(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥局,黑龍江佳木斯154003)

正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化芍藥苷的超聲提取工藝

田 樺,張大偉,王惠娟

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥局,黑龍江佳木斯154003)

目的:優(yōu)選赤芍超聲提取的最佳工藝條件,為赤芍中芍藥苷的提取提供依據(jù)。方法:采用正交試驗(yàn)法,用正交試驗(yàn)考查4種因素(乙醇濃度、料液比、超聲時(shí)間、超聲頻率)對(duì)其含量的影響,以芍藥苷含量為檢測(cè)指標(biāo)。結(jié)果:經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)選出赤芍超聲提取的最佳工藝條件。結(jié)論:本試驗(yàn)結(jié)果為提取赤芍中的芍藥苷提供依據(jù)。

赤芍;芍藥苷;正交試驗(yàn);超聲提取

赤芍為毛茛科植物芍藥(Paconia lectifloraPall)的干燥根[1]。其主要成分芍藥苷是蒎烷單萜苷類(lèi)化合物[2],為常用活血化瘀藥,具有清熱涼血、祛瘀止痛、清肝瀉火等功效。芍藥苷為赤芍的主要藥效成分,具有解毒、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、血管擴(kuò)張、抗炎等藥理活性,并有活血、化瘀等功效[3]。國(guó)內(nèi)外對(duì)赤芍的化學(xué)成分進(jìn)行了較多的研究,但對(duì)從赤芍中提取主成分芍藥苷工藝過(guò)程的研究報(bào)道卻很少[4,5],為深入研究其藥用價(jià)值,提高其提取工藝的合理性,本實(shí)驗(yàn)以赤芍中芍藥苷含量為指標(biāo),采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選最佳提取工藝,為大量生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器及材料

1.1 儀器

2695型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司);KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);KDM型調(diào)溫電熱套(山東鄴城華魯電熱儀器有限公司);FA-2004電子分析天平(上海恒平科技儀器有限公司);FZ102型植物粉粹機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.2 試劑與材料

芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);赤芍飲片(購(gòu)于佳木斯市金天大藥房,經(jīng)佳木斯大學(xué)劉娟教授鑒定為赤芍)。無(wú)水乙醇(分析純)天津;蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 測(cè)定條件

2.1.1 色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;甲醇-水(30¨70)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算,應(yīng)不低于3 000。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品15mg,置50mL容量瓶中,加30%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。對(duì)照品溶液濃度為0.30mg·mL-1。

2.1.3 供試品溶液的制備:取同一批赤芍藥材9份,粉碎,每份取5.0g加不同液料比的水,按L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn),每個(gè)實(shí)驗(yàn)超聲提取平行3次試驗(yàn),合并提取液,合并提取液取平均值,濾過(guò)定容,得1～9號(hào)樣品。

2.1.4 回收試驗(yàn):取已知含量的同批樣品(芍藥苷含量2.512 8%)9份,分為3組,分別精密加入25mL不同濃度的芍藥苷對(duì)照品的30%甲醇溶液,按供試品制備方法處理,測(cè)定,計(jì)算平均回收率為99.48%,RSD=1.70%。

2.2 超聲提取影響因素與水平

選取乙醇濃度 (A)、料液比 (B)、超聲時(shí)間 (C)、超聲頻率(D)4個(gè)因素,設(shè)計(jì)3個(gè)水平,選用L9(34)正交表,見(jiàn)表1。測(cè)試方法與正交試驗(yàn)分別精密吸取供試品溶液各5mL加適量甲醇,振搖過(guò)濾,用30%甲醇定容至250mL,用微孔濾膜濾過(guò),分別吸取10μL注入高效液相色譜儀,測(cè)定峰面積,計(jì)算即得(做平行樣取平均值),正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 試驗(yàn)因素水平表

表2 超聲提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2分析正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果,其結(jié)果以大為好,綜合平均值越大,說(shuō)明該水平比其他水平優(yōu),通過(guò)綜合平均值可以選擇每個(gè)因素最優(yōu)的試驗(yàn)水平,各因素最優(yōu)水平組合在一起就是最佳方案。各因素影響效果依次為B＞D＞C＞A,影響R值最大的為A因素,說(shuō)明A因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響較大,對(duì)于R值較小的因素,其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響不大,可針對(duì)實(shí)驗(yàn)條件調(diào)整。由結(jié)果分析最佳方案為A 3B1C3D2,即用90%濃度的乙醇,加5倍量的水,超聲時(shí)間為40min,超聲頻率為100kHz。

3 討論

3.1 乙醇濃度對(duì)芍藥苷提取率的影響

通過(guò)我們?cè)O(shè)計(jì)的五組考察乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)芍藥苷提取率的影響,得出的結(jié)論為高體積分?jǐn)?shù)的乙醇提取芍藥苷的結(jié)果較好,所以我們?cè)O(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)選取的乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%、70%和90%。

3.2 提取功率藥苷得率的影響

在此實(shí)驗(yàn)中大功率的超聲條件提取的芍藥苷得率高,所以我們選用比較大的頻率進(jìn)行實(shí)驗(yàn),分別是60kHz、80kHz、100kHz。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究是用超聲法提取赤芍中的芍藥苷,此方法的芍藥苷提取率主要受幾個(gè)參數(shù)如提取溶劑、料液比、超聲時(shí)間和超聲功率的影響。最佳提取條件為:溶劑體積比90%,料液比1:5,提取時(shí)間40min,提取功率為100kHz。與回流提取法、索氏提取法、微波提取法和常溫冷浸提取法比較而言,超聲法法大大的減少了提取時(shí)間,并且提取率較高,因此,超聲法是一種快速、有效的提取赤芍中芍藥苷的方法。

[1]中華人民共和國(guó)藥典.第一部.2005,78

[2]HuangTK(黃泰康).Handbook of the Composition and Phar macology of the Common Chinese Traditional Medicines(常用中藥成分與藥理手冊(cè)).Beijing:Chinese Medicine Science and Technology Press,1994,1003

[3]錢(qián)亞南,劉信順,張先芬.高效液相色譜法測(cè)定白芍總甙中芍藥甙含量[J].中草藥,1995,26(7):349-350

[4]Yang XW(楊秀偉),Bai YP(白云鵬),Yan ZK(嚴(yán)仲鎧).Study on the chemical constituents from Paeonia obovata Maxim[J].China J Chinmatmed(中國(guó)中藥雜志),1991,19:234-235

[5]Wang D(王棟),Du S(杜速),Song SM(宋素梅),et al.Study on the chemical constituents fromPaeonia japonica[J].JShenyang Coll Pharm(沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào)),1992,9:217-218

R284

A

1008-0104(2011)05-0037-02

2011-06-14)

黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(ZHY10-Z112),黑龍江省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(2010-476),黑龍江省生物藥制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基金項(xiàng)目資助。

田樺(1969～)女,黑龍江佳木斯人,學(xué)士,副主任藥師。