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        清胰湯對急性壞死性胰腺炎大鼠腸黏膜機械屏障的保護作用

        2010-11-23 09:38:05張興文王湘英肖彥盧義展李想
        中華胰腺病雜志 2010年4期
        關(guān)鍵詞:胰湯超微結(jié)構(gòu)屏障

        張興文 王湘英 肖彥 盧義展 李想

        清胰湯對急性壞死性胰腺炎大鼠腸黏膜機械屏障的保護作用

        張興文 王湘英 肖彥 盧義展 李想

        重癥急性胰腺炎(SAP)發(fā)病機制除了胰酶激活學(xué)說,還有細(xì)菌及內(nèi)毒素易位學(xué)說,其與腸屏障有關(guān)。針對SAP時如何保護腸黏膜屏障,減少腸道細(xì)菌易位和減輕內(nèi)毒素血癥成為近年來研究的熱點[1-3]。清胰湯是中藥治療SAP的經(jīng)典方之一,本試驗觀察清胰湯對大鼠急性壞死性胰腺炎(ANP)時小腸病理組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)變化的影響,探討其保護腸黏膜屏障的機制。

        一、材料和方法

        1.動物分組:健康SD大鼠44只,雌雄不分,體重260~300 g,由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物實驗中心提供。隨機(抽簽法)分為假手術(shù)組(12只)、ANP組(16只)、清胰湯組(16只)。采用胰被膜下注射5%?;悄懰徕c0.1 ml/100 g體重制備ANP模型。清胰湯組在制模后即刻及12 h后清胰湯灌胃各1 ml/100 g體重。清胰湯由柴胡15 g、黃芩10 g、黃連10 g、白芍15 g、木香10 g、生大黃15 g(后下)、芒硝10 g(沖)組成,制備成1∶1的成藥制劑85 ml,分裝后置4℃保存?zhèn)溆?。假手術(shù)組僅翻動胰腺及十二指腸。ANP組和假手術(shù)組大鼠等容積生理鹽水灌胃。

        2.觀察指標(biāo):制模后24 h取距回盲部約5 cm處的小腸,行常規(guī)病理檢查,按Chiu等[4]的6級評分標(biāo)準(zhǔn)評分(表1);取4只假手術(shù)組大鼠,6只ANP組大鼠及6只清胰湯組大鼠距回盲部約6 cm處小腸組織,電鏡觀察小腸黏膜超微結(jié)構(gòu)的改變。

        二、結(jié)果

        1.小腸組織學(xué)改變: ANP組大鼠腸黏膜絨毛水腫,有黏膜上皮細(xì)胞脫落,部分出現(xiàn)潰瘍,固有層出血,上皮下間隙增寬,較多炎性細(xì)胞浸潤,且逐漸向腸壁外層擴散(圖1a);清胰湯組大鼠腸黏膜絨毛輕度水腫,少量黏膜上皮細(xì)胞脫落,絨毛受損較輕,大部分炎性細(xì)胞浸潤僅在固有層(圖1b);假手術(shù)組大鼠小腸黏膜基本完整,輕度毛細(xì)血管淤血和極少量炎性細(xì)胞浸潤(圖1c)。ANP組、清胰湯組和假手術(shù)組大鼠小腸組織損傷評分分別為8.50±2.25、6.38±1.67和1.92±1.08,ANP組明顯高于假手術(shù)組(P<0.01),清胰湯組明顯低于ANP組(P<0.01),但仍高于假手術(shù)組(P<0.01)。

        2.小腸超微結(jié)構(gòu)改變:ANP組小腸黏膜上皮大量微絨毛脫落、斷裂、排列不整齊,細(xì)胞間連接松弛, 細(xì)胞界限不清,線粒體腫脹明顯,部分嵴溶解消失,較大空泡形成,細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)邊集、腫脹或核固縮,存在較多細(xì)胞壞死、凋亡(圖2a);清胰湯組大部分大鼠小腸絨毛排列欠整齊,倒塌,腸黏膜上皮細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)模糊,線粒體稍腫脹,部分嵴斷裂,有細(xì)胞核染色質(zhì)集聚于核膜周邊,部分細(xì)胞核固縮,以細(xì)胞凋亡為主,少數(shù)為細(xì)胞壞死(圖2b);假手術(shù)組小腸絨毛完整,排列整齊,表面光滑,上皮細(xì)胞間的緊密連接完整(圖2c)。

        表1 Chiu′小腸組織損傷評價標(biāo)準(zhǔn)

        圖1ANP組(a)、清胰湯組(b)和假手術(shù)組(c)大鼠小腸組織病理學(xué)改變(HE ×100)

        圖2ANP組(a)、清胰湯組(b)和假手術(shù)組(c)大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變(×5000)

        討論腸屏障[5]是指腸道能防止腸腔內(nèi)的有害物質(zhì)如細(xì)菌和毒素穿過腸黏膜進入體內(nèi)其他組織器官和血液循環(huán)的結(jié)構(gòu)和功能的總和。腸屏障由腸機械屏障、微生物屏障、免疫屏障以及化學(xué)屏障等共同構(gòu)成。機械屏障是指腸黏膜上皮細(xì)胞層的完整性及上皮細(xì)胞間的緊密連接,是保持腸屏障功能的主要因素。本實驗結(jié)果顯示,ANP組大鼠小腸病理學(xué)評分較假手術(shù)組大鼠明顯升高(P<0.01),提示ANP大鼠存在嚴(yán)重的腸黏膜損傷,機械屏障受到嚴(yán)重破壞。清胰湯干預(yù)后大鼠小腸組織病理學(xué)評分較ANP組顯著降低,但仍較假手術(shù)組大鼠明顯升高,提示清胰湯在一定程度改善了ANP大鼠小腸黏膜組織損傷程度,保護了ANP大鼠的腸機械屏障,但不能完全阻斷ANP對腸機械屏障的損傷。電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示假手術(shù)組小腸機械屏障是完整的,但ANP組大鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞間連接、細(xì)胞界限、微絨毛受損較假手術(shù)組嚴(yán)重,細(xì)胞壞死、凋亡均較多;清胰湯組大鼠腸黏膜細(xì)胞學(xué)變化較假ANP組減輕,細(xì)胞主要表現(xiàn)為凋亡。一般認(rèn)為,細(xì)胞壞死是在種種不利因素的影響下,由于細(xì)胞的正常代謝活動受損或中斷引起的細(xì)胞損傷和病理性的死亡,而凋亡是一種利他性、生理性細(xì)胞死亡,即局部、個別的死亡有利于整體或種群的存活。腸黏膜超微結(jié)構(gòu)的變化也說明清胰湯對ANP大鼠腸黏膜機械屏障有保護作用。清胰湯是治療SAP患者的經(jīng)典方劑,已在臨床廣泛應(yīng)用[5-7]。清胰湯具有“清熱解毒、疏肝理氣、活血化瘀和通里攻下”的功效。清胰湯改善ANP大鼠腸機械屏障的作用可能與以下因素有關(guān):(1)清胰湯“通里攻下”功效可刺激腸蠕動,排除積糞,具有減少腸道中細(xì)菌含量的“去污”效應(yīng),并減少腸腔脹氣。(2)清胰湯“清熱解毒”功效可抑制細(xì)菌的繁殖,保持腸道菌群的微生態(tài)平衡,減少內(nèi)毒素、細(xì)菌吸收入血,具有降低機體中的細(xì)菌、內(nèi)毒素水平,減少機體內(nèi)各種炎性因子產(chǎn)生、激活、釋放等作用。(3)清胰湯“活血化瘀”的功效可改善腸黏膜的血流灌注,緩解其缺血、缺氧狀態(tài),有利于腸黏膜損傷的修復(fù)。當(dāng)然清胰湯對腸黏膜機械屏障保護是通過多途徑、多靶點發(fā)揮作用,更多機制有待進一步去揭示。

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        [5] 陳水茹,高麗云,王國美.清胰湯治療重癥急性胰腺炎并發(fā)胃腸麻痹的臨床觀察.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007,16:576-578.

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        2009-10-09)

        (本文編輯:屠振興)

        10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.04.024

        湖南省科學(xué)技術(shù)廳課題資金資助項目(2008FJ3059)

        410005 長沙,湖南省人民醫(yī)院急診科(張興文、李想),肝膽胰外科(王湘英、肖彥、盧義展)

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