張永玲

冠心康膠囊由赤芍、丹參、降香、 紅花、川芎組成，是從冠心康顆粒改劑型而來，原標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)項(xiàng)目不能滿足質(zhì)量控制的要求。故在膠囊劑中增加了丹參、降香、 紅花、川芎的TLC鑒別和赤芍的含量測(cè)定項(xiàng)，建立了冠心康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器和試劑

LC2050高效液相色譜儀；LC2400紫外檢測(cè)器；LC2130泵，N2000色譜工作站。

原兒茶醛對(duì)照品：中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110757-200401（含量測(cè)定用）；降香對(duì)照藥材：中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：120952-200606（供鑒別用）；川芎對(duì)照藥材：中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：120918-200507（供鑒別用）；紅花對(duì)照藥材：中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：120907-200609（供鑒別用）；甲醇：色譜醇；重蒸餾水（自制）；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 丹參[1]

圖1 丹參的TLC圖譜

2.1.2 降香[2]

取本品內(nèi)容物4.0g，研細(xì)，加乙醚20mL，加熱回流30min，濾過，濾液揮去乙醚，殘?jiān)右掖?mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例稱取除降香外各藥材，按處方工藝制成陰性樣品，同法制成降香藥材陰性對(duì)照液。另取降香對(duì)照藥材1.0g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述溶液5～10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙醚-三氯甲烷（7∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液與無(wú)水乙醇（1∶9）的混合溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖2。

圖2 降香的TLC圖譜

2.1.3 川芎[3]

取本品內(nèi)容物1.5g，加乙醚20mL，加熱回流1h，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例稱取除川芎外各藥材，按處方工藝制成陰性樣品，同法制成川芎藥材陰性對(duì)照液。另取川芎對(duì)照藥材1.0g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB））試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖3。

圖3 川芎的TLC圖譜

2.1.4 紅花[4]

取本品2.0g，加水30mL超聲15min，離心，取上清液加水飽和的正丁醇提取3次，每次30mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例稱取除紅花外各藥材，按處方工藝制成陰性樣品，同法制成紅花藥材陰性對(duì)照液。另取紅花對(duì)照藥材1.0g，加水30mL回流1h，用脫脂棉濾過，自“加水飽和的正丁醇提取3次”起，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚（3∶2）為展開劑，預(yù)飽和15min，展開，取出，晾干，在氨蒸氣中熏15min，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖4。

圖4 紅花的TLC圖譜

2 赤芍的含量測(cè)定[5]

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水 （25∶75）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：25℃。色譜圖見圖5。

式中，為核密度方程，h為閾值，n為閾值范圍內(nèi)的聚落點(diǎn)數(shù)，d為數(shù)據(jù)的維數(shù).當(dāng)d=2時(shí)，常見的核密度方程即可以定義為：

圖5 含量測(cè)定色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含80μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.2g， 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25mL，稱定重量，超聲30min（功率250W，頻率33kHz），取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備

依據(jù)【處方】中的比例，按【制法】制備缺赤芍的陰性對(duì)照樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

吸取上述對(duì)照品溶液2.5、5、10、15、20μL注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積積分值，以對(duì)照品溶液進(jìn)樣體積為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：

Y=155551X-1112.9，r=0.9996，

結(jié)果表明，芍藥苷在0.21～1.7μg呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

吸取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果芍藥苷峰面積平均值為404583.090，RSD為0.78%。

2.5 穩(wěn)定性考察

分別在0、2、4、6、8h吸取供試品溶液進(jìn)樣，測(cè)其峰面積，RSD為1.32%，結(jié)果表明制備的供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，同法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果含量平均值為2.95mg/粒，RSD為1.33%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.75mg/mL）1mL，加入已知含量的樣品（2.95mg/粒）6份（約0.75mg）中，按含量測(cè)定方法制備及測(cè)定，結(jié)果平均回收率為99.4%（n=6），RSD為1.04%。

2.8 樣品含量測(cè)定

取樣品10批，進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表1。

3 討 論

采用薄層色譜法對(duì)處方中丹參、降香、 紅花、川芎四味藥進(jìn)行了定性鑒別，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，陰性無(wú)干擾，可以列入冠心康膠囊的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

表1 十批樣品含量測(cè)定結(jié)果

采用高效液相色譜法對(duì)本制劑中的芍藥苷進(jìn)行定量研究，以陰性對(duì)照品水平操作，進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，結(jié)果專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可以列入冠心康膠囊的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).部頒標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑.十四冊(cè):73.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].2005年版.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:158.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].2005年版.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:28.

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).部頒標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑.十三冊(cè):124.

[5]董春芬,劉天福,管玉竹.高效液相色譜法測(cè)定冠心康顆粒中芍藥苷的含量[J].中華實(shí)用中西醫(yī)雜志,2003,16(3):840-841.