黃玲 高軍 滿曉華 龔燕芳 李兆申

·論著·

過氧化物酶體增殖物激活受體-γ和血管緊張素Ⅱ受體在慢性胰腺炎組織中的表達(dá)及意義

黃玲 高軍 滿曉華 龔燕芳 李兆申

目的觀察過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PPAR-γ)和血管緊張素Ⅱ受體(AT1R和AT2R)在慢性胰腺炎(CP)組織中的表達(dá)，探討其意義。方法收集2006年4月至2009年2月經(jīng)病理確診的CP 24例，以12例正常胰腺組織作為對照。采用免疫組化方法檢測胰腺組織PPAR-γ和AT1R、AT2R的表達(dá)。結(jié)果正常胰腺組織PPAR-γ和AT1R蛋白多呈陰性表達(dá)，陽性分值分別為0.33±0.49和0.42±0.51；AT2R蛋白在腺泡、胰島細(xì)胞可呈陽性或弱陽性表達(dá)，在導(dǎo)管細(xì)胞質(zhì)呈弱陽性表達(dá),分值為2.33±1.37。CP組織PPAR-γ、AT1R和AT2R在腺泡、導(dǎo)管、間質(zhì)及胰島細(xì)胞中均可有不同程度表達(dá)，陽性分值分別為3.28±2.46、4.36±2.80和4.61±2.89，均顯著高于正常對照組(P值分別為lt;0.01、lt;0.01、lt;0.05)。結(jié)論P(yáng)PAR-γ和AT1R、AT12R在CP組織中均呈高表達(dá)，這可能是CP藥物治療的潛在靶點(diǎn)。

胰腺炎，慢性； 過氧化物酶體增殖物激活受體； 血管緊張素受體

過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)屬核激素受體，包括PPAR-α、PPAR-β、PPAR-δ和PPAR-γ，其中PPAR-γ研究最為廣泛，它在調(diào)節(jié)炎癥應(yīng)答、脂質(zhì)合成、糖代謝及各種細(xì)胞的分化、增殖和凋亡途徑中發(fā)揮重要作用[1-2]。胰腺局部的腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)在胰腺的生理和病理生理過程中發(fā)揮重要作用，其生物功能是通過血管緊張素Ⅱ1型(angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1R)和2型受體(angiotensin Ⅱ type 2 receptor，AT2R)來介導(dǎo)的，以AT1R占主導(dǎo)地位[3]。激活的血管緊張素Ⅱ(ATⅡ)與AT1結(jié)合介導(dǎo)氧化應(yīng)激、誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和組織纖維化[4-5]。本文應(yīng)用免疫組化方法檢測慢性胰腺炎(CP)胰腺組織PPAR-γ與AT1R、AT2R蛋白的表達(dá)，探討其臨床意義。

材料與方法

一、臨床病例

收集我院2006年4月至2009年2月經(jīng)外科手術(shù)及病理確診的CP患者24例，男性16例，女性8例，年齡32～68歲，平均50歲。其中伴胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液瘤1例、假性囊腫4例、膿腫形成1例、胰管結(jié)石4例、左側(cè)門脈高壓癥1例、糖尿病2例。既往有急性胰腺炎發(fā)作病史8例，嗜酒者5例，嗜煙酒者2例。取12例正常胰腺組織作為對照。

二、胰腺組織病理檢查和膠原含量分析

所有標(biāo)本常規(guī)切片，HE染色。由我院病理科醫(yī)師閱片。膠原采用苦味酸-天狼星紅染色，光鏡下為紅染。每張切片隨機(jī)取3個視野，應(yīng)用MIQAS醫(yī)學(xué)圖像定量分析系統(tǒng)軟件(上海求為生物科技有限公司)計算陽性紅染面積的百分率，即膠原含量。

三、PPAR-γ、AT1R、AT2R和α-SMA蛋白檢測

采用Envision免疫組織化學(xué)法，按試劑盒(美國DAKO公司)說明書操作。以PBS作為陰性對照，以胰腺癌組織作為陽性對照。胞質(zhì)或胞核呈棕黃色為陽性染色。在高倍顯微鏡(×400)下隨機(jī)取3個視野，計算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及染色強(qiáng)度。著色細(xì)胞數(shù)lt;30%為1分，30%～60%為2分，gt;60%為3分；無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，兩者乘積為總積分。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

一、胰腺組織病理學(xué)改變及膠原含量

對照組顯示正常的胰腺組織結(jié)構(gòu)。所有CP患者的胰腺組織均符合CP病理組織學(xué)特征[6]，包括腺泡萎縮、壞死，小葉內(nèi)和(或)小葉間纖維化，繼發(fā)胰管改變，腺泡與胰島分離，炎癥細(xì)胞浸潤等。正常胰腺組織中，僅血管、胰管周圍可見紅染區(qū)(圖1a)，膠原含量為(23.83±3.71)%；CP的胰腺組織小葉內(nèi)和(或)小葉間出現(xiàn)陽性染色(圖1b)，膠原含量為(70.50±7.69)%。兩者相差顯著(Plt;0.05)。

二、α-SMA、PPAR-γ、AT1R和AT2R蛋白表達(dá)

正常胰腺組織僅血管平滑肌細(xì)胞呈α-SMA陽性(圖1c)，分值為0.75±0.45；CP組織在血管壁、小葉內(nèi)和(或)小葉周圍呈α-SMA陽性(圖1d)，分值為4.61±3.01，顯著高于正常組(Plt;0.01)。

正常胰腺組織PPAR-γ蛋白多呈陰性表達(dá)，偶見腺泡細(xì)胞核、胰島細(xì)胞質(zhì)弱陽性表達(dá)(圖1e)，分值為0.33±0.49；CP組織的腺泡和(或)導(dǎo)管細(xì)胞核、間質(zhì)細(xì)胞核陽性染色，胞質(zhì)染色少見，胰島細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)偶見(圖1f)，分值為3.28±2.46，顯著高于正常組(Plt;0.01)。

正常胰腺組織AT1R蛋白多呈陰性表達(dá)，偶見腺泡、胰島細(xì)胞質(zhì)弱陽性表達(dá)(圖1g)，分值為0.42±0.51；CP組織腺泡、導(dǎo)管、胰島細(xì)胞質(zhì)陽性染色，間質(zhì)細(xì)胞質(zhì)偶見(圖1 h)，分值為4.36±2.80，顯著高于對照組(Plt;0.01)。

正常胰腺組織AT2R蛋白在腺泡、胰島細(xì)胞質(zhì)可呈陽性或弱陽性表達(dá)，在導(dǎo)管細(xì)胞質(zhì)弱陽性表達(dá)(圖1i),分值為2.33±1.37；CP組織腺泡、導(dǎo)管、胰島細(xì)胞質(zhì)呈陽性或強(qiáng)陽性染色(圖1j)，分值為4.61±2.89，顯著高于正常組(Plt;0.05)。

討 論

在不同的炎癥反應(yīng)中，PPAR-γ表達(dá)各異，如在人類的潰瘍性結(jié)腸炎和肝硬化病變中呈低表達(dá)，而在動脈粥樣硬化病變中呈高表達(dá)[6]。Nakajima等[7]報道，小鼠腸道缺血-再灌注損傷時腸道組織存在內(nèi)源性PPAR-γ途徑，內(nèi)源性配體激活PPAR-γ為腸道缺血-再灌注損傷提供保護(hù)作用，包括直接受累的組織和遠(yuǎn)處臟器。而嚴(yán)重的內(nèi)毒素血癥，PPAR-γ的保護(hù)作用不能阻止肝臟損傷的發(fā)生[8]。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，合成的PPAR-γ配體的親和力在nmol范圍，大多數(shù)內(nèi)源性配體在μmol范圍，說明合成的PPAR-γ配體具有較高的親和力[9]。

圖1a、c、e、g、i分別為正常胰腺組織天狼星紅染色及α-SMA、PPAR-γ、AT1R、AT2R的表達(dá)(×200)；b、d、f、h、j分別為CP組織天狼星紅染色及α-SMA、PPAR-γ、AT1R、AT2R的表達(dá)(×200)

ATⅡ參與心、肝、腎等臟器的纖維化形成過程。在CP 動物模型中，ATⅡ介導(dǎo)TGF-β1的產(chǎn)生和胰腺星狀細(xì)胞(PSCs)激活、增殖，促進(jìn)膠原合成和胰腺組織纖維化進(jìn)展[10]。Yamada等[11]研究顯示，在Wistar Bonn/Kobori大鼠自發(fā)性CP模型中，AT1R拮抗劑坎地沙坦通過抑制TGF-β1的過表達(dá)，阻止PSCs的激活，改善CP的炎癥和纖維化程度。AT1R拮抗劑替米沙坦具有部分激動PPAR-γ的特性。Imayama等在體外研究發(fā)現(xiàn)，通過激活PPAR-γ，能抑制AT1R的表達(dá)，這種對ATⅡ功能的雙重抑制，即直接阻斷AT1R以及激活PPAR-γ、下調(diào)AT1R有助于更完全地抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CP的胰腺組織中，腺泡壞死、萎縮，胰腺實(shí)質(zhì)由大量纖維組織取代，并伴胰管結(jié)構(gòu)的異常。這些纖維組織內(nèi)可見富含α-SMA蛋白的PSCs。與正常對照組比較，CP組織中PPAR-γ、AT1R和AT2R蛋白均呈高表達(dá)，提示這些蛋白參與胰腺纖維化的過程。

AT2R在胚胎發(fā)育期呈高表達(dá)，在正常成人的心血管系統(tǒng)呈低表達(dá)。在高血壓、動脈粥樣硬化形成、心肌梗死等病理狀態(tài)下，AT2R的擴(kuò)張血管作用被增強(qiáng)，在心血管重塑和炎癥過程中，AT2R能夠刺激心肌和血管平滑肌生長、增殖和凋亡，但仍存在爭議。目前，AT2R確切的擴(kuò)血管作用可能有助于改善胰腺血流，以及減少膠原沉積作用，但是否能夠緩解CP病情進(jìn)展，有待于進(jìn)一步研究。

[1] Moraes LA,Piqueras L,Bishop-Bailey D,et al.Peroxisome proliferator-activated receptors and inflammation.Pharmacol,2006,110:371-385.

[2] Imayama I,Ichiki T,Inanaga K,et al.Telmisartan downregulates angiotensin Ⅱ type 1 receptor through activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma.Cardiovasc Res,2006,72:184-190.

[3] Leung PS,Chappell MC.A local pancreatic renin-angiotensin system:endocrine and exocrine roles.Int J Biochem Cell biol,2003,35:838-846.

[4] Leung PS.The physiology of a local renin-angiotensin system in the pancreas.J Physiol,2007,580:31-37.

[5] Serrano GL,Ritchie B,Hoffman D,et al.A newconcept for an old system:The anti-inflammatory paradigm of the renin-angiotensin system.Medical Hypotheses，2009,72:584-588.

[6] Zingarelli B,Cook JA.Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma is a new therapeutic target in sepsis and inflammation.Shock,2005,23:393-399.

[7] Nakajima A,Wada K,Miki H,et al.Endogenous PPAR-gamma mediates anti-inflammatory activity in murine ischemia-reperfusion injury.Gastroenterology,2001,120:460-469.

[8] Collin M,Abdelrahman M,Thiemermann C.Endogenous ligands of PPAR-gamma reduce the liver injury in haemorrhagic shock.Eur J Pharmacol,2004,486:233-235.

[9] Bishop-Bailey D,Wray J.Peroxisome proliferator-activated receptors:a critical review on endogenous pathways for ligand generation.Prostaglandins Other Lipid Mediat,2003,71:1-22.

[10] Nagashio Y,Asaumi H,Watanabe S,et al.AngiotensinⅡ type 1 receptor interaction is an important regulator for the development of pancreatic fibrosis in mice.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2004,287:G170-G177.

[11] Yamada T,Kuno A,Masud K.Candesartan and angiotensin Ⅱreceptor angionist,suppresses pancreatie inflamation and fibrosis in rats.J Pharmacol Experim Therap,2003,307:17-23.

2010-02-01)

(本文編輯：屠振興)

Expressionofperoxisomeproliferator-activatedreceptor-γandangiotensinⅡreceptorproteininchronicpancreatitistissue

HUANGLing,GAOJun,MANXiao-Hua,GONGYan-Fang,LIZhao-shen.

DepartmentofGastroenterology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

LIZhao-shen,Email:zhsli@81890.net

ObjectiveTo investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ) and angiotensin receptor (AT2R) in chronic pancreatitis tissue.MethodsBetween April 2006 and February 2009, 24 patients were pathologically diagnosed as chronic pancreatitis were enrolled and 12 samples of normal pancreatic tissues were treated as controls. Immunohistochemical staining was used to detect PPAR-γ and AT1R, AT2R expression in pancreatic tissues.ResultsPPAR-γ and AT1R were mostly negatively expressed in normal pancreatic tissues, the positive scores were 0.33±0.49 and 0.42±0.51, respectively, while AT2R were weakly positively or negatively expressed in acinus and islet cell, and it was weakly positively expressed in ductal epithelial cells, the positive score was 2.33±1.37. In chronic pancreatitis tissue, PPAR-γ, AT1R and AT2R were positively expressed in acinus, ductal epithelial cells, and islet cell, the positive scores were 3.28±2.46, 4.36±2.80 and 4.61±2.89, which were significantly higher than those in the normal group (Plt;0.01,Plt;0.01,Plt;0.05).ConclusionsPPAR-γ, AT1R and AT2R were positively expressed in chronic pancreatitis tissue, and they may be the treatment target of chronic pancreatitis.

Pancreatitis,chronic； Peroxisome proliferator-activated receptors； Angiotensin receptors

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.013

200433 上海，第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院消化內(nèi)科

李兆申，Email：zhsli@81890.net