周宏霞，韓喜東，于軍強(qiáng)，顏顯輝，于佳玉

（榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東榮成264300）

凝膠色譜凈化—高效液相色譜法測(cè)定辣椒中的辛硫磷殘留量

周宏霞，韓喜東，于軍強(qiáng)，顏顯輝，于佳玉

（榮成出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東榮成264300）

研究了辣椒中辛硫磷的液相色譜分析方法。樣品經(jīng)乙腈提取，凝膠色譜凈化后，用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器在280nm波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：辛硫磷在0.1～10.0mg/kg范圍內(nèi)回歸方程為Y=22.2638209X-0.8016，相關(guān)系數(shù)為0.99996，方法檢出限為0.02mg/kg，平均回收率為80.8%～96.6%，變異系數(shù)為0.80%～4.45%。方法的靈敏度、精密度和檢測(cè)限都符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

高效液相色譜法，凝膠色譜，辛硫磷，辣椒

辛硫磷（Phoixm），又名腸硫磷、倍睛松，化學(xué)名稱(chēng)O，O-二乙基-O-a-氰基亞芐氨基氧硫逐磷酸酯，為高效、廣譜、低毒的殺蟲(chóng)劑，被認(rèn)為是甲胺磷、樂(lè)果等高毒農(nóng)藥的替代產(chǎn)品。辛硫磷能與多種農(nóng)藥進(jìn)行混配，在果樹(shù)生產(chǎn)上應(yīng)用廣泛，我國(guó)以及美國(guó)、澳大利亞、歐盟等許多國(guó)家和國(guó)際組織都制定了該農(nóng)藥的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)0.05mg/kg［1］。國(guó)內(nèi)外有關(guān)辛硫磷的殘留分析方法主要是氣相色譜法，但是由于辛硫磷是一種熱不穩(wěn)定性農(nóng)藥，高溫下易分解，給氣相色譜分析帶來(lái)一定困難［2］。近年來(lái)國(guó)內(nèi)使用高效液相色譜法分析辛硫磷農(nóng)藥制劑及其殘留已有報(bào)道［2-6］，但是有關(guān)辣椒中辛硫磷的液相測(cè)定未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用乙腈提取，經(jīng)凝膠色譜凈化，建立了辣椒中辛硫磷的液相檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乙睛、乙酸乙酯、環(huán)己烷、甲醇 均為色譜純；水超純水；氯化鈉 分析純；辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品 100!g/mL，中國(guó)環(huán)境檢測(cè)技術(shù)中心提供，準(zhǔn)確移取1mL辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品于5mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成20!g/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于冰箱保存，使用時(shí)再稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

HP1100高效液相色譜儀 配備有G1311A型四元泵、G1322A型脫氣機(jī)、G1313A型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器及Agilent化學(xué)工作站；均質(zhì)器 瑞士 BUCHI旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；J2 Scientific GPC凝膠色譜儀，氮吹儀，旋渦混合器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取 稱(chēng)取25g均勻樣品（精確至0.01g）于100mL燒杯，加入50mL乙腈后轉(zhuǎn)移至高速勻漿機(jī)中，高速均漿1min后，過(guò)濾至100mL具塞刻度量筒中（量筒內(nèi)已放置5～7g NaCl）。蓋上塞子，劇烈振蕩1min，靜置，準(zhǔn)確吸取20mL上層清液于蒸餾瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，后氮?dú)獯蹈伞?/p>

1.2.2 凈化 用10mL乙酸乙酯∶環(huán)己烷（1∶1）溶解提取物，并轉(zhuǎn)移至GPC自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)配套試管中。樣品通過(guò)5mL樣品環(huán)注入GPC柱，泵流速5.0mL/min，棄去0～9.5min流分，收集9.5～14min流分，15～20min沖洗GPC柱。洗脫液為乙酸乙酯-環(huán)己烷（1∶1，V/V）混合溶液。將收集的流分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約1mL，用氮?dú)獯抵两?，以甲醇∶水?0∶30）溶解并定容至1mL，過(guò)0.45!m的濾膜，待HPLC分析。

1.2.3 色譜條件 Agilent Extend-C18色譜柱（150mm ×4.6mm，i.d.，5!m）；流動(dòng)相：V（甲醇）∶V（水）= 70∶30；流速為 1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；進(jìn)樣量：10!L。在上述條件下辛硫磷的保留時(shí)間約為10.554min（見(jiàn)圖1）。

圖1 辛硫磷標(biāo)樣色譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取試劑的選擇

實(shí)驗(yàn)中提取辛硫磷常用的溶劑有乙酸乙酯、乙腈，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，乙腈的萃取效果優(yōu)于乙酸乙酯，且基質(zhì)干擾小，因此選用乙腈提取。

2.2 凝膠色譜收集時(shí)間的選擇

取高濃度辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品于GPC自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)配套試管中，用氮?dú)獯抵两?，?0mL乙酸乙酯∶環(huán)己烷（1∶1）溶解，通過(guò)5mL樣品環(huán)注入GPC柱，泵流速5.0mL/min，得到辛硫磷的色譜圖（見(jiàn)圖2）。根據(jù)色譜圖的出峰時(shí)間選定從上樣9.5min開(kāi)始收集，直到14min。

圖2 辛硫磷凝膠色譜圖

2.3 色譜條件的選擇

2.3.1 色譜柱的選擇 根據(jù)辛硫磷的性質(zhì)選擇了反相C18柱，對(duì)比幾種不同型號(hào)的色譜柱進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，Agilent Extend-C18色譜柱（150mm×4.6mm）效果令人滿意。

2.3.2 流動(dòng)相的選擇 選用Agilent Extend-C18色譜柱，對(duì)比乙腈-水體系與甲醇-水體系作流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)甲醇-水體系有利于樣品中各個(gè)峰的分離。并且對(duì)甲醇-水的比例進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相為V（甲醇）∶V（水）=7∶3時(shí)，既能滿足分離要求，又能滿足樣品檢出限要求。

2.3.3 檢測(cè)波長(zhǎng) 在200～400nm范圍內(nèi)對(duì)辛硫磷進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，并繪制波長(zhǎng)曲線，辛硫磷在280nm處有最大吸收，因此本實(shí)驗(yàn)選用280nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 線性相關(guān)

將辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液用流動(dòng)相稀釋成0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0!g/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液，經(jīng)0.45!m濾膜過(guò)濾，取10!L進(jìn)樣測(cè)定，外標(biāo)法定量。以辛硫磷質(zhì)量濃度p（!g/mL）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線（見(jiàn)圖 3）。辛硫磷在0.1～10.0!g/mL之間有很好的線性關(guān)系，曲線的回歸方程為：Y=22.2638209X-0.8016，R2=0.99996，其中Y為縱坐標(biāo)峰面積，X為橫坐標(biāo)辛硫磷的質(zhì)量濃度（!g/mL）。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 方法的準(zhǔn)確度與精密度

在辣椒空白樣品中分別加入高、中、低3個(gè)水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，放置1h，使標(biāo)準(zhǔn)溶液被樣品充分吸收。按樣品處理步驟操作，高效液相色譜測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 辣椒中添加辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均回收率及變異系數(shù)

3 結(jié)論

本方法流動(dòng)相選擇甲醇+水=7+3（V/V），色譜柱選用 Agilent Extend-C18色譜柱（150mm× 4.6mm，i.d.，5!m），1.0mL/min流速時(shí)，基線平穩(wěn)，峰形對(duì)稱(chēng)，與其他雜質(zhì)能夠分離完全。將辣椒進(jìn)行不同水平的添加回收率實(shí)驗(yàn)，添加濃度為0.02、0.1、1.0mg/kg，其回收率為80.8%～96.6%，變異系數(shù)為0.8%～4.45%，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。在上述選定的色譜條件下，辛硫磷的儀器最小檢出量為0.05ng。在實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)辛硫磷在辣椒中的最低檢出濃度進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)條件下，辛硫磷的最低檢出濃度為0.02mg/kg.而辛硫磷的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)為0.05mg/kg，本方法能滿足分析的要求。

［1］李靜，徐國(guó)鋒，聶繼云，等.分散固相萃取一氣相色譜法測(cè)定水果中辛硫磷農(nóng)藥殘留量［J］.中國(guó)果樹(shù)，2008（1）：64-66.

［2］賀敏，戴榮彩，余平中，等.小麥和土壤中辛硫磷殘留量的液相色譜分析方法研究［J］.華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2008，23（2）：210-213.

［3］鄧叢蕊，劉思全，楊秀利.液相色譜法同時(shí)測(cè)定辛硫磷和氯氰菊酯［J］.光譜實(shí)驗(yàn)室，2003，20（1）：59-61.

［4］張興國(guó).20%三唑·辛乳油的液相色譜分析［J］.農(nóng)藥，2004，43（5）：236-237.

［5］郭麗，梁沛，劉艷，等.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定水樣中辛硫磷和氯氰菊酯［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2005，24（5）：12-14.

［6］王勇，周宏深，同秋成，等.高效液相色譜法測(cè)定濃縮胡蘿卜汁中辛硫磷殘留量［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2006，25（6）：81-83.

Analysis of residue of phoxim in hot pepper by GPC and HPLC

ZHOU Hong-xia，HAN Xi-dong，YU Jun-qiang，YAN Xian-hui，YU Jia-yu
（Rongcheng Entry-Exit Inspection and Quarantine Burea，Rongcheng 264300，China）

A method for the determination of phoxim in hot pepper was established by HPLC.Residue of phoxim was extracted from samples with acetonitrile，cleaning-up was performed by GPC.The target compound in samples was determined by HPLC with PDA detector at wavelength 280nm.The results showed that the linear range of phoxim was 0.1～10.0mg/kg and regression equation was Y=22.2638209×-0.8016（R2=0.99996）.The limit of quantification was 0.02mg/kg in hot pepper.The average recoveries of phoxim from hot pepper were 80.8%～96.6%，The coefficients of variation were 0.80%～4.45%.The method proved sensitive，accurate and precise for pesticide residue analysis.

HPLC；GPC；phoxim；hot pepper

TS207.3

A

1002-0306（2010）07-0355-03

2009-06-15

周宏霞（1981-），女，碩士研究生，研究方向：食品檢測(cè)分析。