孫 敏，劉紅斌，劉 波，字 剛，王京昆

(云南省藥物研究所，云南昆明 650111)

燈盞花素 (Fibrauretinum)為燈盞花中提取的黃酮類(lèi)成分，以燈盞乙素為主。燈盞花素具有擴(kuò)張血管、增加腦血流量和心臟冠脈流量、降低血液粘度、改善微循環(huán)等作用，用于治療腦血栓、腦梗塞、中風(fēng)后癱瘓等疾病，療效確切。

由于燈盞花素半衰期短，導(dǎo)致目前在臨床上應(yīng)用的燈盞花素制劑存在諸多缺陷:片劑服用次數(shù)多，生物利用度低，體內(nèi)消除迅速;注射劑和凍干粉針劑存在藥物體內(nèi)代謝過(guò)快，血藥濃度難持久平穩(wěn)維系，及給藥不方便和不適于長(zhǎng)期給藥等缺點(diǎn)，以上狀況嚴(yán)重影響了燈盞花素藥效的發(fā)揮。因此研制一種可以提高燈盞花素生物利用度和方便給藥的緩釋劑型，具有積極的意義。

緩釋微丸屬多劑量劑型，具有較好的療效重現(xiàn)性和較小的不良反應(yīng)發(fā)生率，其優(yōu)越性［1］如下:微丸很少受消化道輸送食物節(jié)律 (尤其是幽門(mén)啟閉)的影響，藥物的吸收重現(xiàn)性好;微丸在胃腸道表面分布的面積增大，使生物利用度提高而局部刺激減少或消除;其釋藥行為是組成一個(gè)劑量的多個(gè)小丸釋藥行為的總和;微丸的流動(dòng)性好，粒徑均勻，不易壓碎，易于處理 (如包衣、分劑量);通過(guò)幾種不同釋藥速率的小丸組合，可獲得理想的釋藥速率，達(dá)到預(yù)期的血藥濃度，并能維持平穩(wěn)的、長(zhǎng)時(shí)間的有效濃度。因而，制成緩釋微丸，有利于提高生物利用度，更好的發(fā)揮藥效。

1儀器與材料

1．1 原料藥與輔料

燈盞花素 (云南玉溪萬(wàn)方天然藥物有限公司)、微晶纖維素 (湖州展望化學(xué)品公司)、淀粉(廊坊淀粉有限公司)、糊精 (華北制藥康欣有限公司)、PEG4000(上海醫(yī)藥試劑有限公司)、乳糖(國(guó)際戴維林有限公司)、十二烷基硫酸鈉 (淮南山河藥用輔料有限公司)、EC(山東瑞泰有限公司)、野黃芩苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所)。

1．2 儀器與設(shè)備

E-50型單螺旋擠出機(jī)(重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司)、CGC-350型滾圓機(jī) (重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司)、JB-10型攪拌機(jī) (江蘇泰州制藥機(jī)械廠)、FLP-5型流化沸騰造粒機(jī) (常州佳發(fā)機(jī)械廠)、ZRS-8G型智能溶出試驗(yàn)儀 (天津大學(xué)無(wú)線電廠)、SHIMADZU型紫外分光光度儀(日本島津)。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2．1 載藥微丸制備工藝

2．1．1 載藥丸芯的制備方法

稱取燈盞花素及輔料分別過(guò)80目篩后，混合均勻，用適量的純化水加入混勻的原輔料中，制成適宜軟材，以40Hz擠出頻率過(guò)擠出機(jī) (0．8mm孔徑)，制得長(zhǎng)度及大小合適的圓柱狀顆粒，將圓柱狀顆粒及時(shí)投入拋圓機(jī)中，調(diào)節(jié)鼓風(fēng)頻率為15Hz，調(diào)節(jié)滾圓轉(zhuǎn)速頻率，進(jìn)行滾圓，待丸粒圓整后，取出，干燥，即得載藥丸芯。

2．1．2 充填劑輔料的考察

本試驗(yàn)分別選用微晶纖維素聯(lián)合乳糖、微晶纖維素聯(lián)合淀粉、淀粉、糊精聯(lián)合淀粉為填充劑，以純化水為潤(rùn)濕劑，以滾圓轉(zhuǎn)速頻率600rpm、滾圓時(shí)間2min為工藝參數(shù)，采用擠出滾圓法，制備燈盞花素微丸。具體考察試驗(yàn)見(jiàn)表1。

表1 充填劑輔料的篩選 (g/1 000粒)

本試驗(yàn)選用平面臨界角、收率、脆碎度、外觀為考察指標(biāo)，對(duì)所制備的燈盞花素微丸進(jìn)行考察。在所有微丸評(píng)價(jià)指標(biāo)中，圓整度直接反映了微丸真球度的好壞，是微丸成型的重要指標(biāo)，本試驗(yàn)采用平面臨界角測(cè)定法來(lái)表征微丸圓整度。平面臨界角:將5g微丸置于10cm×5cm平板上，將平板一側(cè)抬起，測(cè)量在80%的小丸開(kāi)始滾動(dòng)時(shí)傾斜平面與水平面所形成的夾角，此角越小，小丸圓整度越高。堆密度的測(cè)定:稱取一定量微丸 (m)，置于10mL量筒中，從距離桌面5cm處下落，測(cè)定其體積 (V)，堆密度 (d)由公式d=m/V求出。微丸收率:即稱取20～40目的丸粒重量占總微丸重量的比值。脆碎度:稱取重量W1(10g)的微丸放入片劑脆碎儀中，轉(zhuǎn)動(dòng)100次，取出，用40目篩篩分，稱量留在篩網(wǎng)上的微丸重量W2，根據(jù)脆碎度 (F)=(W1-W2)/W1計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表2。

從以上試驗(yàn)結(jié)果可知，選用處方R3(淀粉為成型輔料)制出的燈盞花素微丸，其丸粒形狀不規(guī)則、脆碎度差、粒度分布帶寬，不能滿足要求;而采用處方R2(淀粉和微晶纖維素為成型輔料)和R4(淀粉和糊精為成型輔料)制出的燈盞花素微丸，其圓整度、脆碎度、收率有所提高，但微丸中存有一定量的啞鈴形丸和粘結(jié)形丸;采用處方R1(微晶纖維素和乳糖為成型輔料)制出的燈盞花素微丸，相比之下，微丸的脆碎度、圓整度和收率都比較好，因此確定微晶纖維素和乳糖為燈盞花素微丸的成型輔料。

表2 考察結(jié)果表

2．1．3 擠出潤(rùn)滑劑考察

燈盞花素微丸采用0．8mm擠出孔徑、40Hz擠出頻率制粒，雖然擠出粒速率基本可以滿足要求，但其效果仍不太理想，為進(jìn)一步提高生產(chǎn)效率，有必要通過(guò)工藝手段提高擠出速率。通過(guò)查閱文獻(xiàn)和實(shí)踐摸索，我們發(fā)現(xiàn)在原輔料中加入少量的十二烷基硫酸鈉為擠出潤(rùn)滑劑制備軟材，能夠有效提高擠出粒速率，并通過(guò)試驗(yàn)篩選，確定擠出潤(rùn)滑劑十二烷基硫酸鈉的用量在5mg/粒以上，就能夠顯著提高燈盞花素軟材的擠出速率，從而滿足實(shí)際生產(chǎn)需求。

2．1．4 滾圓時(shí)間考察

通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，滾圓時(shí)間對(duì)載藥微丸的收率和圓整度影響較大，滾圓時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，將導(dǎo)致已滾圓的丸粒過(guò)度碰撞磨蝕，而產(chǎn)生一定量的細(xì)粉，使燈盞花素微丸的收率下降;滾圓時(shí)間過(guò)短，制得的燈盞花素載藥微丸硬度太低，且有一定量的長(zhǎng)顆粒因來(lái)不及打斷而成為橢圓體，影響了微丸的外觀和收率。

2．1．5 滾圓機(jī)轉(zhuǎn)速頻率考察

在燈盞花素載藥微丸的滾圓試驗(yàn)中，微丸在旋轉(zhuǎn)床中主要受到自身重力、空氣懸浮力、離心力、旋轉(zhuǎn)盤(pán)摩擦力的共同作用。通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，滾圓機(jī)轉(zhuǎn)速頻率過(guò)快時(shí)，丸粒由于離心力的作用，受到強(qiáng)烈撞擊而產(chǎn)生大量細(xì)粉，載藥微丸收率變低，同時(shí)制得的燈盞花素微丸丸徑降低;滾圓機(jī)轉(zhuǎn)速頻率過(guò)慢時(shí)，燈盞花素載藥微丸圓整度低，并形成大量的橢圓體，外觀達(dá)不到要求。

2．1．6 最佳工藝的選擇

根據(jù)以上試驗(yàn)考察，在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上選擇微晶纖維素用量、滾圓時(shí)間、滾圓轉(zhuǎn)速頻率為考察因素，各取3水平，采用L9(34)表設(shè)計(jì)試驗(yàn)。以0．8mm擠出孔徑、40Hz擠出頻率、15Hz鼓風(fēng)頻率及正交試驗(yàn)表中的滾圓速度、滾圓時(shí)間為試驗(yàn)工藝參數(shù)，按照正交試驗(yàn)安排，制備燈盞花素微丸。以微丸圓整度 (平面臨界角Ф)及微丸收率 (Y)加權(quán)綜合評(píng)分，綜合評(píng)分S=Y-2Ф。水平因素表見(jiàn)表3，正交設(shè)計(jì)表見(jiàn)表4，正交試驗(yàn)方差分析表見(jiàn)表5。

表3 水平因素表

表4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及直觀分析結(jié)果

表5 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

分析表4和表5，結(jié)果表明對(duì)燈盞花素載藥微丸成丸的主要影響因素C微晶纖維素量，其次是滾圓轉(zhuǎn)速頻率，滾圓時(shí)間影響最小，工藝條件以A3B3C3為最佳。

2．1．7 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

由于以上正交試驗(yàn)安排表中沒(méi)有A3B3C3試驗(yàn)，因此根據(jù)最佳A3B3C3方案，按照以上正交試驗(yàn)篩選出的輔料量及工藝參數(shù) (0．8mm擠出孔徑、40Hz擠出頻率、15Hz鼓風(fēng)頻率、800rpm滾圓轉(zhuǎn)速頻率、3min滾圓時(shí)間)，制備3批燈盞花素微丸，每批1 000粒。經(jīng)檢測(cè)3批樣品的平面臨界角Ф(°)為:18．42，18．36，18．48，3 批樣品的收率(%)為:94．30，94．3，94．73。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，按最佳工藝條件A3B3C3制備燈盞花素微丸，有效提高了燈盞花素微丸的圓整度及收率。

2．2 載藥微丸的緩釋包衣

本試驗(yàn)采用乙基纖維素 (EC)為阻滯劑，以聚乙二醇4 000為致孔劑，并加入一定量的增塑劑鄰苯二甲酸二乙酯，組成緩釋包衣材料，用75%濃度的乙醇溶解后制得包衣液。緩釋包衣具體操作是將燈盞花素載藥微丸置流化床中，開(kāi)機(jī)，調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)流量，保持微丸正常沸騰，采用底噴式包衣，在正式噴液前，于45℃預(yù)熱微丸3min，床溫控制在50℃左右，噴氣壓力控制在0．4MPa，由慢至快調(diào)節(jié)恒流泵轉(zhuǎn)速為0．5～2．0r/min。微丸包衣合格后，干燥20min取出，即得燈盞花素緩釋微丸。取以上緩釋微丸填膠囊后，得燈盞花素緩釋微丸膠囊。

2．3 體外釋放度研究

2．3．1 包衣增重對(duì)緩釋微丸釋放度 (n=6)的影響

本試驗(yàn)按照上述緩釋膜控包衣法，制備緩釋包衣增重為3．5%，5．5%，7．5%的燈盞花素緩釋微丸，填充膠囊后，進(jìn)行了釋放度考察，釋放度結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明:包衣聚合物的增重對(duì)緩釋微丸的釋放效果具有非常重要的影響，包衣增重為3．5%時(shí)，由于包衣聚合物增重過(guò)低無(wú)法形成完整連續(xù)的衣膜，導(dǎo)致藥物釋放過(guò)快;包衣增重為7．5%時(shí)，緩釋衣膜過(guò)厚，藥物釋放不完全;當(dāng)包衣增重為5．5%時(shí)，衣膜增重合適，燈盞花素緩釋微丸膠囊3個(gè)取樣點(diǎn)的釋放度更接近中國(guó)藥典2005年版《緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則》中規(guī)定，能達(dá)到理想的緩釋效果。

圖1 不同包衣增重的釋放度圖

圖2 不同轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速下的釋放度圖

2．3．2 轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速對(duì)緩釋微丸釋放度 (n=6)的影響

取緩釋包衣增重為5．5%的燈盞花素緩釋微丸，填充膠囊后，以900mL pH 6．8的磷酸鹽緩沖溶液為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速分別為50 r/min，75 r/min，100 r/min，考察在不同轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速下的釋放度，按照2．3．3項(xiàng)方法測(cè)定，釋放度結(jié)果見(jiàn)圖2。經(jīng)兩兩之間t檢驗(yàn)結(jié)果表明，各轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速下緩釋微丸膠囊在1 h、6h、12h的釋放度差異均無(wú)顯著性(P＞0．05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在不同的轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速下，對(duì)燈盞花素緩釋微丸膠囊釋放度影響不大。

2．3．3 樣品不同留樣時(shí)期對(duì)緩釋微丸釋放度 (n=6)的影響

本試驗(yàn)制備的燈盞花素緩釋微丸膠囊經(jīng)鋁塑泡罩包裝后，置常溫常濕下分別留樣考察0個(gè)月，3個(gè)月，6個(gè)月，12個(gè)月，按照2．3．3項(xiàng)方法測(cè)定，釋放度見(jiàn)圖3。經(jīng)兩兩之間t檢驗(yàn)結(jié)果表明，各留樣時(shí)期的緩釋微丸膠囊在1h，6h，12h的釋放度差異均無(wú)顯著性 (P＞0．05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:燈盞花素緩釋微丸膠囊各留樣期的釋放度沒(méi)有明顯變化，質(zhì)量穩(wěn)定。

2．3．4 緩釋模型擬合考察試驗(yàn)

本試驗(yàn)對(duì)緩釋包衣增重5%的燈盞花素緩釋微丸膠囊的釋藥速率曲線，采用Higuchi方程進(jìn)行了釋藥模型擬合，釋藥模型擬合結(jié)果:Q=0．299t1/2-0．0903，r=0．9986。體外釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，緩釋包衣增重5%的燈盞花素緩釋微丸膠囊，釋放行為符合Higuchi方程，且終點(diǎn)累計(jì)釋放度大于90%，具有良好的緩釋效果特征。

4 討論與小結(jié)

在體外釋放度的釋放介質(zhì)選擇上，考慮到燈盞花素具有在水中難溶、不溶于酸、在堿液中溶解的性質(zhì)，并通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):燈盞花素在人工胃液和水中難溶，但溶解于1%的十二烷基硫酸鈉溶液以及pH 6．8的磷酸鹽緩沖溶液，為了接近于人體的正常生理環(huán)境，最終選擇了pH 6．8的磷酸鹽緩沖溶液為體外釋放度的釋放介質(zhì)。

影響緩釋制劑的穩(wěn)定性的因素有很多，但作為先決條件的載藥丸芯質(zhì)量尤為重要，它不僅是制劑成型的前提保證，而且其圓整度對(duì)燈盞花素緩釋微丸的釋藥行為影響極大，因此在工作中就其載藥丸芯的制備工藝進(jìn)行了大量試驗(yàn)，摸索出了最佳工藝。本工藝采用擠出滾圓法制備載藥丸芯，再在流化床上采用緩釋膜控包衣法制備燈盞花素緩釋微丸的工藝，是目前制備緩釋制劑工藝中較為穩(wěn)定可行的方法，尤其適合大規(guī)模生產(chǎn)。本試驗(yàn)制備燈盞花素緩釋微丸在防爆型流化床中進(jìn)行，所制備的緩釋衣膜均勻細(xì)膩，工藝重現(xiàn)性較好，同時(shí)所采用的緩釋包衣液與乙基纖維素水分散體比較，具有價(jià)格便宜、質(zhì)量穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，可根據(jù)制備過(guò)程中遇到的實(shí)際問(wèn)題及時(shí)調(diào)整配方，且所制備的燈盞花素緩釋微丸無(wú)須熱處理，其體外釋藥緩慢、持續(xù)、穩(wěn)定。

［1］陸辛逸．國(guó)內(nèi)外口服釋藥微丸的制備及展望 ［J］．機(jī)電信息，2004，72(12):15．

［2］王文剛，崔光華．?dāng)D出—滾圓制微丸工藝的進(jìn)展［J］．中國(guó)新藥雜志，2001，10(9):661-664．

［3］國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典2000版第二部 ［M］，北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:75(附錄XC)．

［4］李戰(zhàn)，張自強(qiáng)，黃海燕，等．高效液相色譜法測(cè)定燈盞花素緩釋片的含量及釋放度［J］．中國(guó)生化藥物雜志，2004，25(2):98-99．