楊連榮,張哲鋒,齊樂(lè)輝,楊軍濤,王金杰,李彥冰

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱150040;2.黑龍江省獸藥飼料監(jiān)察所,哈爾濱150069)

長(zhǎng)柱金絲桃又名紅旱蓮、湖南連翹,系藤黃科金絲桃屬植物黃海棠(Hypericum ascyron L.)的全草[1],具有涼血止血、平肝消腫、散結(jié)排膿、清熱解毒等功效.該植物可用于抗抑郁癥、抗病毒、抗癌等[2-3].生于荒坡、山野、路邊,我國(guó)東北地區(qū)及黃河、長(zhǎng)江、珠江流域均有分布.近年研究表明,該屬植物具有抗抑郁等藥理活性[4-8].本研究在長(zhǎng)柱金絲桃抗抑郁藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上[9],選用小鼠強(qiáng)迫游泳模型對(duì)其抗抑郁有效部位進(jìn)行了篩選研究,以便為該植物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

昆明種雌性小鼠,(20±2)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,飼養(yǎng)在25℃條件下,自由進(jìn)食飲水,實(shí)驗(yàn)前穩(wěn)定3 d.

1.2 藥物

陽(yáng)性對(duì)照藥:百憂解(鹽酸氟西汀),美國(guó)禮來(lái)公司生產(chǎn),禮來(lái)蘇州制藥有限公司分裝,批號(hào)A202606,實(shí)驗(yàn)前用蒸餾水配成1 mg/mL(以氟西汀計(jì))的溶液;長(zhǎng)柱金絲桃(產(chǎn)地為黑龍江省尚志市,經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院于加賓教授鑒定為Hypericum ascyron L.);0.9%生理鹽水.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品的制備

長(zhǎng)柱金絲桃全草,用80%乙醇回流提取,回收乙醇,減壓干燥,干浸膏經(jīng)熱水處理得A(溶于熱水)部分,B(沉淀)部分,稱取A、B部分適量,分別用蒸餾水溶解,配制成每毫升相當(dāng)于0.5 g生藥量的溶液,備用.經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)后,稱取A部分適量,上聚酰胺層析柱,分別以水、生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇、生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇和生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.5%氨水洗脫,得到各洗脫部分,備用.

2.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

100只小鼠隨機(jī)分組,每組10只.空白對(duì)照組和百憂解組實(shí)驗(yàn)前24、5 h均灌胃給予生理鹽水20 mL/kg,實(shí)驗(yàn)前1 h空白對(duì)照組繼續(xù)給予生理鹽水,百憂解組灌胃給予配好的鹽酸氟西汀溶液20mL/kg,其余組實(shí)驗(yàn)前24、5、1 h均分別灌胃給予配好的藥液,按20 mL/kg給藥.

小鼠絕望時(shí)間的測(cè)定:將小鼠放入高20 cm,直徑14 cm的圓柱型玻璃杯中,每缸1只,用紙板隔離各玻璃杯,杯中水深l0 cm,水溫控制在(25±1)℃,每做完一只后即換水.小鼠游泳時(shí)間為6 min,累計(jì)后4min內(nèi)小鼠不動(dòng)時(shí)間.整個(gè)過(guò)程用數(shù)碼攝像記錄,結(jié)果評(píng)判由非實(shí)驗(yàn)人員完成,以保證結(jié)果客觀.所謂不動(dòng)是指小鼠在水中停止掙扎,或呈漂浮狀態(tài),僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面.

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±S)表示,顯著性檢驗(yàn)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單向方差分析,以P≤0.05為差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

3 數(shù)據(jù)及結(jié)果

3.1 樣品A、B部分對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳絕望行為的影響

表1結(jié)果表明,長(zhǎng)柱金絲桃全草的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%乙醇提取物,經(jīng)熱水處理所得的A部分能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間,與空白對(duì)照組比較,提取物A(按生藥量計(jì)10 g/kg)有顯著性差異,提取物B沒(méi)有顯著性差異,故對(duì)A部分進(jìn)行進(jìn)一步篩選.

表1 A、B部分對(duì)小鼠絕望行為的影響(n=10)

表1 A、B部分對(duì)小鼠絕望行為的影響(n=10)

注:與空白對(duì)照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 劑量/(g?kg-1)游泳不動(dòng)時(shí)間/s空白組-125.30±26.66百憂解組(以氟西汀計(jì))0.02 73.90±22.25**提取物A組(含生藥量)10 99.30±27.02*提取物B組(含生藥量)10 115.60±23.22

3.2 各洗脫部分對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳絕望行為的影響

表2結(jié)果表明,提取物A的30%乙醇洗脫部分能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間,與空白對(duì)照組比較,30%乙醇洗脫部分(按生藥量計(jì)10 g/kg)有顯著性差異,其余部分沒(méi)有顯著性差異,表明此部分在行為絕望動(dòng)物模型上有抗抑郁作用,是其抗抑郁有效部位.

表2 各部分對(duì)小鼠絕望行為的影響,n=10)

表2 各部分對(duì)小鼠絕望行為的影響,n=10)

注:與空白對(duì)照組比較*P＜0.05,**P＜0.01

組別 劑量/(g?kg-1)游泳不動(dòng)時(shí)間/s空白組-123.10±32.64百憂解組(以氟西汀計(jì))0.02 63.50±31.70**水洗脫組(含生藥量)10 112.80±22.61 30%乙醇洗脫組(生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù))10 88.70±16.10**95%乙醇洗脫組(生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù))10 115.70±29.56 3.5%氨水洗脫組(生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù))10 113.50±24.09

4 結(jié) 語(yǔ)

抑郁動(dòng)物模型對(duì)抗抑郁藥的研究至關(guān)重要,強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是利用動(dòng)物行為絕望而設(shè)計(jì)的一種經(jīng)典的抗抑郁評(píng)價(jià)模型,它提供了一個(gè)無(wú)法回避的壓迫環(huán)境,作為一種應(yīng)激源可誘導(dǎo)小鼠的絕望行為,不同作用機(jī)制的抗抑郁藥物可選擇性縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間,提高對(duì)應(yīng)激的耐受性.由于該望模型操作簡(jiǎn)單快捷,被廣泛用于抗抑郁藥物的篩選和評(píng)價(jià)[10].

實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),生藥量質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇洗脫部分能明顯縮短小鼠強(qiáng)迫游泳絕望時(shí)間,并在此基礎(chǔ)上判斷其為抗抑郁有效部位,對(duì)于具體的活性成分及其機(jī)制有待進(jìn)一步研究.

[1]朱有昌.東北藥用植物[M].哈爾濱:黑龍江科技出版社,1989:743.

[2]謝宗萬(wàn).全國(guó)中草藥匯編[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:396

[3]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊(cè))[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社.1997,1002-1003.

[4]徐 立,魏翠娥,趙明波,等.貫葉金絲桃總黃酮對(duì)小鼠抑郁癥模型的實(shí)驗(yàn)研[J].中國(guó)中藥雜志,2005,30(15):1184-1188.

[5]王衛(wèi)星,胡新穎,劉 鵬,等.金絲桃苷等10個(gè)天然黃酮類化合物的抗抑郁活性篩選研究[J].中草藥,2007,38(6):900-902.

[6]BUTTERWERK V,JURGENLIEMKG,NAHRSTEDTA,etal.Flavonoids from Hypericum perforatum show antidepres santactivity in the forced swimm ing test[J].Planta Med,2000,66:3-6.

[7]潘陽(yáng)紅,郭寶林.國(guó)產(chǎn)金絲桃屬植物有效成分研究概況[J].中藥材,1993,16(8):40-42.

[8]郁建平,劉興寬.貴州金絲桃揮發(fā)油成分及抗菌活性研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2002,37(12):900-902.

[9]李彥冰,楊 萍,范 鋒,等.長(zhǎng)柱金絲桃提取物抗抑郁作用的研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技,2007,14(增刊):6-7.

[10]鄭麗芳,明 亮.抑郁癥動(dòng)物模型的研究與應(yīng)用[J].安徽醫(yī)藥,2005,9(11):801-804.