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        阿司匹林對胃癌細(xì)胞株的作用研究

        2010-10-20 05:08:18南京醫(yī)科大學(xué)附屬江寧醫(yī)院211100張有成
        首都食品與醫(yī)藥 2010年20期
        關(guān)鍵詞:胃癌生長實(shí)驗(yàn)

        南京醫(yī)科大學(xué)附屬江寧醫(yī)院(211100) 張有成

        南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 (210029) 丁永斌 夏建國

        如何在早期預(yù)防胃癌、延遲早期胃癌向進(jìn)展期發(fā)展成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。其中,化學(xué)預(yù)防成為熱點(diǎn)之一。化學(xué)預(yù)防是指用一些天然或合成的化學(xué)藥物干預(yù)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。阿司匹林作為非甾體類藥物(nonsteroidalantiinflammatorydrug,NSAID)的代表藥物,幾十年來在臨床上廣泛用于各類風(fēng)濕和類風(fēng)濕、心血管疾病。近年的研究表明,其尚有抗腫瘤增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用,長期服用阿司匹林可以顯著降低結(jié)腸癌的死亡率(40%~50%)[1]。本研究采用MTT法觀察阿司匹林對胃癌細(xì)胞生長的影響,并建立裸鼠移植瘤模型,觀察阿司匹林對移植瘤生長的影響,并討論其作用機(jī)制。

        1 材料和方法

        1.1 材料 人胃癌細(xì)胞株SGC7901由江蘇省人民醫(yī)院普外科實(shí)驗(yàn)室提供。BALB/c nu/nu裸小鼠,雄性,鼠齡3周,體重18.2±0.6g,購自上海動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

        1.2 方法

        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) SGC7901胃癌細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%滅活的新生小牛血清、100U/ml、100U/ml鏈霉素的RPMII640培養(yǎng)液中,取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

        1.2.2 MTT比色實(shí)驗(yàn) 取對數(shù)生長期的SGC7901細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,按每孔3.5×104個(gè)細(xì)胞種進(jìn)96孔板中,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)24小時(shí)后,分別加入終濃度為0.1、1.0、8.0mmol/L的阿司匹林,每一濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔,以不含阿司匹林培養(yǎng)基的細(xì)胞作為陰性對照,以空白孔調(diào)零。繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72小時(shí),每孔加MTT20μl,4小時(shí)后棄去上清液,每孔加DMS0150μl,振蕩10分鐘,570nm處測定光吸收值(A值)。按照下列公式計(jì)算抑制率:抑制率(%)=(1-試驗(yàn)組平均A值/對照組平均A值)×100%。

        1.2.3 人胃癌裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn) 人胃癌細(xì)胞SGC7901按2×106個(gè)細(xì)胞接種于裸鼠前腋下,12只裸鼠隨即分成兩組,治療組于接種次日開始腹腔灌注阿司匹林10mg/kg,對照組腹腔注射生理鹽水。第30天處死裸鼠。測量兩組胃癌種植瘤的長徑、短徑及瘤種。按下列腫瘤體積及腫瘤生長抑制率:腫瘤體積=1/2長徑×短徑,腫瘤生長抑制率=(對照組腫瘤體積-治療組腫瘤體積)/對照組腫瘤體積×100%。

        2 結(jié)果

        2.1 阿司匹林對SGC7901增殖的影響 隨著阿司匹林的濃度升高和作用時(shí)間延長,SGC7901的生長明顯呈抑制作用:阿司匹林作用后細(xì)胞的吸光變化隨著濃度的升高,吸光度逐漸的降低(附表1)。阿司匹林對SGC7901的抑制率,隨濃度升高和時(shí)間的延長(附表2),抑制率逐漸升高,各組之間有顯著性差異(P<0.05)。

        2.2 阿司匹林對移植瘤的影響 兩組裸鼠均有胃癌原位移植瘤的生長,其組織經(jīng)病理切片檢查證實(shí)為胃腺癌,阿司匹林組腫瘤的體積為0.874±0.058cm3,瘤重為0.975±0.067g,對照組腫瘤的體積為1.579±0.115cm3,瘤重為1.674±0.094g,兩者比較有顯著差異(P<0.05),抑制率達(dá)44.6%。(見附圖)

        附圖 阿司匹林對移植瘤的影響

        附表1 阿司匹林作用后的吸光度

        附表2 阿司匹林對SGC7901的抑制率

        3 討論

        阿司匹林是世界范圍內(nèi)使用最廣泛的藥物之一。最近的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)調(diào)查顯示,常規(guī)服用NSAID可使結(jié)腸癌的發(fā)病危險(xiǎn)性減少50%,可降低食管癌及胃癌發(fā)病率,即NSAID對胃腸道腫瘤可能具有防治作用[2]。

        本實(shí)驗(yàn)使用MTT法測定阿司匹林對胃癌細(xì)胞的作用,結(jié)果顯示,阿司匹林濃度越高,胃癌細(xì)胞受到的抑制作用越明顯,且其抑制作用隨著時(shí)間的延長更加明顯。

        體外移植瘤實(shí)驗(yàn)中,使用阿司匹林腹腔灌注組的移植瘤明顯小于對照組腫瘤,并且裸鼠的一般情況也是干預(yù)組好于對照組,通過解剖裸鼠尸體,干預(yù)組并沒有出現(xiàn)明顯的消化道出血、潰瘍等病變,提示了小劑量的阿司匹林在裸鼠抗腫瘤化學(xué)預(yù)防作用中的安全性。研究表明阿司匹林能抑制胃癌細(xì)胞和移植瘤的生長,具有一定的抗腫瘤作用。目前,消化道腫瘤,尤其是胃癌就診病例幾乎均為中晚期患者,就其治療而言,遠(yuǎn)期療效尚無突破性進(jìn)展。隨著腫瘤發(fā)病人群的日趨年輕化,腫瘤對人類的危害也日益嚴(yán)重。

        針對比較明確的腫瘤病因以及相關(guān)危險(xiǎn)因素的一級預(yù)防固然是腫瘤防治的理想策略,但是由于腫瘤發(fā)病的多階段性以及各相關(guān)危險(xiǎn)因素之間交互作用的復(fù)雜性,一級預(yù)防還難在實(shí)際工作中開展[3]。因此,除了改善膳食結(jié)構(gòu)與采用先進(jìn)的早期診斷、治療技術(shù),做到早期診斷和早期治療外,尋找有效的化學(xué)預(yù)防藥物已成為新近腫瘤二級預(yù)防的策略[4][5]。以阿司匹林為代表的NSAID有望在胃癌等腫瘤及其癌前病變的化學(xué)預(yù)防領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展,研究的最終目標(biāo)是為把NSAID作為腫瘤的化學(xué)預(yù)防藥物提供科學(xué)依據(jù)。

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