貝 京，于光福

(1.江蘇省生產(chǎn)力促進中心，江蘇南京210042;2.南京逐陸醫(yī)藥科技有限公司，江蘇南京210061)

高效液相色譜法測定蒲公英提取物中咖啡酸含量

貝 京1，于光福2

(1.江蘇省生產(chǎn)力促進中心，江蘇南京210042;2.南京逐陸醫(yī)藥科技有限公司，江蘇南京210061)

建立了一種高效液相色譜法測定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。色譜柱為DiamonsilTM(鉆石)C18(4.6mm×150 mm，5 μm)，流動相為甲醇－磷酸鹽緩沖液(1.56g磷酸二氫鈉/1 000 mL水，磷酸調(diào)節(jié)pH值3.8～4.0)(體積比為23∶77);檢測波長為323 nm，柱溫為40℃。研究結(jié)果表明：線性范圍為2.44～14.64 mg/L，回歸方程為y=41 742x+2 287.9相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 6，加標(biāo)平均回收率為97.5%。本方法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高、操作簡便等特點。

高效液相色譜法;蒲公英提取物;咖啡酸

蒲公英為菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.－Mazz.、堿地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag.或同屬數(shù)種植物的干燥全草。春至秋季花初開時采挖，除去雜質(zhì)，洗凈，曬干。產(chǎn)于山西、河北、江蘇、山東及東北各地。蒲公英中含咖啡酸、蒲公英甾醇(Taraxasterol)、蒲公英萜醇(Taraxerol)、蒲公英素(Taracation)、β－谷甾醇、豆甾醇、黃酮類、皂苷、揮發(fā)油、膽堿、菊糖和果膠等。其中咖啡酸具有廣譜抗菌作用，直接影響蒲公英作為藥材的療效。噴霧劑、口服液等制劑中咖啡酸的測定方法已有報道［1－2］，蒲公英藥材咖啡酸的測定僅中國藥典有所規(guī)定［3］，但提取、測定方法各不相同。我們參考文獻報道，結(jié)合工作實際情況，建立了一種高效液相色譜法測定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。本方法具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高、操作簡便等特點。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

儀器：LC－10AT型高效液相色譜儀、SPD－10A紫外檢測器、柱溫箱HT－230A(日本島津公司)，N2000工作站(浙江大學(xué))。

試劑：甲醇為色譜純(上海振興化工一廠);磷酸二氫鈉、磷酸、鹽酸、乙酸乙酯均為分析純、水為重蒸餾水、咖啡酸對照品(中國藥品生物制品檢定所供編號110885－200102)、蒲公英提取物(南京逐陸醫(yī)藥科技有限公司制備)。

1.2 色譜條件

色譜柱：DiamonsilTM(鉆石)C18(4.6mm×150 mm 5μm)，理論板數(shù)按咖啡酸峰計算應(yīng)不低于3 000，柱溫40℃;動相：以甲醇－磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.56g，加水使溶解成1 000 mL，再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值3.8～4.0，即得)(體積比為23∶77);流速：1 mL/min;檢測波長：323 nm。

1.3 實驗方法

對照品儲備液制備：精密稱取在110℃干燥至恒重的咖啡酸對照品12.2 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為咖啡酸對照品儲備液。

供試品溶液制備：

方法1：精密稱取蒲公英提取物0.1 g，加水4 mL，稀鹽酸2滴，搖勻，用乙酸乙酯提取3次，每次10 mL，合并乙酸乙酯溶液，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液備分析用。

方法2：精密稱取蒲公英提取物0.1 g，置25 mL量瓶中，加入5%甲酸的甲醇溶液并稀釋定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備分析用。

2 結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

取1.3節(jié)中咖啡酸對照品儲備液5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，按1.2節(jié)色譜條件進樣20 μL，結(jié)果本品理論板數(shù)按咖啡酸峰計算為1 568.267，其中HPLC圖見附圖1。

2.2 線性關(guān)系試驗

分別精密量取1.3節(jié)中咖啡酸對照品儲備液溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置于 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2節(jié)色譜條件分別進樣20 μL，記錄峰面積，檢測結(jié)果見表1。以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進行一元線性回歸，得回歸方程：y=41 742x+2 287.9，R2=0.999 6含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖2，結(jié)果表明：本品在2.44～14.64 mg/L范圍內(nèi)咖啡酸濃度與色譜峰面積線形關(guān)系良好。

圖1 咖啡酸系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜圖

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制結(jié)果(n=6)

圖2 咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 供試品溶液制備方法的選擇

分別精密吸取1.3節(jié)中方法1、方法2兩種方法制備的試供品溶液各20 μL，按1.2節(jié)色譜條件注入色譜系統(tǒng)分析，試驗結(jié)果見圖3和圖4。由圖3和圖4試驗結(jié)果表明，方法1制備的供試品溶液，咖啡酸主峰與其他峰具有較好的分離度(分離度>1.5)，方法2制備的供試品溶液，咖啡酸主峰與其他峰不僅分離度較差，而且雜質(zhì)峰較多，影響定量分析，故采用方法1乙酸乙酯提取法處理試供樣品，制備供試品溶液。

圖3 方法1供試品制備液色譜分離效果圖譜

圖4 方法2供試品制備液色譜分離效果圖譜

表2 咖啡酸含量測定進樣精密度試驗考察結(jié)果(n=6)

2.4 樣品進樣精密度試驗

取蒲公英提取物咖啡酸含量測定項下的供試品溶液，按1.2節(jié)色譜條件進樣20 μL，平行操作6次，考察其進樣精密度試驗，結(jié)果見表2。試驗結(jié)果表明，本品咖啡酸含量測定法進樣精密度試驗較好。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

按1.3節(jié)方法1制備蒲公英提取物試樣液和1.2 節(jié)色譜條件，分別于 0、2、4、6、8 h 進行測定，結(jié)果見表3。試驗結(jié)果表明，本品咖啡酸含量測定供試品溶液在放置8 h內(nèi)穩(wěn)定。

表3 溶液穩(wěn)定性試驗測定結(jié)果

2.6 回收率試驗

準(zhǔn)確稱取0.1 g已知咖啡酸含量的蒲公英提取物5份，分別加入咖啡酸對照品溶液(398 μmg/mL)1 mL，按1.3節(jié)方法1制備樣品試樣液和1.2節(jié)色譜條件，測定并計算計算咖啡酸平均回收率為97.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.4%，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，本測定方法準(zhǔn)確度良好。

表4 提取物中咖啡酸的加樣回收率試驗結(jié)果

2.7 重復(fù)性試驗

分別精密稱取0.1 g蒲公英提取物6份，按1.3節(jié)方法1制備試樣液和1.2節(jié)色譜條件，分別測定咖啡酸含量，考察其重復(fù)性，結(jié)果見表5。

表5 提取物中咖啡酸含量的重復(fù)性試驗結(jié)果

3 結(jié)論

本方法采用高效液相色譜法測定蒲公英提取物咖啡酸的含量，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高、操作簡便等特點，能有效的控制蒲公英提取物質(zhì)量。

［1］ 金 薇，王樹實，張曦弘，等.口腔炎噴霧劑中咖啡酸的含量測定［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2004，31(2)：159.

［2］ 魏云蘭，徐 杰.HPLC法測定炎靈口服液中咖啡酸的含量［J］.中醫(yī)藥信息，2004(2)：56－57.

［3］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：244 －245.

Determination of Coffeic acid in Extract of Herba Taraxaci by High Performance Liquid Chromatographic Method

Bei Jing1，Yu Guangfu2
(1.Productivity Centre of Jiangsu Province，Nanjing 210042，China;2.Nanjing Zhulu Pharmaceutical Technology Co.，Ltd，Nanjing 210042，China)

A high performance liquid chromatographic cethod has been developed for determination of coffeic acid in extract of herba taraxaci.The chromatographic conditions were as follows：DiamonsilTMC18(4.6mm ×150 mm，5 μm)with methol H3PO4(1.56g NaH2PO4/1 000 mL water，pH3.8 －4.0)buffer(23∶77，volume)as mobile phase and detector at 323 nm.The calibration curve showed good linearity(R2=0.999 6).And the averae recovery of the method was 97.5%.Sensitive，reproducible and accurate，this method is particularly suitable for determination of coffeic acid in extract of herba taraxaci.

high performance liquid chromatography;extract of herba taraxaci;coffeic acid

R284.1

A

1006－9690(2010)03－0054－03

10.3969/j.issn.1006－ 9690.2010.03.013

2009－10－15

貝京(1976－)，男，學(xué)士，工程師，從事精細化工、天然植物研究與色譜分析