摘要:目的:通過(guò)對(duì)桃仁蛋白質(zhì)氨基酸分析,明確氨基酸的種類、質(zhì)量分?jǐn)?shù)。方法 采用835~50型氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定,離子交換柱:柱長(zhǎng)2.5×150mm;樹脂2619#;柱溫53℃;緩沖液:流速0.25mL·min;柱壓80~120kg/cm2;茚三酮:流速0.3mL·min;拄壓20~35kg/cm2。結(jié)果:所測(cè)定的《中國(guó)藥典》2005年版中藥桃仁項(xiàng)下收載的桃Prunuspersica(L)Batsch,和山桃Prunusdaridiana(CarL)Franch,2個(gè)品種的樣品中均含17種氨基酸,質(zhì)量分?jǐn)?shù)和氨基酸總量均有差異。結(jié)論:本方法重現(xiàn)性高,操作簡(jiǎn)單;山桃仁和桃仁的氨基酸種類相同,質(zhì)量分?jǐn)?shù)和氨基酸總量比較,山桃仁均大于桃仁。
關(guān)鍵詞:桃仁;山桃仁;氨基酸;蛋白質(zhì)
中圖分類號(hào):R284.1
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1007-2349(2010)06-0063-02
桃仁來(lái)源于薔薇科(Rosaceae)植物桃Prunuspersica(L)Batsch,或山桃Prunusdaridiana(Carr,)Franch,的干燥成熟種子。性味苦、甘,平,具有活血化瘀、潤(rùn)腸通便的功效。用于經(jīng)閉,痛經(jīng),癥瘕痞塊,跌撲損傷,腸燥便秘。在血府逐瘀湯(《醫(yī)林改錯(cuò)》)、生化湯(《傅青主女科》)、桂枝茯苓丸(《金匱要略》)、桃核承氣湯(《傷寒論》)等醫(yī)家名方中均重用桃仁,現(xiàn)代研究亦表明桃仁對(duì)心腦血管疾病療效顯著,近年來(lái)受到廣泛關(guān)注。
桃仁藥材中主要含油脂和蛋白質(zhì)。氨基酸的種類和質(zhì)量分?jǐn)?shù),決定著蛋白質(zhì)品質(zhì)的高低,而且植物蛋白具有一定的生理活性。為了進(jìn)一步研究桃仁的化學(xué)成分,進(jìn)行了桃仁蛋白質(zhì)氨基酸分析,明確氨基酸的種類、質(zhì)量分?jǐn)?shù)。為桃仁的進(jìn)一步開發(fā)研究提供思路和依據(jù)。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1,1 供試材料 桃仁,2007年8月自采于陜西南泥灣和陜西咸陽(yáng),經(jīng)萬(wàn)德光教授鑒定,分別為薔薇科(Rosaceae)植物桃Prunuspersica(L)Batsch、山桃Prunusdavidiana(Carr,)Franch,的干燥成熟種子。
1,2 試劑 酸解劑:鹽酸溶液,C(HCI)=6.0mol/L,優(yōu)級(jí)純鹽酸與去離子水等體積混合;稀釋上機(jī)用鹽酸緩沖液,C(HCI)=0.02mol/L;不同pH值和離子強(qiáng)度的洗脫用緩沖溶液,按儀器說(shuō)明書配制。茚三酮溶液:按儀器說(shuō)明書配制;NaOH溶液:C(NaOH)=6.0mol/L。17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品:除脯氨酸為200μmol/L外,其余均為100μmol/L。
1,3 儀器及設(shè)備 實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī);分析天平;酒精噴燈;恒溫箱;儀器和設(shè)備:日立835-50型氨基酸自動(dòng)分析儀。真空泵。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2,1 儀器測(cè)試條件 離子交換柱:柱長(zhǎng)2.5×150mm;樹脂2619#;柱溫53℃;緩沖液:流速0.25mL·min;柱壓80~120kg/cm2;茚三酮:流速0.3mL·min;柱壓20~35kg/cm2。
2,2 樣品的制備 稱樣:準(zhǔn)確稱取一定量的樣品,精確到0.0001g,稱樣量在10~20mg之內(nèi),稱好的樣品放于水解管內(nèi)。水解:在水解管內(nèi)加6.0mol·L鹽酸15.00mL,再加入巰基乙1.00mL(起保護(hù)作用),蓋上膠塞,用真空泵抽至真空,接進(jìn)Opsi,將此水解管封口并放在110±1℃的恒溫干燥箱內(nèi)保溫24h后,取出冷卻。打開水解管,將水解液過(guò)濾并沖洗定容50.00mL容量瓶。吸取濾液1.00mL于25mL燒杯內(nèi),在水浴上蒸干,殘留物用1~2mL水溶解再蒸干,反復(fù)蒸干3次,最后殘留物用0.02mol·L的鹽酸1.00mL溶解上機(jī)測(cè)定。
2,3 測(cè)定 用相應(yīng)的混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液按儀器說(shuō)明書,調(diào)整儀器操作參數(shù)和洗脫用緩沖液的pH值,使各氨基酸分辨率≥85%,自動(dòng)進(jìn)樣20μL制備好的試樣水解液分析測(cè)定(氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定流速:緩沖溶液為0.40mL/min,茚三酮溶液0.35mL/min)。
2,4 結(jié)果計(jì)算 以峰面積測(cè)定結(jié)果,用外標(biāo)法計(jì)算各氨基酸含量。
2,5 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn) 氨基酸測(cè)定標(biāo)準(zhǔn):GB/T5009,124-2003。
3 結(jié)果與討論
桃仁與山桃仁中均富含17種氨基酸。其中尤以谷氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,天門冬氨酸、精氨酸和亮氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)也很高;桃仁中各種氨基酸的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到23.77%,其中必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.76%,山桃仁中氨基酸的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26.85%,高于桃仁中氨基酸的總質(zhì)量分?jǐn)?shù);在必需氨基酸含量上,山桃仁中的必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.87%,高于桃仁中的必需氨基酸。
對(duì)桃仁不同品種中氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定表明:山桃仁中氨基酸的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)及必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)均很高,氨基酸的種類和質(zhì)量分?jǐn)?shù),決定著蛋白質(zhì)品質(zhì)的高低,必需氨基酸更是評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)水平最根本的指標(biāo);所測(cè)定的桃仁中的必需氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高,因此桃仁中蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)也較高,所以桃仁的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值相對(duì)也較好。同時(shí),桃仁中的蛋白質(zhì)在桃仁中的含量也占相當(dāng)大一部分,桃仁中的氨基酸研究分析為以后進(jìn)一步研究桃仁中的蛋白質(zhì)提供科學(xué)的依