摘要 本文對(duì)應(yīng)用DAD檢測(cè)器判別液相色譜峰純度進(jìn)行了探討。

關(guān)鍵詞 檢測(cè)器 判別液 純度

高效液相色譜法定量的前提是色譜峰由單一組分構(gòu)成，因此色譜峰的純度即一個(gè)色譜究竟是有一種組分構(gòu)成，還是包含兩種以上的成分，這就是我們大家所要關(guān)心的問題。二極管檢測(cè)器(DAD簡(jiǎn)稱)的開發(fā)，是過去20年內(nèi)高效液相色譜峰的定性功能DAD檢測(cè)器可以得到各個(gè)波長(zhǎng)的吸光度值即可以得到樣品在各時(shí)刻的吸收光譜圖。

使用這些方法判別峰純度時(shí)都要求待測(cè)組分色譜峰中洗脫雜質(zhì)的紫外光譜，明顯不同于主組分的紫外光譜。光譜間的差異越大對(duì)于其洗脫雜質(zhì)的檢測(cè)就越低，然而有機(jī)物的紫外光譜一般均顯示曲線變化不明顯的寬帶。缺乏能夠說(shuō)明細(xì)微差別的精神結(jié)構(gòu)，尤其是對(duì)于那些生色團(tuán)相同而結(jié)構(gòu)上的差異部分，由于生色團(tuán)不同的化合物間的結(jié)構(gòu)差異不能夠予以足夠的描述實(shí)際上許多情況下，例如同分異構(gòu)體的雜質(zhì)和主組分的降解或代謝產(chǎn)物與主組分結(jié)構(gòu)上是非常相似的。這是利用組分的紫外光譜信息判別色譜峰純度時(shí)就會(huì)遇到不能檢測(cè)到分析物的共洗脫雜質(zhì)的情況，甚至有時(shí)候會(huì)給出完全錯(cuò)誤的峰純度結(jié)果從而給下一步的定性定量分析很大誤差。

使用DAD可以獲得三維譜圖，進(jìn)而得到等吸收?qǐng)D提取所要檢測(cè)波長(zhǎng)下的色譜圖。本文通過選擇頭孢拉定作為分析對(duì)象對(duì)DAD用于判別液相色譜峰純度時(shí)的局限性研究。

1 試驗(yàn)部分

儀器和試劑AgilenFechnologiesl200SeriesDAD檢測(cè)器、甲醇(色譜純)其它試劑均為分析純。頭孢拉定、頭孢氨芐對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

色譜柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流動(dòng)相：水、甲醇、3.86％醋酸鈉溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速為0.7ml／min-0.9ml／min進(jìn)樣量10μl柱溫為室溫。

對(duì)照品溶液制備：①取頭孢拉定對(duì)照品約35mg精密稱定置50ml量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度搖勻。②取頭孢氨芐對(duì)照品約20mg精密稱定置50ml量瓶中加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度搖勻。供試品溶液的制備實(shí)驗(yàn)用的混合溶液根據(jù)要求按不同的配比使用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液和流動(dòng)相來(lái)配制。

2 結(jié)果與討論

2.1DAD用于色譜峰純度判別

頭孢拉定和頭孢氨芐其二者在合適的條件下可以被分離。通常頭孢拉定中含有一定量的頭孢氨芐從二者的紫外光譜，可以發(fā)現(xiàn)他們的紫外光譜形狀幾乎完全一致。事實(shí)上二者結(jié)構(gòu)上的相似在實(shí)際工作中由于柱效下降或者分離條件偶爾變化有時(shí)仍然會(huì)遇到二者嚴(yán)重重疊或者其洗脫的情況通過一根使用過一段時(shí)間的色譜柱對(duì)供試品的洗脫得到的頭孢氨芐和頭孢拉定的洗脫的色譜峰利用歸一化光譜對(duì)照和吸收比值圖法對(duì)該假單峰的純度進(jìn)行鑒定。結(jié)果頭孢拉定和頭孢氨芐的共洗脫色譜峰前沿峰頂和峰尾提取的紫外光譜柱歸一化后重疊，頭孢拉定中含有微量的頭孢氨芐由于二者結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上的相似使得他們保留的時(shí)間也很相近對(duì)流動(dòng)相的配比略作改變后可使頭孢氨芐峰被掩蓋表現(xiàn)上呈單一峰。使用DAD抽取該色譜圖歸一化后重疊和利用吸收比值圖對(duì)該色譜的純度進(jìn)行判別的結(jié)果，認(rèn)為該色譜圖峰是純的。幸運(yùn)的是它們?cè)谶m當(dāng)?shù)臈l件下可以被分離開，從上面選擇的有代表性的分析物或者光譜相似雜質(zhì)組成的體系中可以明顯的看出使用DAD判別液相色譜峰純度有時(shí)可能會(huì)得出錯(cuò)誤的峰純度信息。文獻(xiàn)中也認(rèn)為任何情況下相同的吸收比或者整個(gè)色譜峰歸一化光譜的一致只應(yīng)該被當(dāng)作是峰純度的一個(gè)相對(duì)指示而不是一個(gè)絕對(duì)的證據(jù)，對(duì)于可能存在于主組分結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)的樣品體系的液相色譜分析方法，峰純度的可靠評(píng)價(jià)最好是通過收集色譜峰出液，然后更換不同的色譜體系或者是由于對(duì)微小結(jié)構(gòu)差異靈敏的質(zhì)譜等手段來(lái)驗(yàn)證。

2，2靈敏度

在對(duì)于化合物的痕量分析中檢測(cè)器的靈敏度起著重要的作用，本研究中還對(duì)二極管陣列檢測(cè)器與常用的可變波長(zhǎng)檢測(cè)器的靈敏度進(jìn)行了比較，頭孢拉定的檢測(cè)限分別是0.09μg和0.04μg相比通常使用的可變波長(zhǎng)檢測(cè)器要高大約1個(gè)數(shù)量級(jí)這表明DAD在線獲得光譜信息的同時(shí)靈敏度是有所降低的，因此對(duì)于色譜峰中微量的雜質(zhì)的檢測(cè)有時(shí)DAD就會(huì)顯得無(wú)能為力。