lung Squamous Cell Carcinoma

Zhao Huasi1，Wang Huaqi1，Li Shenglei2，Zhang Guojun1
(1.Department of Respiratory，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China;2.Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Henan key Laboratory of Tumor Pathology，Zhengzhou 450052，China）

ObjectiveTo explore the relationship of the expressions of secretory phospholipase A2(sPLA2－Ⅱa）and cytosolic phospholipase A2(cPLA2）proteins and the occurrence，development，invasion and metastasis in lung squamous cell carcinoma.MethodsS－P immunohistochemicalmethod was used to detect the expressions of sPLA2－Ⅱa and cPLA2protein in 60 cases of lung squamous cell carcinoma tissues and 20 cases of normal lung epithelium tissues.ResultsThe positive expression rates of sPLA2－Ⅱa(68.3%）and cPLA2(61.7%）proteins in lung squamous cell carcinoma tissues were obviously higher than those in normal lung epithelium tissues(protein positive ratios:15.0%and 10.0%），there were significant differences among the groups(χ2=17.239 and 16.027，P ＜0.05）.The sPLA2－Ⅱa protein positive expression rate was closely correlated with the histological grade，TNM grade and lymphatic metastasis in lung squamous cell carcinoma tissues(χ2=9.243，4.501 and 8.287;P ＜0.05）.The cPLA2protein positive expression ratewas closely correlated with the histological grade，TNM grade and lymphaticmetastasis in lung squamous cell carcinoma tissues(χ2=6.160，8.013 and 4.785;P ＜0.05）.Therewas positive correlation between the protein expressions of sPLA2－Ⅱa and cPLA2(r=0.274，P ＜0.05）.ConclusionsPLA2－Ⅱa and cPLA2can play important roles in the infiltration，metastasis and carcinomatous change of themucosa epithelium in lung squamous cell carcinoma.United examining sPLA2－Ⅱa and cPLA2can become one ofmolecular index in the early diagnosis and prognostic judgement of lung squamous cell carcinoma.

secretory phospholipase A2;cytosolic phospholipase A2;lung squamous cell carcinoma;immunohistochemistry

R734.2;R730.23

A

1673－5412(2011）03－0185－04

張國俊(1966－），男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事呼吸系統(tǒng)腫瘤的相關(guān)研究。E－mail:zgj@zzu.edu.cn

2011－04－30）