喬立冬 邢臺(tái)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)二科（054001）

銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥相關(guān)基因的研究

喬立冬 邢臺(tái)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)二科（054001）

目的了解臨床分離的銅綠假單胞菌β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥相關(guān)基因的存在狀況，以便為臨床選擇用藥提供依據(jù)。方法自臨床分離的 95株銅綠假單胞菌，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)耐藥基因（TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、DHA和 OprD2）結(jié)果95株銅綠假單胞菌中，發(fā)現(xiàn)了7種耐藥基因，其中25%菌株檢測(cè)到兩種耐藥基因。結(jié)論銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的多重耐藥是由多種耐藥基因決定的。提示該菌具有復(fù)雜的耐藥機(jī)制。

銅綠假單胞菌；耐藥基因；β-內(nèi)酰胺類抗生素

近年來(lái)，隨著抗生素的不斷開發(fā)和廣泛應(yīng)用，感染菌的菌群分布亦隨之發(fā)生變遷。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa P. aeruginosa），是醫(yī)院內(nèi)感染最常見的致病菌之一，引起的醫(yī)院內(nèi)感染在國(guó)內(nèi)約17.27%[1]，居第二位，國(guó)外報(bào)道10～31.5%[2]，居病原菌之首。近年來(lái)，P. aeruginosa耐藥性不斷增加，已經(jīng)出現(xiàn)對(duì)3代頭孢菌素和亞胺培南耐藥的P. aeruginos菌，給臨床治療帶來(lái)極大困難。研究發(fā)現(xiàn)，P. aeruginos產(chǎn)生的各種β-內(nèi)酰胺酶（如 TEM、SHV、OXA、PER、VER、GES、CARB）、金屬β-內(nèi)酰胺（如IMP、VIM）和質(zhì)粒頭孢菌素酶（如DHA）以及外膜孔蛋白D2（OprD2）缺失，是對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥的主要機(jī)制[3-8]。為了解我院臨床分離的 P. aeruginosa對(duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥原因，該文采用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)了9種β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥相關(guān)基因（TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、DHA和OprD2）報(bào)告如下：

1 材料和方法

液。置入-20℃冰箱備用。

1.4 基因檢測(cè)，均為PCR法各種靶基因引物序列和目的產(chǎn)物長(zhǎng)度見表1。

各種靶基因PCR擴(kuò)增體系均為：每反應(yīng)體系P1、P2引物各 0.5μmol/L、kcl 10mmol/L(NH4)2SO48mmol/L、Mgcl 2mmol/L、Tris-Hcl (PH9.0)10mmol/L、NP400.5%、BAS 0.02%、TaqDNA pol 1μ?？偡磻?yīng)體積20μl（其中模板液5μl）。循環(huán)參數(shù)為：93℃，預(yù)變性2min，然后93℃ 6 0s→55℃，60s→72℃60s，循環(huán) 35周期，最后一個(gè)72℃延長(zhǎng)至5min。產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)與陽(yáng)性對(duì)照分子相當(dāng)?shù)哪康臈l帶為陽(yáng)性。耐藥基因檢測(cè)試劑盒、靶基因PCR引物序列和陽(yáng)性對(duì)照DNA由無(wú)錫市克隆遺傳技術(shù)研究所提供。

Table 1 Primers of Target Genes and PCR Products

2 結(jié)果

2.1藥物敏感性試驗(yàn)，見表2?？梢娋陮?duì)β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥性均非常嚴(yán)重。

Table 2 Sensitivity of 95P.aeruginosas to 17 Antibiotics

2.2 基因PCR檢測(cè)95株P(guān). aeruginosa中，TEM、VIM、IMP、OXA、PER、GES，DHA陽(yáng)性率分別為：51.6%、40.1%、38.9%、32.4%、30.8%、30.3%、4.0%，而SHV、OprD2基因均陰性。

3 討論

1992年法國(guó)巴黎發(fā)現(xiàn)的TEM-42是在P. aeruginosa菌中第一個(gè)被報(bào)道的A類ESBLs[11].P. aeruginosa對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥性，提示該菌具有復(fù)雜的耐藥機(jī)制。P.aeruginosa的主要耐藥機(jī)理是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，尤其是超廣譜β-內(nèi)酰胺酶，以及菌細(xì)胞外膜的通透性降低和菌體蛋白結(jié)構(gòu)與功能的變化。P. aeruginosa外膜脂多糖與磷脂之間，鮑林蛋白形成的孔道比一般革蘭陰性菌的孔道小，使多種抗革蘭氏陰性桿菌抗生素難以通過(guò)，是該菌對(duì)不同類別抗生素呈現(xiàn)出固有耐藥性的重要原因，這種固有耐藥性使P. aeruginosa成為臨床上難治致病菌之一，而主動(dòng)外排系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)更揭示了它是P. aeruginosa固有耐藥性或獲得性多重耐藥的更一重要原因[12]。P. aeruginosa的耐藥是由于產(chǎn)生滅活藥物的酶和（或）細(xì)菌外膜對(duì)藥物的通透性降低使抗菌藥物失效。由于β-內(nèi)酰胺類抗生素的廣泛使用和碳青霉烯酶的產(chǎn)生，使其耐藥性明顯上升，因此在臨床上對(duì)抗生素使用進(jìn)行宏觀管理與控制成為目前減少細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的主要措施之一[13]。通過(guò)分析細(xì)菌的耐藥譜及耐藥模式，了解感染的發(fā)生發(fā)展趨勢(shì)，從而有計(jì)劃地交替使用敏感性強(qiáng)的抗生素，是提高臨床治療效率的必然選擇。

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10.3969/j.issn.1672-2779.2010.24.165

1672-2779（2010）-24-0200-02

2010-09-30）