楊素清，閆景東，周妍妍

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

銀屑病，中醫(yī)學(xué)將其歸屬于“干癬”、“白疕”、“松皮癬”等病證范疇，是一種常見的慢性復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病，本病發(fā)病率高，病程長(zhǎng)，易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響了患者的身心健康，是國(guó)內(nèi)外皮膚科領(lǐng)域重點(diǎn)研究和防治的疾病之一。迄今為止，銀屑病的確切病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。多認(rèn)為是多基因遺傳背景下T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫異常性疾病，其發(fā)病主要涉及遺傳、感染、免疫、神經(jīng)、內(nèi)分泌、環(huán)境等多方面的因素。目前，臨床中治療該病尚未有突破性進(jìn)展。中醫(yī)藥治療銀屑病強(qiáng)調(diào)整體觀念和辨證論治，用藥?kù)`活、治法豐富、療效肯定，且副作用小、不易復(fù)發(fā)，顯示出了明顯的優(yōu)勢(shì)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

健康昆明種小鼠50只，雄性，體重(18～22)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物與試劑

蜈蚣敗毒飲(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥局提供);復(fù)方青黛丸(陜西天寧制藥有限責(zé)任公司，批號(hào):060505);0.9%生理鹽水(哈爾濱三精艾富西藥業(yè)有限公司，批號(hào):20023690)。

1.3 主要儀器

普通切片機(jī)(YD－1508，中國(guó)金華市醫(yī)療儀器廠);光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS BX60，日本);病理圖像分析系統(tǒng)(cimas Med 6.0，麥克奧迪圖像技術(shù)有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 蜈蚣敗毒飲制備

蜈蚣敗毒飲由蜈蚣3條，烏蛇30g，紫草30g，鬼箭羽30g，土茯苓30g，甘草10g組成，加8倍量水浸泡4h，加熱煎煮1h，藥渣再加6倍水，煎煮1h，過濾，兩次濾液合并，最后濃縮成生藥濃度分別為0.59g·mL－1(低濃度)、1.17g·mL－1(中濃度)、2.34g·mL－1(高濃度)。

2.2 復(fù)方青黛丸懸濁液的制備

當(dāng)沒有勇氣接納不幸，沒有力量擁抱內(nèi)心深處的痛苦或恐懼，在封閉地承受支離的心靈面前，除了尊重與等待，可選擇的援助之一，是讓當(dāng)事人有機(jī)緣親臨一種彼此分享“教導(dǎo)自己認(rèn)識(shí)自我”體驗(yàn)的場(chǎng)中，意識(shí)到要重獲力量，必須復(fù)歸自身認(rèn)同與完整。而自身認(rèn)同與完整的真諦，是尊重直面生命經(jīng)歷的一切，有定力讓所有力量匯聚不分離。抽身靜觀自己的思想、情緒和身體，悅納悲喜寵辱，不以物喜，不以己悲，是重新匯聚力量獲得勇氣更新的密鑰。

復(fù)方青黛丸溶于生理鹽水中，配成藥物濃度為0.052g·mL－1的混懸液備用。

2.3 分組方法

將50只昆明種小鼠隨機(jī)分成五組，即蜈蚣敗毒飲低劑量組(簡(jiǎn)稱中低組)、蜈蚣敗毒飲中劑量組(簡(jiǎn)稱中中組)、蜈蚣敗毒飲高劑量組(簡(jiǎn)稱中高組)、復(fù)方青黛丸組(簡(jiǎn)稱陽(yáng)性對(duì)照組)和生理鹽水組。

2.4 給藥方法

中低組、中中組、中高組、陽(yáng)性對(duì)照組和生理鹽水組，分別給予低濃度蜈蚣敗毒飲［8.78g·(kg·d)－1］、中濃度蜈蚣敗毒飲［17.55g·(kg·d)－1］、高濃度蜈蚣敗毒飲［35.10g·(kg·d)－1］、復(fù)方青黛丸懸濁液［0.78g·(kg·d)－1］和生理鹽水［15mL·(kg·d)－1］灌胃 15d。

2.5 取材

連續(xù)給藥15d后，脫頸椎處死小鼠，摘眼球取血處死小鼠，并取距鼠尾根部約1.5cm處的背面皮膚，立即投入4%多聚甲醛溶液中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片。

2.6 HE染色和IL測(cè)定

HE染色流程如下:二甲苯脫蠟→梯度酒精脫二甲苯→水洗→蘇木素染色→鹽酸乙醇分化→氨水返藍(lán)→伊紅染色→梯度酒精脫水→二甲苯透明→光學(xué)樹膠封片→烘片。

IL－2的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本稀釋倍數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線所使用的濃度，每個(gè)樣本做雙復(fù)孔。除空白孔外，分別將標(biāo)本或不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(100mL/孔)加入相應(yīng)孔中，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37℃孵箱孵育90min，洗板5次。除空白孔外，加入生物素化抗體工作液(100mL/孔)，37℃孵箱孵育 60min，洗板 5次。加入酶結(jié)合物工作液(100mL/孔)，37℃孵箱孵育 30min，洗板 5次。加入顯色劑(100mL/孔)，避光37℃孵育10～15min，加入終止液，混勻后即刻測(cè)量OD450值。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 HE染色結(jié)果

在光學(xué)顯微鏡下觀察，凡鱗片表皮有連續(xù)成行的顆粒細(xì)胞者，稱為有顆粒層形成之鱗片，計(jì)數(shù)100個(gè)鱗片中有顆粒層形成的鱗片數(shù)。結(jié)果見圖1～5及表1。

表1 蜈蚣敗毒飲對(duì)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響(±s)

表1 蜈蚣敗毒飲對(duì)小鼠尾部鱗片表皮顆粒層形成的影響(±s)

注:與生理鹽水組比較，**P＜0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△P＜0.05;與陽(yáng)性對(duì)照組比較，△△P＜0.01。

組別 n 顆粒層鱗片數(shù)/100鱗片生理鹽水組10 9.10±2.13陽(yáng)性對(duì)照組 10 19.6±3.41**中低組 10 19.4±3.20**中中組 10 22.8±4.29**△中高組 10 27.4±3.17**△△

如圖所示，生理鹽水組顆粒層細(xì)胞少，有缺失。陽(yáng)性對(duì)照組與中藥各劑量組顆粒層細(xì)胞較多，比較完整。中中組、中高組表現(xiàn)更為明顯，能夠顯著促進(jìn)小鼠尾部鱗片中顆粒層的形成，出現(xiàn)數(shù)層顆粒細(xì)胞，細(xì)胞肥大，呈菱形，胞漿內(nèi)顆粒粗大、深染，細(xì)胞界限清楚，細(xì)胞核及核仁明顯，細(xì)胞體積增大。

圖1 生理鹽水組40×

圖2 陽(yáng)性對(duì)照組40×

圖3 中低組40×

圖4 中中組40×

圖5 中高組40×

3.2 對(duì)小鼠血清IL－2的影響 結(jié)果見表2。

表2 蜈蚣敗毒飲對(duì)小鼠血清IL－2的影響(±s)

表2 蜈蚣敗毒飲對(duì)小鼠血清IL－2的影響(±s)

注:與生理鹽水組相比，**P<0.01;與陽(yáng)性對(duì)照組相比，△P<0.05。

組別 n 血清IL－2(pg·mL－1)10 4.20±0.68陽(yáng)性對(duì)照組 10 2.94±0.44**中低組 10 2.95±0.61**中中組 10 2.62±0.40**中高組 10 2.45±0.47生理鹽水組**△

4 討論

銀屑病發(fā)病急，反復(fù)發(fā)作，不易根治，與中醫(yī)“毒、邪”致病特點(diǎn)相符。所謂“毒邪”，不僅是指從外感受的特殊致病因素，如有毒食物、藥物、化學(xué)制劑等所致的毒性反應(yīng)，也是人體受某種致病因素作用后在疾病過程中所形成的病理產(chǎn)物，如熱毒、濕毒、風(fēng)毒、火毒等。毒邪致病特點(diǎn)是發(fā)病急驟，發(fā)展迅速，易于傳變，病情重，病程久，頑固難愈。毒邪侵入人體，致氣血凝滯，經(jīng)脈不暢，毒邪久積不化又生瘀毒，瘀滯肌膚?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究亦表明，銀屑病患者常有全血粘度增高，真皮乳頭毛細(xì)血管擴(kuò)張，臨床可見薄膜現(xiàn)象和點(diǎn)狀出血，這些均符合中醫(yī)“血瘀”理論。筆者總結(jié)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為“毒”、“瘀”二邪是銀屑病發(fā)病的主要病理基礎(chǔ)?；谶@一理論，創(chuàng)制了解毒清熱、活血化瘀的蜈蚣敗毒飲并將其用于臨床銀屑病患者的治療，取得了很好的療效。方中蜈蚣為君藥，以毒攻毒，取其解毒、化瘀、祛風(fēng)之功，一藥而三用，且其善行之性入絡(luò)剔毒，直搗病所。紫草尤善清血分熱毒，本方取其涼血、活血、解毒之功;鬼箭羽破血、通經(jīng)、殺蟲，其寒能堅(jiān)陰清熱，又能入血，是常用的活血化瘀藥，具有破血、通經(jīng)、解毒之功;土茯苓解毒除濕，通利關(guān)節(jié)。上三藥?kù)顭岫尽龆?、濕毒，共為臣藥。烏梢蛇搜風(fēng)邪，通經(jīng)絡(luò)，蛇類善行，祛風(fēng)而能止癢，其性走竄，能搜風(fēng)邪，透關(guān)節(jié)，通經(jīng)絡(luò);配蜈蚣，剔除經(jīng)絡(luò)之風(fēng)，為佐藥。生甘草既調(diào)和諸藥，又保護(hù)胃氣，且兼解毒，為使藥?？v觀全方，共奏解毒祛瘀、搜風(fēng)通絡(luò)之功。本方特點(diǎn)為重用蟲類藥物，利用其毒性之偏，以毒攻毒，并取其善行之性入絡(luò)剔毒，直搗病所。

迄今為止，銀屑病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但是諸多因素導(dǎo)致的角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖或分化障礙是其發(fā)病的基礎(chǔ)。銀屑病表皮的主要病理生理特點(diǎn)包括增生過快和角化不全兩個(gè)方面，基底細(xì)胞增殖加快，表皮通過時(shí)間由正常的28～56d縮短為3～4d，使角質(zhì)形成細(xì)胞來(lái)不及成熟，故出現(xiàn)角化不全、顆粒層減少或消失的銀屑病典型病理特點(diǎn)［1］。小鼠尾部鱗狀上皮顆粒層細(xì)胞天然缺失，僅在毛囊處有少量的顆粒細(xì)胞，故可模擬銀屑病角化不全的病理特點(diǎn)。因此，鼠尾表皮模型屬天然模型，是目前公認(rèn)的實(shí)驗(yàn)性銀屑病病理模型之一［2］。此模型簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好，在銀屑病藥物研究中較為常用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蜈蚣敗毒飲可顯著促進(jìn)小鼠尾部鱗片中顆粒層細(xì)胞的形成，并隨劑量的增大而作用增強(qiáng)。且中、高濃度組的蜈蚣敗毒飲療效優(yōu)于復(fù)方青黛丸組。由此推斷，蜈蚣敗毒飲是治療銀屑病的有效復(fù)方中藥制劑，其作用機(jī)制可能與改善銀屑病表皮細(xì)胞角化不全有關(guān)。

IL－2可促進(jìn)B細(xì)胞分化，增加其分泌抗體的能力及促進(jìn)NK細(xì)胞活性，是免疫調(diào)節(jié)中最關(guān)鍵的細(xì)胞因子，作為T細(xì)胞活化所必需的第3種信號(hào)，IL－2與IL－2受體(IL－2R)的結(jié)合對(duì)于T細(xì)胞的活化與增殖起著至關(guān)重要的作用;另外IL－2還可誘導(dǎo)c－myc及IL－2R表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IFN－γ、TNF、CSF等細(xì)胞因子，引起細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的失衡。銀屑病患者皮損處的IL－2異常增高是銀屑病發(fā)病組織損傷的病理基礎(chǔ)，是導(dǎo)致疾病發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。目前已有學(xué)者提出，可通過阻止IL－2的產(chǎn)生或抑制其活性來(lái)特異性防止T細(xì)胞激活從而達(dá)到治療銀屑病的目的［3］。本研究采用ELISA方法測(cè)定各組小鼠血清IL－2水平，結(jié)果表明，各劑量蜈蚣敗毒飲均可降低小鼠血清IL－2的水平，與生理鹽水組比較，有顯著性差異(P<0.01);且中高組的效果優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組，有顯著性差異(P<0.05)。提示蜈蚣敗毒飲抗銀屑病的作用可能與降低血清IL－2水平有關(guān)，通過降低血清IL－2水平，從而改善免疫功能狀態(tài)而發(fā)揮治療作用。

［1］ 陳洪鐸.皮膚性病學(xué)［M］.第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1999:110－115.

［2］ 林熙然，黃敏.喜樹酊治療銀屑病的臨床觀察及實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華皮膚科雜志，1982，15(4):210.

［3］ Salim A，Emerson R.Targeting interleukin－2 as a treatment for psoriasis［J］.Curr Opin Investig Drugs，2001，2(11):1546 －1548.