肖奇志

均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選蒲公英總黃酮的研究

肖奇志

目的 探討超聲輔助提取蒲公英總黃酮的最佳工藝。方法 采用均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果 最優(yōu)工藝參數(shù)為：超聲波強(qiáng)度2000W，溫度75℃，乙醇濃度75%，黃酮提取率為2.59%。結(jié)論 均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選蒲公英總黃酮，簡(jiǎn)潔快速，可以用于優(yōu)選蒲公英總黃酮。

蒲公英；總黃酮；超聲輔助；均勻設(shè)計(jì)

Dandelion;Total Flavones; Ultrasound-assisted extraction; Uniform design

蒲公英是菊科多年生草本植物，含有多種有效成分，具有較強(qiáng)的清除自由基、抗氧化、抗炎、等多種藥理作用[1]，這些功效和蒲公英所含有的有效成份黃酮有一定的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)研究了超聲輔助提取蒲公英總黃酮的可行性，為進(jìn)一步開發(fā)蒲公英提供一條經(jīng)濟(jì)工藝路線。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

GU-1901雙光束紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；蒲公英（張仲景大藥房提供，經(jīng)鑒定為藥用蒲公英Taraxacum officinale）；化學(xué)試劑為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 超聲輔助蒲公英總黃酮提取工藝

稱取干燥過(guò)30目的蒲公英50g，石油醚浸泡24h,過(guò)濾，按照預(yù)設(shè)條件(超聲波強(qiáng)度、溫度、乙醇濃度)進(jìn)行超聲輔助提取，提取3次，過(guò)濾，合并提取液，濃縮,氯仿萃取3次，合并萃取液，濃縮備用。

1.2.2 含量測(cè)定

秤取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.5mg溶于5mL甲醇溶液,量取1、2、3、4、5mL分別置25mL量瓶中，加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液lmL搖勻，放置6分鐘min，加10%硝酸鋁溶液lmL搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，505nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度X和濃度Y進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y=2.37X+2.134，相關(guān)系數(shù)R=0.9998，表明0.004mg.mL-1-0.02mg/mL-1范圍線性關(guān)系較好。

1.2.3 均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)法

以影響有效成分提取率超聲波強(qiáng)度、溫度、乙醇濃度作為考察因素，各因素取3個(gè)水平，探求超聲輔助提取蒲公英總黃酮的最佳工藝。用均勻設(shè)計(jì)3.0版軟件篩選出u9(33)表安排實(shí)驗(yàn)[2]數(shù)據(jù)見表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)均勻設(shè)計(jì)3.0版軟件中自選變量法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用超聲波強(qiáng)度A、溫度B、乙醇濃度C對(duì)應(yīng)變量總黃酮提取率Y多元逐步回歸法進(jìn)行分析，回歸分析采用后退法,顯著性水平α＝0.05，得回歸方程Y=0.397X1+0.371X2+0.341X3，復(fù)相關(guān)系數(shù)：R=0.9999,檢驗(yàn)值Ft=11.67,臨界值F(0.05,3,3)＝6.277, Ft＞F(0.05,3,3),回歸方程顯著，剩余標(biāo)準(zhǔn)差s＝0.134，回歸方程有意義,由回歸方程因素的系數(shù)可見超聲波強(qiáng)度、溫度、乙醇量的影響均為正效應(yīng)，從標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)可以發(fā)現(xiàn)，超聲波強(qiáng)度＞溫度＞乙醇濃度。根據(jù)回歸方程得出最優(yōu)組合：超聲波強(qiáng)度A為2000W，溫度B為75℃，乙醇濃度C 為75%，預(yù)測(cè)值Y=2.17%。

表1 U7(73)均勻試驗(yàn)方案及試驗(yàn)結(jié)果

2.2 驗(yàn)證方案

按照最優(yōu)工藝參數(shù)即超聲波強(qiáng)度2000W，溫度75℃，乙醇濃度75%進(jìn)行了3次平行試驗(yàn)，顯示平均提取率2.59%，RSD1.21%，與預(yù)測(cè)值相符，說(shuō)明優(yōu)化結(jié)果可靠。作為對(duì)比試驗(yàn)，本文采用常溫浸提和回流提取技術(shù)，對(duì)蒲公英總黃酮進(jìn)行了提取試驗(yàn)研究。取得率分別為1.97%和2.11%。由此可以看出，傳統(tǒng)提取技術(shù)的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及超聲輔助提取。

3 討論與結(jié)論

蒲公英總黃酮的提取過(guò)程就是使目標(biāo)成分從細(xì)胞內(nèi)釋放、擴(kuò)散到溶劑中的過(guò)程，由超聲波發(fā)出的高頻機(jī)械振蕩，微射流和沖擊波使顆粒振蕩和高速碰撞，產(chǎn)生固液界面的清洗、沖擊、侵蝕和剝離等作用，使邊界層變簿，強(qiáng)化蒲公英總黃酮向固液界面的擴(kuò)散，提高黃酮溶出過(guò)程的速率，從而可縮短提取時(shí)間、提高提取效率。

采用均勻設(shè)計(jì)方案進(jìn)行試驗(yàn)，得到最優(yōu)工藝方案，試驗(yàn)次數(shù)大大減小，時(shí)間短，收率高，操作簡(jiǎn)單，能耗低，是一個(gè)經(jīng)濟(jì)的工藝路線，值得推廣。優(yōu)化了蒲公英總黃酮的超聲波輔助提取工藝，確定了蒲公英總黃酮的超聲波輔助提取的最佳工藝條件：超聲波強(qiáng)度A為2000W，溫度B為75℃，乙醇濃度C為75%。利用此條件提取蒲公英總黃酮，提取率達(dá)到2.59%。與傳統(tǒng)提取法相比，超聲波輔助提取法提取時(shí)間短、試驗(yàn)次數(shù)大大減小，收率高，操作簡(jiǎn)單，能耗低選擇性好，是一個(gè)經(jīng)濟(jì)的工藝路線，值得推廣。

[1] 姜寧,宋新波.蒲公英的藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥雜志，2008,12(6)∶19-20.

[2] 陳濤,李進(jìn),褚治德.黃芪藥材的微波提取工藝研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(2)∶349-350.

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.32.98

∶ 462002 貴陽(yáng)護(hù)理職業(yè)學(xué)院（肖奇志）

[Abstrac] Objective To study the best extraction process of the Flavones From dandelion. Methods The extraction condition by uniform design was optimized.Results The optimized technologic condition:Ultrasound wave power was 1200W,temperature was 75,the alcohol content was 75%,The extraction ratio of total Flavonesi was 2.59%. Conclusion The ultrasound-assisted extraction can be regarded as rapid and eff cient method of the extraction of total f avonoids in dandelion.