北京市海淀區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100083） 饒金華

北京市垂楊柳醫(yī)院（100022） 陸紅柳

北京市海淀區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100083） 李東輝

復(fù)方氨酚烷胺片是常用治感冒、抗病毒的非處方藥，其主要成分每片含對(duì)乙酰氨基酚250mg、鹽酸金剛烷胺100mg、人工牛黃10mg、咖啡因15mg、馬來(lái)酸氯苯那敏2 mg。采用《化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》[1]，僅控制對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺的含量，其他組分僅是定性，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方氨酚烷胺片中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏的含量。

1 儀器與試藥

WATERS 2690高效液相色譜儀。對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供），復(fù)方氨酚烷胺片（A廠批號(hào)090160，B廠批號(hào)090218，C廠批號(hào)090806），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，戊烷磺酸鈉和磷酸均為分析純?cè)噭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 WATERS symmetry C18（4.6mm×150mm，5μm）；柱溫30℃；流動(dòng)相：0.012mol·L-1戊烷磺酸鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH3.0）-甲醇（85∶15）；檢測(cè)波長(zhǎng)214nm；流速1ml/min；進(jìn)樣量20μl。

2.2 對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制 精密稱取馬來(lái)酸氯苯那敏10mg置20ml量瓶中，加入流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品312.50mg、80℃減壓干燥4h的咖啡因?qū)φ掌?8.75mg，置50ml量瓶中，加入馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品儲(chǔ)備液5.0ml，加入流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 空白對(duì)照溶液 按處方稱取除對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、馬來(lái)酸氯苯那敏外的其他藥物，即鹽酸金剛烷胺200 mg、人工牛黃20 mg及黏合劑80mg，按供試品溶液方法配制作為空白對(duì)照溶液。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取空白對(duì)照品溶液和樣品含量測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液和對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣，結(jié)果見附圖1，表明輔料及其他組分對(duì)測(cè)定組分無(wú)干擾。

附圖 色譜圖

2.5 線性關(guān)系 精密量取各對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0ml分別置6個(gè)100ml量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，取20μl進(jìn)樣，分別測(cè)定峰面積，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，組分濃度X(μg/ml)為橫坐標(biāo)計(jì)算回歸方程，對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏回歸方程(n=6)分別為Y=3.42×104X-3.32×105，r=1.000 Y=1.88×105X-1.71×104，r=1.000 Y=2.94×104X-4.29×103，r=0.9998，線性范圍分別為31.25～625.00μg·ml-1，1.8～37.5μg·ml-1，0.24～5.00μg·ml-1，線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，3種成分對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏精密度結(jié)果RSD分別為0.1%，0.2%，0.9%(n=5)，表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液適量，于室溫下放置，每隔2h測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5次。結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏峰面積的RSD分別為0.2%，0.4%和0.5% (n=5)。表明該藥物溶在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品，精密稱取5份，按樣品測(cè)定下方法測(cè)定3種組分的含量，結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏峰面積的RSD分別0.1%，0.2%和0.9%。

附表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

附表2 樣品含量測(cè)定

2.9 回收率測(cè)定 精密稱取已知含量的樣品適量（相當(dāng)于含對(duì)乙酰氨基酚25mg、咖啡因1.5mg、馬來(lái)酸氯苯那敏0.2mg）置100ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖，使各組分溶解，精密加入各對(duì)照品儲(chǔ)備液4ml，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，照樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果見附表1。

2.10 樣品測(cè)定 精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚50mg），置100ml量瓶中，用流動(dòng)相充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。另精密稱取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品10mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，為對(duì)照品溶液Ⅰ；精密稱取80℃減壓干燥4h的咖啡因?qū)φ掌?5mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，為對(duì)照品溶液Ⅱ；精密稱取對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品25mg，置50ml量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解，精密加入對(duì)照品溶液Ⅰ2ml和對(duì)照品溶液Ⅱ10ml，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為混合對(duì)照品溶液。用0.45μm微孔濾膜過濾，分別取20μl注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見附表2。

3 討論

3.1 檢定波長(zhǎng)的確定 因處方中對(duì)乙酰氨基酚量遠(yuǎn)大于咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏，214～216nm為其吸收峰的峰谷[2]，確定214nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在分析測(cè)定過程中，3個(gè)組分得到良好的分離效果。

3.2 流動(dòng)相的選擇 曾經(jīng)選用乙腈-0.03mol/L磷酸氫二銨等作流動(dòng)相，但分離效果不理想。加入戊烷磺酸鈉以及將pH值調(diào)至酸性后，并且有機(jī)相采用甲醇后峰形得到改善，3種組分得到理想的分離。故采用0.012mol·L-1戊烷磺酸鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH3.0）-甲醇（85∶15）為流動(dòng)相。

3.3 咖啡因在干燥至恒重后將失去一分子水，按外標(biāo)法算得的咖啡因含量最后要乘上系數(shù)1.0927。

3.4 復(fù)方氨酚烷胺片含有咖啡因是精神藥品，因此有必要對(duì)咖啡因含量進(jìn)行檢測(cè)。

3.5 本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，專屬性好，不但可以用于測(cè)定復(fù)方氨酚烷胺片的含量，還可以推而廣之用于其他含有上述3種組分的復(fù)方抗感冒藥的分析。