于 莉,金哲雄,蔣玉清

(哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院,150076)

仙鶴草[1]為常用中藥,來源于薔薇科植物龍牙草(Agrimonia pilosa Ledeb.)的干燥地上部分,主產(chǎn)于浙江、江蘇、湖北,全國大部分地區(qū)亦產(chǎn).主要用于咯血,吐血,崩漏下血,瘧疾,血痢,脫力勞傷,癰腫瘡毒,陰癢帶下.

尼古丁是煙草中最主要的生物堿,占全部煙草生物堿的95%以上,也是吸煙成癮的決定性因素,長期吸煙會對人體產(chǎn)生很大的毒副作用[2].生產(chǎn)低毒香煙,降低煙草對人類的危害已成為煙草業(yè)中的主流趨勢.“綠色煙草”正在成為中國煙草新的高地,新的起點.鞣質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中含有大量的酚羥基,可以與多種生物堿發(fā)生分子復(fù)合反應(yīng),因此鞣質(zhì)成分對煙草中的尼古丁具有一定的清除作用[3].

1 實驗材料

1.1 藥材與試劑

仙鶴草采于哈爾濱市郊帽兒山,經(jīng)哈爾濱商業(yè)大學(xué)金哲雄教授鑒定為薔薇科植物龍牙草Agrimonia pilosa Ledeb的干燥地上部分;市售煙絲;丙酮、甲醇、磷酸、磷酸二氫鉀、雙蒸水、乙醇等,以上試劑均為分析純;過濾嘴若干,其成分為醋酸纖維素絲;尼古丁標(biāo)準(zhǔn)品.

1.2 實驗儀器

HPLC(Agilent Technologies 1200 Series);中草藥粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司);KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆明市超聲儀器有限公司);循環(huán)水真空泵SHB-95(鄭州杜甫儀器廠);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀N-1000(上海愛郎儀器有限公司);PHS-3C精密數(shù)顯酸度計(上海偉業(yè)儀器廠);電熱恒溫真空干燥箱;ES-C300S電子天平等.

2 仙鶴草中鞣質(zhì)降低煙絲中尼古丁質(zhì)量濃度的研究

2.1 色譜條件

色譜柱:美國迪馬公司C18柱(4.6 mm×200 nm,5μm);檢測波長:262 nm;柱溫:室溫;流速:1.0m L/min;流動相:甲醇 ∶0.02 mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液(用磷酸調(diào)至pH=3)=95∶5.

2.2 樣品處理

仙鶴草藥品處理[4]:稱取仙鶴草的干燥粗粉,用12倍量70%丙酮溶劑,浸泡24 h,100 kHz條件下超聲提取60min,抽濾,減壓回收丙酮后,用氯仿萃取,除去葉綠素等雜質(zhì)成分,其水層再分別用乙酸乙酯、正丁醇萃取,40℃減壓濃縮,干燥至恒重.得到仙鶴草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物.上述粉末均取0.1 g,分別置于100 mL容量瓶中,加入30%甲醇溶解至刻度,備用.

煙草制品的處理:準(zhǔn)確稱取煙絲粉末0.500 g24份,分別置于50 mL的錐形瓶中,分別向其中加入制好的仙鶴草總鞣質(zhì)0、2、4、6、8、10、12、14 m L,乙酸乙酯萃取物0、2、4、6、8、10、12、14 mL,正丁醇萃取物0、2、4、6、8、10、12、14mL.然后用30%甲醇補充至15mL,超聲提取60m in.過濾,濾液用甲醇定容至25mL,4℃保存,備用.

2.3 實驗方法

采用HPLC對上述處理好的24份樣品溶液進行測定,每次進樣量為4μL每份重復(fù)進樣3次,測定其峰面積值,取平均值.然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算其尼古丁的質(zhì)量濃度及其減少的百分比.

2.4 實驗結(jié)果

加入不同質(zhì)量濃度總鞣質(zhì)后樣品中尼古丁質(zhì)量濃度結(jié)果見表1,圖1.

表1 加入不同質(zhì)量濃度總鞣質(zhì)后樣品中尼古丁含量及清除率

加入不同質(zhì)量濃度乙酸乙酯萃取物后樣品中尼古丁質(zhì)量濃度結(jié)果見表2,圖2.

表2 加入不同質(zhì)量濃度乙酸乙酯萃取物后樣品中尼古丁質(zhì)量濃度及清除率

加入不同質(zhì)量濃度正丁醇萃取物后樣品中尼古丁質(zhì)量濃度結(jié)果見表3、圖3.

表3 加入不同質(zhì)量濃度正丁醇萃取物后樣品中尼古丁含量及清除率

3 仙鶴草中鞣質(zhì)降低煙氣中尼古丁質(zhì)量濃度的研究

3.1 鞣質(zhì)添加濾嘴的制備

3.1.1 煙卷的制備

精確稱取仙鶴草中經(jīng)過不同溶劑萃取的鞣質(zhì)處理的煙絲和未處理的煙絲各0.5 g,分別用特制卷煙紙和過濾嘴制成濾嘴煙卷.同時,另精密稱取未經(jīng)鞣質(zhì)處理的煙絲0.5 g若干份,用特質(zhì)卷煙紙制成無濾嘴煙卷,做對照試驗.將制得的煙卷20℃恒溫干燥24 h,備用.

3.1.2 鞣質(zhì)濾嘴的制備

浸潤溶劑的選擇 所選浸潤溶劑應(yīng)符合下列條件:1)能很好的溶解鞣質(zhì)成分且不影響鞣質(zhì)的穩(wěn)定性;2)不與醋酸纖維濾嘴發(fā)生反應(yīng);3)對人體沒有毒性.基于以上原因,采用40%乙醇為浸潤溶劑.

浸潤溶液的配置 稱取仙鶴草的干燥粗粉,用12倍量70%丙酮溶劑,浸泡24 h,100 kHz條件下超聲提取60min,抽濾,減壓回收丙酮后,用氯仿萃取,除去葉綠素等雜質(zhì)成分,其水層再分別用乙酸乙酯、正丁醇萃取,40℃減壓濃縮,干燥至恒重.得到仙鶴草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物.將上述所得的仙鶴草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物粉末,分別用40%乙醇配制成0、10、20、30、40、50、60mg/mL七個質(zhì)量濃度的溶液.

鞣質(zhì)濾嘴的制備 取制備好的濾嘴煙卷,每8支為一組,將濾嘴端分別插入仙鶴草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物不同溶液乙醇浸潤溶液中,5 s后取出,20℃恒溫干燥12 h,備用.

3.2 實驗方法

3.2.1 吸煙裝置的制備

選取合適的導(dǎo)管,其一端連接煙卷濾嘴,另一端連接一個大注射器,注射器插入盛有0.05mol/mL的HCl溶液捕捉液,此裝置為簡易吸煙裝置.

3.2.2 樣品制備

將制備好的的無濾嘴香煙和經(jīng)鞣質(zhì)處理過的濾嘴香煙分別放在簡易吸煙機上,并點燃,按照國際吸煙標(biāo)準(zhǔn)進行測試,每分鐘1次,每次2 s,將煙卷燃至距離濾嘴端1 cm處時,熄滅.每份捕捉液收集8支煙.然后,將捕捉液過濾并轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,定容至刻度,備用.

3.2.3 質(zhì)量濃度測定

采用HPLC分別對樣品溶液進行測定,每次進樣量20μL,測定其峰面積值,然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算尼古丁質(zhì)量濃度.因醋酸纖維素濾嘴對尼古丁有截留作用,所以采用無濾嘴煙卷中尼古丁質(zhì)量濃度為對照,計算其他樣品尼古丁質(zhì)量濃度減少百分比.

3.2.4 實驗結(jié)果

仙鶴草總鞣質(zhì)濾嘴對未處理的煙絲Ⅰ和經(jīng)過仙鶴草總鞣質(zhì)處理的煙絲Ⅱ制成的煙卷,煙氣樣品中尼古丁質(zhì)量濃度影響結(jié)果見表4.

表4 仙鶴草鞣質(zhì)對兩種樣品煙氣中尼古丁質(zhì)量濃度影響

乙酸乙酯萃取物濾嘴對未處理的煙絲Ⅲ,和經(jīng)過乙酸乙酯萃取物處理的煙絲Ⅳ制成的煙卷,煙氣樣品中尼古丁質(zhì)量濃度影響結(jié)果見表5.

表5 乙酸乙酯萃取物對兩種樣品煙氣中尼古丁質(zhì)量濃度影響

正丁醇萃取物濾嘴對未處理的煙絲Ⅴ,和經(jīng)過乙酸乙酯萃取物處理的煙絲Ⅵ制成的煙卷,煙氣樣品中尼古丁質(zhì)量濃度影響結(jié)果見表6.

表6 正丁醇萃取物對兩種樣品煙氣中尼古丁質(zhì)量濃度影響

4 結(jié) 語

仙鶴草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對煙絲中尼古丁的最大清除率分別為17.24%、26.44%和20.21%.

仙鶴草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物對煙氣中尼古丁的最大清除率為57.1%、69.1%和62.8%.

綜上所述,仙鶴草鞣質(zhì)成分具有降低煙草中尼古丁的作用,可為低毒香煙的研制提供一定的理論依據(jù).

仙鶴草原藥材易得,價格低廉,實驗過程操作簡單,可推廣于工業(yè)化生產(chǎn),具有廣泛的經(jīng)濟效益和社會效益.

[1]YING Z.Studies on the Chemical Constituments from Agrimonia pilosa Leseb and Its Pharmacological Activities[J].SpecialWild Economic Animal and Plant Research.2007,2:57-61.

[2]常福厚.尼古丁,焦油半數(shù)致死量的測定[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1999,21:190-1911.

[3]CHANARAT P,CHANARAT N,FUJIHARA M,et al.Immunopharmacal logicalactivity of polysaccharide from the pericarb of mangosteen garcinia;phagocyti cintrac intracellular killingactivities[J].JMed Assoc Thai,1997,80(1):149-154.

[4]杜 超.HPLC測定仙鶴草秋芽、地下部分和地上部分鶴草酚含量[J].中國現(xiàn)代中藥,2008,10(3):16-18.