梁穎，徐紹娜，徐放，李明珠，黃寅炎，吳勃巖

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

地黃為玄參科植物地黃(Radix Rehmanniae PreParata)的新鮮或干燥塊莖。熟地黃是生地的炮制品，是中醫(yī)常用的補肝腎、益精血之品，具有補血滋陰、益精填髓的功效，是優(yōu)良的滋陰補血藥，被譽為“壯水之主，補血之君”，廣泛用于陰虛、血虛所致的各種疾病。多糖是地黃中有效成分之一，有資料表明，熟地黃多糖具有抗氧化，抗衰老［1］，增強機體免疫功能等作用［2，3］。但關(guān)于熟地黃多糖在抗突變方面的文獻的報道還很少。本實驗通過三種常用的抗突變試驗，研究熟地黃多糖的抗突變作用，為其進一步研究提供依據(jù)。

1 材料方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評價中心提供。

1.2 藥品與試劑 熟地黃(購于同仁堂);熟地黃多糖(由本實驗室提取并鑒定);環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥有限公司);秋水仙素(上海國藥集團化學(xué)試劑有限公司);5－BrdU(南京探求生物技術(shù)有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗劑量 經(jīng)抑瘤試驗證明，熟地黃多糖給藥量為500mg·kg－1時為最佳劑量，效果最為顯著。以下試驗均采用此劑量。

1.3.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗 選取20～22g的昆明種小鼠30只，雌雄各半，隨機分成3組，每組10只。陰性對照組，灌胃給生理鹽水，10d。熟地多糖組，按表1的劑量灌胃給藥10d。陽性對照組，第1～8d口服生理鹽水，第9、10d腹腔注射環(huán)磷酰胺(40mg·kg－1)。第10d給環(huán)磷酰胺6h后，處死小鼠。取股骨骨髓細胞，常規(guī)制片，Giemsa染色，油鏡下觀察。每只小鼠統(tǒng)計1000個嗜多染紅細胞，并記錄出微核細胞數(shù)。采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，計算抑制率:

抑制率=［(陽性組出現(xiàn)數(shù)－實驗組出現(xiàn)數(shù))/陽性組出現(xiàn)數(shù)］×100

1.3.3 小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗 選取20～22g的昆明種小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥情況同微核試驗。第10d陽性對照組注射完環(huán)磷酰胺后2h，將所有小鼠全部腹腔注射秋水仙素(4mg·kg－1)，4h后處死小鼠。取小鼠股骨骨髓細胞，37℃ KCl溶液中低滲處理30min。甲醇冰醋酸固定2次，制片，Giemsa染色，油鏡下觀察。每只動物計數(shù)100個細胞分裂相，并記錄出染色體畸變的細胞數(shù)，采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，計算抑制率。

1.3.4 小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換試驗 選取20～22g昆明種小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥情況同微核試驗。所有小鼠在處死前24h，分12次腹腔注射5－BrdU，1mg·g－1。處死前4h腹腔注射秋水仙素。處死后取股骨骨髓細胞，低滲處理和固定過程同染色體畸變實驗。制片后將裝片于37℃恒溫箱內(nèi)放置3d，將分化好的裝片置于30W的紫外燈下照射30min，自然晾干，Giemsa染色，油鏡下觀察。每只動物計數(shù)30個細胞分裂相，并記錄出現(xiàn)交換的染色體數(shù)。采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗分析，計算抑制率。

2 結(jié)果

2.1 熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)微核的影響

熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠骨髓細胞PCE微核率具有抑制作用。與陽性對照組比較，差異顯著(P<0.01)，抑制率為37.87%。與陰性對照組比較，差異顯著(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果見表1。該實驗結(jié)果表明，熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠微核率有顯著的抑制作用。

2.2 熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠骨髓細胞染色體畸變的影響

熟地黃多糖組與陽性對照組比較差異顯著(P<0.01)，抑制率為21.46%，與陰性對照組比較差異顯著(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。表明熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的染色體畸變有良好的抑制作用。結(jié)果見表2。

2.3 熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)骨髓細胞姐妹染色單體交換率的影響

熟地黃多糖組與陽性對照組比較存在差異(P<0.05)，抑制率為25.61%，與陰性對照組比較差異顯著(P<0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義，結(jié)果見表3。表明熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的骨髓細胞姐妹染色單體交換率有一定的抑制作用。

表1 熟地黃多糖對CP誘導(dǎo)小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的影響(±s)

表1 熟地黃多糖對CP誘導(dǎo)小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的影響(±s)

注:與陽性對照組比較，**P<0.01;與陰性對照組比較，##P<0.01。

組別 熟地黃多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 動物數(shù)(只) PCE(個) 微核率(‰) 抑制率(%)陰性對照組10 1000 2.20±0.25 －陽性對照組 － 40 10 1000 63.9±5.74 －熟地黃多糖組 500 40 10 1000 39.7±6.74**##－－37.87

表2 熟地黃多糖對CP誘導(dǎo)小鼠骨髓細胞染色體畸變的影響(±s)

表2 熟地黃多糖對CP誘導(dǎo)小鼠骨髓細胞染色體畸變的影響(±s)

注:與陽性對照組比較，**P<0.01;與陰性對照組比較，##P<0.01。

組別 熟地黃多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 動物只數(shù)(只) 骨髓細胞(個) 染色體畸變率(%) 抑制率(%)陰性對照組10 100 12.00±1.92 －陽性對照組 － 40 10 100 54.33±4.32 －熟地黃多糖組 500 40 10 100 42.67±3.93**##－－21.46

表3 熟地黃多糖對CP誘導(dǎo)小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換的影響(±s)

表3 熟地黃多糖對CP誘導(dǎo)小鼠骨髓細胞姐妹染色單體交換的影響(±s)

注:與陽性對照組比較，*P<0.05;與陰性對照組比較，##P<0.01。

組別 熟地黃多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 動物只數(shù)(只) 細胞數(shù)(個) 姐妹染色單體交換率(%) 抑制率(%)陰性對照組10 30 3.50±1.87 －陽性對照組 － 40 10 30 10.25±1.67 －熟地黃多糖組 500 40 10 30 7.62±1.68*##－－25.61

3 討論

熟地黃是中醫(yī)臨床常用藥，為補陰補血佳品。在熟地黃中，多糖的含量為3.33%［4］。除多糖外，還有梓醇、苷類、5－羥甲基糠醛等成分。有資料表明，熟地黃多糖具有抗氧化、抗衰老的作用，能夠增強機體的免疫力，低分子量的地黃多糖還具有抑瘤作用［5］。

本試驗證明，熟地黃多糖對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的微核率有良好的抑制作用，可以有效地避免微核的發(fā)生，減少染色體的損傷。同時熟地黃多糖還對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的骨髓細胞染色體畸變率和姐妹染色單體交換率有明顯的抑制作用。因此，我們可以推測熟地黃多糖可以通過抵抗誘變劑對染色體造成的損傷，來達到對機體遺傳物質(zhì)的保護作用，避免突變的發(fā)生，最終起到抗腫瘤作用。同時也表明，熟地黃多糖對遺傳物質(zhì)無損害作用。熟地黃多糖抗突變的作用機制還有待于進一步深入研究。

［1］ 陳丁丁，戴培德，張濤.地黃煎劑消退L－甲狀腺素誘發(fā)的大鼠心肌肥厚并抑制其升高的心、腦線粒體 Ca2+、Mg2+ATP酶活力［J］.中藥藥理與臨床，1997，13(4):27 －29.

［2］ 苗明三.懷地黃多糖對衰老模型小鼠免疫器官的影響［J］.河南中醫(yī)，1999，19(3):30.

［3］ 苗明三，方曉艷.懷地黃多糖免疫興奮作用的實驗研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，2002，9(3):159 －160.

［4］ 紀(jì)耀華，孫瑩.地黃炮制前后總多糖含量的比較［J］.中醫(yī)藥信息，1999，16(4):16 －17.

［5］ 魏小龍，茹祥斌.低分子量地黃多糖對P53基因表達的影響［J］.中國藥理學(xué)學(xué)報，1997，18(5):471 －474.