臧瑩安,蔣天宇,楊展基,李春玲

(1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系,廣東廣州 510225;2.廣東梅州大浦縣畜牧局,廣東大浦 514200;3.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所,廣東廣州 510640)

廣東省是中國(guó)養(yǎng)豬大省,2006年廣東省生豬出欄量為3 662萬(wàn)頭,其中3 000頭以下中小規(guī)模養(yǎng)殖占65%,萬(wàn)頭以上豬場(chǎng)僅占12%。在我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)格局中,大中型豬場(chǎng)不斷增加,小型豬場(chǎng)不斷減少。但在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi),中小規(guī)模養(yǎng)殖方式仍將延續(xù),這是我國(guó)和廣東省養(yǎng)豬生產(chǎn)的基本特點(diǎn)[1]。近年來(lái),豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)成為嚴(yán)重危害廣東省中小規(guī)模豬場(chǎng)的重要傳染病,給廣大養(yǎng)豬戶帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,大大地挫傷了他們養(yǎng)豬的積極性[2-4]。本次調(diào)查采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法[5-7]檢測(cè)茂名、惠州、東莞、四會(huì)、鶴山5個(gè)地區(qū)中小規(guī)模規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)PRRS的血清抗體水平,旨在了解廣東省部分地區(qū)中小規(guī)模豬場(chǎng)豬群中PRRSV感染情況及疫苗免疫狀況,為中小規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)PRRS的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢血清 2008年7月至2009年1月,在茂名、惠州、東莞、四會(huì)、鶴山 5個(gè)地區(qū),通過(guò)對(duì)中小規(guī)模豬場(chǎng)各個(gè)階段豬群現(xiàn)場(chǎng)隨機(jī)或豬只死亡后2 h內(nèi)采集送樣的方式收集豬的血清。對(duì)PRR疫苗免疫豬場(chǎng),豬群首免后1個(gè)月采集血樣。從各類型豬場(chǎng)共采集血清樣品866份。其中免疫過(guò)PRR疫苗的豬場(chǎng)血清547份,未免疫過(guò)的豬場(chǎng)血清319份(具體參見(jiàn)結(jié)果中各表)。

1.1.2 試劑 豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)抗體檢測(cè)試劑盒(北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)),包括已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板,標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清,HRPO標(biāo)記抗 PRV gpI抗體,TMB底物溶液,終止液,樣品稀釋液,10倍濃縮洗滌液等;蒸餾水。

1.1.3 儀器 酶標(biāo)檢測(cè)儀(美國(guó)寶特儀器有限公司 ,ELx800),洗滌器,50 μ L,100 μ L 微量移液器或連續(xù)移液器,一次性移液器吸頭,稀釋樣品的u型96孔稀釋板。

1.2 方法

按試劑盒說(shuō)明書(shū)上的方法進(jìn)行。用樣品稀釋液40倍稀釋被測(cè)樣品,取出抗原包被板,在做好標(biāo)記的PRRS孔和NHC孔內(nèi)各自加入100 μ L沒(méi)有稀釋的陰性對(duì)照、100 μ L沒(méi)有稀釋的陽(yáng)性對(duì)照和100 μ L已稀釋好的樣本。室溫下孵育 30 min。然后進(jìn)行洗滌、酶標(biāo)反應(yīng)、顯色反應(yīng)和終止反應(yīng),最后測(cè)量并記錄被檢血清和陰陽(yáng)對(duì)照血清在650nm的吸光度 A(650)。計(jì)算S/P值(樣品/陽(yáng)性對(duì)照比率)(具體方法參見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū))。

PRRS抗體的有無(wú)通過(guò)計(jì)算每個(gè)樣品陽(yáng)性對(duì)照(S/P)的比值判定。如果S/P＜0.4,樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陰性;如果S/P≥0.4,樣品應(yīng)判定為PRRS抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 PRRS未免疫接種豬場(chǎng)調(diào)查結(jié)果

未免疫豬場(chǎng)319份血清樣品檢測(cè)結(jié)果表明,茂名、惠州、東莞、四會(huì)、鶴山 5個(gè)地區(qū)的豬場(chǎng)均有PRRSV感染(表1)。豬群的抗體陽(yáng)性率在57.14%～77.08%之間,平均陽(yáng)性率為66.77%,在送檢的18個(gè)未免疫豬場(chǎng)都曾經(jīng)發(fā)生過(guò)PRRSV的野毒感染,豬場(chǎng)陽(yáng)性率達(dá)到100%。這說(shuō)明,PRRSV普遍存在于廣東這些地區(qū),如果豬場(chǎng)的豬只未進(jìn)行免疫,都極有可能遭到PRRSV野毒感染。

表1 廣東5個(gè)地區(qū)未接種PRRS疫苗免疫豬場(chǎng)的PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1 Antibody positive rate of pig farms not vaccinated with PRRS vaccine in 5 rigions

2.2 PRRS免疫接種豬場(chǎng)調(diào)查結(jié)果

547份來(lái)自PRRS免疫接種豬場(chǎng)的血清樣品檢測(cè)結(jié)果表明:茂名、惠州、東莞、四會(huì)、鶴山 5個(gè)地區(qū)的22個(gè)進(jìn)行過(guò)PRRS疫苗免疫豬場(chǎng)的PRRSV抗體陽(yáng)性率在60.94%～93.14%之間(表2)。

表2 廣東5個(gè)地區(qū)已接種PRRS疫苗免疫接種豬場(chǎng)的PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果Table 2 Antibody positive rate of pig farms vaccinated with P RRS vaccine in 5 rigions

從表2可以看出,進(jìn)行過(guò)PRRS疫苗免疫接種過(guò)的豬場(chǎng),血清抗體陽(yáng)性率處于較為理想的水平,只有四會(huì)地區(qū)的豬場(chǎng)血清抗體陽(yáng)性率低于75%(為60.94%),其他4個(gè)地區(qū)的豬場(chǎng)抗體水平都較高。

2.3 未免疫接種PRRSV疫苗豬場(chǎng)不同日齡豬感染情況調(diào)查

非免疫豬場(chǎng)319份不同日齡的豬血清抗體檢測(cè)結(jié)果表明,生產(chǎn)母豬的PRRSV抗體陽(yáng)性率高于仔豬,后備母豬的抗體陽(yáng)性率高于生產(chǎn)母豬。同時(shí)發(fā)現(xiàn)仔豬中,3～4周齡豬的PRRSV抗體陽(yáng)性率最低(45.59%),但隨年齡增長(zhǎng)逐漸升高。

生產(chǎn)母豬平均S/P值顯著高于仔豬(P＜0.01),后備母豬的平均S/P值略高于生產(chǎn)母豬,但差異不顯著。在仔豬中,3周齡～4周齡豬的抗體S/P值最低,隨著年齡增長(zhǎng)而逐漸升高,到16周齡的S/P值最高,隨后又降到和后備母豬差不多的水平(表3)。

2.4 免疫接種豬群不同日齡豬的抗體檢測(cè)情況調(diào)查

547份來(lái)自PRRS疫苗免疫豬場(chǎng)的血清抗體檢測(cè)結(jié)果表明,生產(chǎn)母豬的PRRSV抗體陽(yáng)性率高于仔豬,后備母豬的陽(yáng)性率高于生產(chǎn)母豬。同時(shí)發(fā)現(xiàn)仔豬中,3周齡～4周齡豬的PRRSV抗體陽(yáng)性率最低(72.34%),16周齡的陽(yáng)性率最高(91.18%)。抗體S/P值顯示,仔豬平均S/P值顯著高于生產(chǎn)母豬(P＜0.01),后備母豬平均S/P值略高于仔豬,但差異不顯著。同時(shí)發(fā)現(xiàn)仔豬中,3周齡～4周齡豬的PRRSV抗體S/P值最低,20周齡的S/P值最高(表4)。

表3 未接種PRRSV疫苗免疫豬場(chǎng)不同年齡豬感染情況Table 3 Antibody positive rate of different day-age pigs not vaccinated with PRRS vaccine

表4 PRRSV疫苗免疫接種豬場(chǎng)不同年齡豬感染情況Table 4 Antibody positive rate of different pigs vaccinated with PRRS vaccine

3 討論

本調(diào)查通過(guò)對(duì)866份來(lái)自PRRS疫苗免疫豬場(chǎng)和非免疫豬場(chǎng)的血清樣品進(jìn)行PRRSV特異性抗體檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)東莞、廣州、佛山、四會(huì)、鶴山地區(qū)的18個(gè)未免疫接種PRRS疫苗的豬場(chǎng)豬只存在較高水平的PRRSV感染率(57.14%～77.08%);而22個(gè)免疫接種過(guò)PRRS疫苗的豬場(chǎng)血清抗體陽(yáng)性率為60.94%～93.14%,血清抗體陽(yáng)性率平均值比未免疫豬場(chǎng)高,各豬場(chǎng)間卻存在顯著差異,且大多顯著高于未免疫豬場(chǎng)。這可能和各豬場(chǎng)的綜合防疫措施的差異有關(guān)。比較免疫和未免疫豬場(chǎng)相同日齡的豬只,更可以發(fā)現(xiàn)這個(gè)規(guī)律,免疫豬場(chǎng)血清抗體水平顯著高于未免疫豬場(chǎng)。提示在保育期間免疫豬群遭遇野毒感染將提高其抗體的S/P值。未免疫豬場(chǎng)的野毒感染率達(dá)100%,說(shuō)明PRRS野毒感染在廣東地區(qū)的普遍存在。從豬場(chǎng)不同日齡豬的調(diào)查結(jié)果來(lái)看,不同日齡的豬群血清陽(yáng)性率不一樣,3周齡～4周齡最低,然后隨年齡增長(zhǎng)逐漸增高,接著在下降到后備母豬相當(dāng)?shù)乃?。曾有?bào)道,仔豬4日齡就能檢測(cè)到母源抗體,并在3周齡后消失。在實(shí)驗(yàn)室感染條件下用ELISA方法檢測(cè)到IgG的開(kāi)始時(shí)間為接種后9 d～12 d。3周齡后ELISA抗體水平又逐漸升高可能與引進(jìn)后備母豬時(shí)把PRRSV帶到豬群或豬場(chǎng)中其他帶毒豬循環(huán)傳播有關(guān)。3周齡～4周齡豬不同亞群狀態(tài)是由不同亞群母豬造成,母豬感染PRRSV會(huì)直接影響到仔豬感染[8-10],因此,建議母豬群免疫。

PRRSV的高陽(yáng)性率和近年來(lái)養(yǎng)豬業(yè)的蓬勃發(fā)展密不可分[12]。省際間乃至國(guó)內(nèi)外豬只及相關(guān)產(chǎn)品交流日益頻繁,而相應(yīng)的管理、免疫措施卻不完善,由外地引進(jìn)或購(gòu)買豬只不隔離免疫直接混群,疫苗的選擇、免疫程序不合理,不嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出的管理模式,導(dǎo)致豬場(chǎng)暴發(fā)PRRSV的情況屢見(jiàn)不鮮[13]。尤其是廣東地區(qū)頗具數(shù)量的中小規(guī)模豬場(chǎng),由于技術(shù)管理及資金等原因,防治措施的不力,導(dǎo)致近年來(lái)廣東地區(qū)的PRRS成為制約本地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要疾病。只有通過(guò)豬群的綜合系統(tǒng)檢測(cè),防控技術(shù)或工程,以及逐步凈化或消滅一些重要的豬病才能有效地控制豬偽狂犬病,也就是說(shuō)要建立與國(guó)際接軌的中小規(guī)模豬健康養(yǎng)殖生物技術(shù)體系[14-15]。

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