于英君，史海蛟，于水蘭

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

樹舌(Ganoderm，applan，tum(Per.ex Gray)Pat)，屬于膽子菌綱、多孔菌目、靈芝屬。樹舌多糖GF就是從中分離的一個(gè)多糖組分，它對小鼠HepA瘤有明顯抑制作用［1］。端粒酶為RNA的核糖核蛋白，有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，可合成端粒重復(fù)序列以維持端粒長度從而使細(xì)胞獲得異常增殖能力。端粒酶與細(xì)胞調(diào)控及惡性腫瘤形成密切相關(guān)，而端粒酶的調(diào)控及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系已成為人類腫瘤研究的新熱點(diǎn)［2］。本文通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)用小鼠端粒酶ELISA試劑盒檢測樹舌多糖GF對小鼠肝癌H22細(xì)胞端粒酶的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小白鼠36只，體重(20±2)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 瘤株 由黑龍江腫瘤研究所引進(jìn)，腹水傳代。

1.1.3 主要藥物及試劑 樹舌多糖GF注射液(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)生物化學(xué)教研室制備);注射用環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號:08060321);小鼠端粒酶ELISA試劑盒(美國CHEM ICON公司生產(chǎn)，上海郎卡生物有限公司進(jìn)口分裝)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 建立荷瘤鼠模型及分組 取荷瘤H22腹水調(diào)整瘤細(xì)胞數(shù)至2.0×106個(gè)·mL－1。0.2%臺盼藍(lán)染色，計(jì)活細(xì)胞數(shù)大于95%。在小鼠右腋皮下注射0.2mL稀釋液，制成實(shí)體瘤模型。接種6h后，把小鼠隨機(jī)分為三組，每組12只，分別為陰性對照組、環(huán)磷酰胺組和樹舌多糖組，各組肌肉注射給藥每只0.1mL。樹舌多糖組按50mg·(kg·d)－1給藥，環(huán)磷酰胺組30mg·(kg·d)－1，陰性對照組小鼠給予生理鹽水，連續(xù)10d。

1.2.2 樹舌多糖GF抑瘤率的作用 荷瘤鼠于停藥次日取材，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率(%)=(對照組平均瘤重－給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重×100%。

1.2.3 端粒酶提取及測定 取每個(gè)新鮮的瘤組織共36個(gè)樣本各100mg，加入500μL生理鹽水，組織勻漿，5000r·min－1離心1min，取上清液。然后按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量資料以(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠抑瘤率的影響

結(jié)果見表1。

表1 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠抑瘤率的影響

從表1中可以看出，樹舌多糖GF組與陰性對照組比較，瘤重明顯降低，抑瘤率達(dá)到42.25%。表明樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠的腫瘤有顯著的抑制作用，差異有顯著性(P<0.05)。

2.2 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠端粒酶活性的影響結(jié)果見表2。

表2 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠端粒酶活性的影響(±s)

表2 樹舌多糖GF對肝癌H22小鼠端粒酶活性的影響(±s)

注:樹舌多糖GF組、環(huán)磷酰胺組與陰性對照組比較，P<0.05;樹舌多糖GF組與環(huán)磷酰胺組比較，P>0.05。

組別 n A450nm P陰性對照組12 0.13±0.04 0.05 12 0.22±0.07樹舌多糖GF組 12 0.16±0.06 0.05環(huán)磷酰胺組

從表2中可以看出，樹舌多糖GF和環(huán)磷酰胺均能降低端粒酶活性，且二者在降低端粒酶活性作用方面無顯著差異。

3 討論

端粒、端粒酶在人類腫瘤發(fā)生發(fā)展中起復(fù)雜作用。端粒的縮短限制細(xì)胞增殖并抑制癌變，但過分縮短又導(dǎo)致基因不穩(wěn)定，從而增加癌變幾率。因此，端粒及端粒酶在腫瘤的抑制和發(fā)展中均起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，人惡性腫瘤細(xì)胞中染色體的端粒和端粒酶的活性均不同于正常體細(xì)胞;在許多正常體細(xì)胞中檢測不到端粒酶活性，而幾乎所有的人類惡性腫瘤細(xì)胞中的端粒酶均呈現(xiàn)活性［3，4］。且端粒酶陽性率隨腫瘤的發(fā)展過程而增高，在惡性腫瘤中端粒酶活性較高。因此，端粒酶可做為腫瘤的特異治療靶點(diǎn)。本研究中，樹舌多糖GF對該腫瘤生長的抑制作用機(jī)制之一是通過降低荷瘤小鼠H22細(xì)胞端粒酶活性實(shí)現(xiàn)的。深入機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

［1］ 孫巧紅，劉正紅，劉麗波，等.樹舌多糖對HepA小鼠的抑瘤作用及血清LSA含量的影響［J］.中國中醫(yī)藥科技，1996，6(3):24.

［2］ 程鵬，彭志剛，楊杰，等.芒果甙對白血病K562細(xì)胞端粒酶活性和凋亡的影響［J］.中藥材，2007，30(3):6 －10.

［3］ Meyerson M，Counter CM，Eaton EN，et al.hEST2，the putative human telomerease catalytic subunit gene，Isupregulated in tumor cells and during immortalization［J］.Cell，1997(90):785.

［4］ Saleh S，Lam AK，Ho YH.Real－ time PCR quantification of human telomerase reverse transcriptase(hTERT)in colorectal cancer［J］.Pathology，2008，40(1):25－30.