金欣 陳建魁 于農(nóng) 尹秀云 左向華 宋世平 佟利威 許曉躍 田曙光

真菌 D-葡聚糖檢測(cè)對(duì)侵襲性肺部真菌感染的臨床意義

金欣 陳建魁 于農(nóng) 尹秀云 左向華 宋世平 佟利威 許曉躍 田曙光

目的 探討血漿(1,3)-β-D-葡聚糖抗原檢測(cè)對(duì)慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者侵襲性肺部真菌感染的臨床價(jià)值。方法 采用北京金山川公司MB-80微生物動(dòng)態(tài)快速檢測(cè)系統(tǒng)及 GKT-5M Set動(dòng)態(tài)真菌檢測(cè)試劑盒定量檢測(cè) 85例COPD合并肺侵襲性真菌感染(IFI)患者(IFI組)血漿中(1,3)-β-D-葡聚糖含量,并與 40例健康志愿者(正常對(duì)照組)比較。結(jié)果 正常對(duì)照組(1,3)-β-D-葡聚糖水平為 2.32～15.32pg/ml,確診 IFI組的(1,3)-β-D-葡聚糖水平為 8.23～2289.56pg/ml,該檢測(cè)方法對(duì) IFI的敏感性為 88.9%,特異性為 97.5%,PPV為 97.6%,NPV為 88.6%。結(jié)論 血漿(1,3)-β-D-葡聚糖抗原檢測(cè)可在擬診早期對(duì) COPD患者是否感染真菌提供可靠信息。

(1,3)-β-D-葡聚糖；慢性阻塞性肺疾??；診斷

侵襲性真菌感染(IFI)是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的嚴(yán)重并發(fā)癥。近年來,IFI的發(fā)生率呈上升趨勢(shì),而且由于 IFI早期診斷困難,患者病死率高,已成為困擾臨床的一大難題。研究表明,在機(jī)體的體液中檢測(cè)到(1,3)-β-D-葡聚糖是診斷深部真菌感染的有效依據(jù),因此我們檢測(cè)了我院呼吸科收治的COPD合并肺 IFI的 45例患者的血漿(1,3)-β-D-葡聚糖含量,進(jìn)行回顧性分析,探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年 8月至 2010年 3月我院呼吸科收治的 COPD合并肺 IFI患者 45例,其中男 25例,女 20例；年齡40～85歲,平均年齡 65歲。正常對(duì)照組 40例,均來自健康志愿者。診斷依據(jù)為 2007年 1月中華結(jié)核和呼吸雜志發(fā)表的COPD診治指南(2007年修訂版)[1]及 2001年 5月我國(guó)衛(wèi)生部制定的醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)(試行)[2]。2組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 儀器和試劑 MB-80微生物動(dòng)態(tài)快速檢測(cè)系統(tǒng)、T01智能恒溫儀、水域槽以及 GKT-5M Set動(dòng)態(tài)真菌檢測(cè)試劑盒,均由北京金山川科技發(fā)展公司提供。

1.3 方法 用無熱源肝素鈉抗凝真空采血管采集靜脈血2ml,3 000 r/min離心 1 min,取 0.1 ml富含血小板血漿加入0.9ml的樣品處理液D中,混勻后置于 70℃恒溫 10min,取出后立即置于冰水浴中 5m in,為待測(cè)血漿樣品。取待測(cè)血漿樣品 0.2m l直接加入酶反應(yīng)主劑 A中,完全溶解后移至標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)管中,快速插入MB-80微生物動(dòng)態(tài)快速檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。正常參考值為 10 pg/m l。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以±s表示,采用 t檢驗(yàn),采用四格表計(jì)算(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)的敏感性、特異性、陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組(1,3)-β-D-葡聚糖水平比較 IFI組(1,3)-β-D-葡聚糖水平為 8.23～2289.56 pg/ml,平均(352.3±265.2)pg/ml,正常對(duì)照組(1,3)-β-D-葡聚糖水平 2.32～15.32 pg/ml,平均(8.42±6.6)pg/ml,2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.2 對(duì) IFI的各項(xiàng)診斷指標(biāo)評(píng)價(jià) 根據(jù)回顧性診斷標(biāo)準(zhǔn),以IFI組為真陽性、正常對(duì)照組為真陰性作四格表,該檢測(cè)方法對(duì)IFI的敏感性為 88.9%,特異性為 97.5%,PPV為 97.6%,NPV為 88.6%。見表 1。

表1 (1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)結(jié)果分析評(píng)價(jià)cut-off=10 pg/m l

2.3 (1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)對(duì) COPD患者臨床診斷 IFI感染的結(jié)果 根據(jù)侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn),(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)排除在微生物學(xué)證據(jù)以外,確診 IFI患者 2例,高度可疑IFI患者 28例,在 85例(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)患者中,有 40例患者(1,3)-β-D-葡聚糖含量大于 10 pg/m l,其中確診和高度可疑 IFI者 2例,可疑 IFI 37例,非 IFI組 1例,診斷標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)結(jié)果則高度可疑 IFI由 28例增加至 37例。

3 討論

真菌是人體正常菌群的組成部分,寄生于人體皮膚與黏膜,在機(jī)體免疫功能減低時(shí)可大量生長(zhǎng)繁殖并致病。COPD患者長(zhǎng)期反復(fù)感染,肺功能毀損,慢性消耗,免疫力低下,呼吸系統(tǒng)防御功能降低,正常寄生在口咽部的真菌得以蔓延至身體其他部位造成感染,且老年人腎臟率過功能減退,易導(dǎo)致抗生素在體內(nèi)蓄積繼而菌群失調(diào)。COPD患者并發(fā)真菌感染預(yù)后較差,病死率很高,有文獻(xiàn)報(bào)道病死率達(dá) 15.7%[3]。原因之一就是深部真菌感染的早期診斷困難,造成了抗真菌治療的延遲。

近年通過檢測(cè)血液中真菌抗原或代謝物來診斷深部真菌感染的研究很多[4,5]。研究表明,葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中,占其干重的 80%～90%。當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后,經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后,(1,3)-β-D-葡聚糖可從細(xì)胞壁中釋放出來,使血液中(1,3)-β-D-葡聚糖含量升高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時(shí),機(jī)體免疫可迅速清除(1,3)-β-D-葡聚糖,在淺部真菌中(1,3)-β-D-葡聚糖未被釋放出來,故在體液中的量不增高。原核生物、病毒和人類的細(xì)胞都沒有葡聚糖,因此血液中葡聚糖含量升高提示深部真菌感染,常見的病原菌為念珠菌和曲霉菌。(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)作為深部真菌感染檢測(cè)手段用于念珠菌血癥的早期診斷優(yōu)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)法,具有早期、快速、適用范圍廣的優(yōu)勢(shì),目前主要用于深部念珠菌和曲霉菌感染的診斷、高危人群的監(jiān)測(cè)以及療效預(yù)后的評(píng)價(jià),有研究顯示(1,3)-β-D-葡聚糖在體內(nèi)的變化與病程呈平行關(guān)系,連續(xù)監(jiān)測(cè)葡聚糖水平有益于預(yù)測(cè)抗真菌治療的效果[6]。

葡聚糖雖然存在于絕大多數(shù)真菌的細(xì)胞壁,但是仍有部分真菌感染無法通過(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)診斷,如隱球菌屬和結(jié)合菌屬,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)為陰性,而曲霉菌感染時(shí)葡聚糖上升的程度與宿主免疫力和病原數(shù)量有關(guān),只要曲霉菌被厚壁的纖維組織包裹,葡聚糖就很難進(jìn)入血液,還有研究表明(1,3)-β-D-葡聚糖對(duì)煙曲霉感染的敏感性很低[7]。有研究證實(shí)某些物質(zhì)中存在 1,3)-β-D-葡聚糖類似物,會(huì)造成假陽性結(jié)果[8]。如:以真菌為原料制成的抗生素。某些抗腫瘤藥物如香姑菌多糖和磺胺類藥物的使用。多發(fā)性骨髓瘤的患者使用丙種球蛋白等免疫球蛋白制劑的患者,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)為陽性。因此,在診斷上還要結(jié)合病情具體情況具體分析。

總之,(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)可作為 COPD患者并發(fā)深部真菌感染的的初篩診斷方法,指導(dǎo)臨床對(duì) COPD合并肺 IFI患者的治療,減低病死率。

1 醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組.慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版).中華結(jié)核和呼吸雜志,2007,30:8-17.

2 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)(試行).中華醫(yī)學(xué)雜志,2001,81:314-315.

3 劉永碧,馬厚勛,曾凡榮,等.深部念珠菌感染 280例臨床分析.中華醫(yī)院感染雜志,2002,8:31.

4 金欣,陳建魁,尹秀云.侵襲性真菌感染實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展.中國(guó)公共衛(wèi)生,2007,23:1401-1403.

5 Yoshida K.Recent advances of serodiagnosis for systemic fungal infections.Nippon Ishinkin GakkaiZasshi,2006,47:135-142.

6 李世榮,王紅,文艷.血漿(1,3)-β-D-葡聚糖與抗深部白色念珠菌感染藥物療效關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,6:20-22.

7 Hachem RY,Kontoyiannis DP,Chemaly RF,et al.Utility of Galactomannan Enzyme Immunoassay and(1,3)-D-Glucan in Diagnosis of Invasive Fungal Infections:Low Sensitivity for Aspergillus fumigatus Infection in Hematologic Malignancy Patients.Journal of ClinicalMicrobiology,2009,47:129-133.

8 高蕾,周新.(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)在侵襲性真菌感染中的診斷意義.中國(guó)感染與化療雜志,2008,8:123-125.

R 379；R 446.53

A

1002-7386(2011)03-0378-02

10.3969/j.issn.1002-7386.2011.03.030

100071 北京市,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科

陳建魁,100071 軍事醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科；E-mail:chenjiankui@hotmail.com

2010-10-21)