劉長(zhǎng)河 常仲樂 邱建華 （山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 泰安 271018）

趙中旺 （山東省汶上縣糧食局）

超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)是加速優(yōu)良種畜繁育和胚胎工程技術(shù)所必不可缺的基礎(chǔ)，但現(xiàn)有超排方法的獲卵率和可用胚數(shù)還都不太穩(wěn)定[1～3]。自2006年代以來，泰安郊區(qū)為了擴(kuò)大遼寧絨山羊的純繁速度，先后自遼寧引進(jìn)絨山羊，以改善當(dāng)?shù)厣窖虍a(chǎn)絨量，為提高純種遼寧絨山羊的數(shù)量，對(duì)遼寧絨山羊?qū)嵤┝顺瑪?shù)排卵和胚胎移植研究。

1 材料與方法

1.1 材料

用于同期發(fā)情的情酮栓由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn)，促卵泡素(FSH)由中國科學(xué)院動(dòng)物研究所生產(chǎn)，供體羊?yàn)榧兎N遼寧絨山羊共40余只，年齡5歲以下，產(chǎn)后60d以上。選擇體型較大、繁殖正常、經(jīng)產(chǎn)的當(dāng)?shù)厣窖蜃鳛槭荏w。

1.2 方法

1.2.1 供體超排處理 于發(fā)情周期任1天在供體山羊陰道內(nèi)放置情酮栓。放置栓后第14d開始進(jìn)行超數(shù)排卵處理：（1）促卵泡素6～7mg以4d遞減量注射；注射2次/d，于第7次注射時(shí)取出情酮栓。（2）去除情酮栓后用結(jié)扎輸精管的公羊試情，接受爬跨時(shí)肌注促黃體素并輸精。間隔8～10h重復(fù)輸精。

1.2.2 胚胎的采集、鑒定 在供體山羊發(fā)情后6～7d，利用手術(shù)法采集桑椹胚和囊胚。按Elsden等的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為A、B、C和D4個(gè)等級(jí)。只有A、B級(jí)胚胎被判定為可用胚。

1.2.3 受體羊的發(fā)情同步處理 受體山羊與供體組同時(shí)放入情酮栓。在供體去除情酮栓前0.5d去除受體情酮栓，去栓后，用試情公羊檢查發(fā)情，并記錄發(fā)情日期和時(shí)間，同組供體與受體同步發(fā)情的差異不超過24h。

1.2.4 胚胎移植 受體母羊局部麻醉，腹中線切口，暴露出卵巢和子宮，向子宮角前1/3移入胚胎。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，統(tǒng)計(jì)各測(cè)定指標(biāo)的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差，用LSD法檢驗(yàn)分析組間差異。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡山羊超數(shù)排卵和胚胎移植效果

在秋季對(duì)43只年齡為1～4歲年齡的遼寧絨山羊采用國產(chǎn)FSH 6～7mg 4d遞減處理。從表1可以看出，2～3歲山羊平均排卵數(shù)最高，顯著高于<1歲山羊；2歲和3歲山羊可用胚率差異不顯著，但顯著高于<1歲山羊。2～3歲山羊胚胎經(jīng)移植妊娠率最高，顯著高于<1歲山羊和4歲山羊。遼寧絨山羊超數(shù)排卵和胚胎移植的最佳年齡應(yīng)為2～3歲。

表1 不同年齡山羊超數(shù)排卵和胚胎移植效果

2.2 季節(jié)對(duì)超數(shù)排卵效果的影響

對(duì)45只2～3歲年齡山羊在春(3～5月)、秋(9～11月)和冬季(12～次年2月)用國產(chǎn)FSH 6～7mg 4d遞減劑量處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，秋季平均排卵數(shù)顯著高于春季，可用胚率顯著高于冬季。春季與冬季在平均排卵數(shù)和可用胚率上差異均不顯著。胚胎經(jīng)移植妊娠率冬季顯著低于春、秋兩季，春季與秋季間無顯著差異。

表2 季節(jié)對(duì)超數(shù)排卵效果的影響

3 討論與小結(jié)

研究發(fā)現(xiàn)，秋季平均排卵數(shù)顯著高于春季，可用胚率顯著高于冬季。春季與冬季在平均排卵數(shù)上差異不顯著。胚胎經(jīng)移植妊娠率冬季顯著低于春、秋兩季，春季與秋季間無顯著差異。這說明，在山東地區(qū)冬季對(duì)山羊移植妊娠率有影響。因此，盡管經(jīng)過多年的飼養(yǎng)馴化遼寧絨山羊似乎已經(jīng)失去繁殖的季節(jié)性，但秋季仍然是遼寧絨山羊的發(fā)情盛季，這一時(shí)期卵巢對(duì)激素的反應(yīng)能力、卵質(zhì)量都優(yōu)于其它季節(jié)。冬季胚胎經(jīng)移植妊娠率低可能與在檢胚及胚胎運(yùn)輸過程中低溫打擊對(duì)胚胎造成損傷有關(guān)[4～5]。

對(duì)于優(yōu)秀供體，人們總是期望盡早實(shí)施超排，獲得大量胚胎進(jìn)行移植[6]。筆者的試驗(yàn)結(jié)果還表明，遼寧絨山羊在1歲前已具備了對(duì)FSH反應(yīng)的能力，超排可以獲得一定數(shù)量的可用胚，但平均排卵數(shù)、可用胚率和妊娠率均明顯低于其它年齡山羊。因此，遼寧絨山羊進(jìn)行超排和胚胎移植的最佳年齡為2～3歲。

[1] Loi P, Ptak G.Embryo transfer and related technologies in sheepreproduction. Reprod Nutr Dev 1998; 38:615–628.

[2] Cognie Y. State of the art in sheep-goat embryo transfer.Theriogenology 1999; 51:105–116.

[3] Ptak G, Loi P.Offspring from onemonth-old lambs: studies on the developmental capability of prepubertal oocytes. Biol Reprod 1999;61:1568–1574.

[4] Ptak G, Dattena M. Ovum pick up in sheep: present situation and future perspectives. 14th International Congress on Animal Reproduction;Stockholm; July 2–6, 2000; p. 267.

[5]Downing JA, Joss J. Ovulation rate and the concentrations of gonadotrophic and metabolic hormones in ewes fed lupin grain. J Reprod Fertil 1995;103:137–145.

[6]王建國，張鎖鏈等，山羊手術(shù)法胚胎移植對(duì)供受體母羊重復(fù)使用的影響[J]，內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),1997,28(3).414-418.