陳玉璞

（焦作市食品藥品檢驗(yàn)所，河南焦作 454000）

復(fù)方四嗪利血平片為常用降壓藥品，主要成分為利血平和氫氯噻嗪，其中氫氯噻嗪有利尿、降壓等作用。復(fù)方四嗪利血平片現(xiàn)行國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中氫氯噻嗪只做定性鑒別，無(wú)含量測(cè)定。 本實(shí)驗(yàn)建立用高效液相色譜法測(cè)定其中氫氯噻嗪的含量，作為復(fù)方四嗪利血平片質(zhì)量控制指標(biāo)之一，為控制藥品質(zhì)量，提供了一種簡(jiǎn)單、靈敏、快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UVIKONXL型紫外分光光度計(jì)（法國(guó)）；AE-240雙量程電子天平（瑞士梅特勒公司）；島津高效液相色譜儀（LC-10ADVP泵；SPD-10AVP紫外檢測(cè)器；CS-Light Potrun Analysis數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）。

1.2 試藥

氫氯噻嗪對(duì)照品(批號(hào)：10309-0001，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，含量為99.40%）；復(fù)方四嗪利血平片（批號(hào)：080317，鄭州邦泰藥業(yè)有限公司；批號(hào)：080102，新鄉(xiāng)中杰藥業(yè)有限公司；批號(hào)：20090602，鄭州海締邦林制藥有限公司）；水為純凈水，甲醇為一級(jí)色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil-C18（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸鹽緩沖液（30∶66∶4）（0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）；檢測(cè)波長(zhǎng)：272 nm；流速：1.0 ml/min。柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μl；理論塔板數(shù)按氫氯噻嗪計(jì)不低于3000。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品溶液，在180～300 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果在272 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，故選用272 nm為氫氯噻嗪的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取氫氯噻嗪對(duì)照品22.4 mg，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。即得。

2.4 供試品溶液的制備

取本品20片，除去包衣后，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氫氯噻嗪20 mg），置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液5.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按復(fù)方四嗪利血平片的處方工藝，不加氫氯噻嗪，制成陰性對(duì)照品，同供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。在選定的色譜條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣20 μl，從色譜圖上看出，在該色譜條件下，在保留時(shí)間（tR）4.1 min處，供試品和對(duì)照品溶液中出現(xiàn)色譜峰，而陰性對(duì)照溶液未見此色譜峰，表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，氫氯噻嗪的測(cè)定不受其他雜質(zhì)峰干擾。見圖1。

2.6 線性關(guān)系的考察

分別精密量取“2.3”項(xiàng)下氫氯噻嗪對(duì)照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 ml，分別置于 50 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取20 μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程，結(jié)果表明氫氯噻嗪進(jìn)樣量在0.0896～0.0896 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為 Y=44102.9X+1637.05（r=0.9999）。

2.7 精密度試驗(yàn)

取濃度為22.40 μg/ml的氫氯噻嗪對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別測(cè)定峰面積，結(jié)果顯示，氫氯噻嗪RSD=0.76%，表明該法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)下的氫氯噻嗪對(duì)照品溶液每間隔1 h進(jìn)樣1次，共8次，結(jié)果氫氯噻嗪RSD=0.67%。結(jié)果表明樣品在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：080317，鄭州邦泰藥業(yè)有限公司）適量，依法平行測(cè)定6次，結(jié)果氫氯噻嗪RSD=0.93%。結(jié)果表明該法重現(xiàn)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：080317，鄭州邦泰藥業(yè)有限公司）約0.11 g，共6份，精密稱定，分置100ml量瓶中，分別加入“2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液5.0 ml，用流動(dòng)相超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，按色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，各20片，除去包衣后，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氫氯噻嗪20 mg），置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液5.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；另取氫氯噻嗪對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成每毫升中含氫氯噻嗪11.20 μg的溶液。分別精密吸取20 μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件，以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 討論

筆者查閱了許多文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)許多流動(dòng)相中含有乙腈。筆者認(rèn)為，乙腈價(jià)格較貴且有毒，故棄用。部分流動(dòng)相用磷酸鹽緩沖液（1 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）-甲醇-水，筆者進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)1 mol/L磷酸二氫鉀溶液與甲醇混合后有大量渾濁產(chǎn)生。通過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，選用0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液，能達(dá)到滿意效果。

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