但春，林之蔚，雷濘菲，嚴(yán)雪峰，郭程飛，莊賀

（成都理工大學(xué)材料與化學(xué)化工學(xué)院，四川成都610059）

四川南江金銀花中綠原酸含量的測定

但春，林之蔚，雷濘菲*，嚴(yán)雪峰，郭程飛，莊賀

（成都理工大學(xué)材料與化學(xué)化工學(xué)院，四川成都610059）

利用超聲波提取法提取四川南江金銀花、山東平邑金銀花及山東魯峰金銀花中綠原酸，并用高效液相色譜法進(jìn)行含量測定，同時測定南江越冬期金銀花莖和葉中綠原酸的含量。結(jié)果表明：南江金銀花花蕾中綠原酸含量比山東平邑和魯峰金銀花中的綠原酸高,達(dá)到6.2348%；南江金銀花在越冬期的葉中綠原酸含量也較高，達(dá)到4.5251%，非常具有開發(fā)應(yīng)用前景。

金銀花；綠原酸；高效液相色譜法

Abstract:Study on the chlorogenic acid content of flos lonicerae,which come from Nanjiang,Sichuan;Pingyi,Shandong and Lufeng,shandong,after extracted by the ultrasonic method.And the leaves and branch of Nanjiang flos lonicerae which were collected during winter were also measured.The content of chlorogenic acid was determined by HPLC.The results showed the chlorogenic acid content of 6.2348%from the flower of Nanjiang was fairly higher than Pingyi and Lufeng,and it was also high in leaves of Nanjiang flos lonicerae,which was 4.5251%.

Key words：Flos lonicerae;Chlorogenic acid;HPLC

金銀花作為常用大宗中藥材，藥用價值高，在國內(nèi)外久負(fù)盛名。其花葉根均可入藥，含30多種人體所需的元素，主要成分為多種綠原酸類化合物及木犀草苷。具有廣譜抗菌,抗病毒及抗真菌的作用，主要用于清熱解毒、涼散風(fēng)熱，用于痛腫療瘡，喉痹丹毒，熱血毒痢，風(fēng)熱感冒等疾病的治療，能降低血液中膽固醇含量，加強(qiáng)機(jī)體防御機(jī)能[1]。金銀花除具有較高的藥用價值外，其食用價值也很大。金銀花中除含有綠原酸和黃酮類化合物外，還含有豐富的氨基酸和可溶性糖，常見的忍冬酒、銀花茶、銀花可樂、銀花糖果和銀仙牙膏等有很好的清熱解暑和保健作用，頗受消費(fèi)者青睞。隨著國際市場的開放和種植的規(guī)范化，金銀花及其保健制品的需求量將大大增加，其市場潛力巨大[2-3]。

盡管金銀花市場空間很大，但目前（截至2010年）我國內(nèi)地金銀花仍然以原料花交易為主，產(chǎn)業(yè)化的開發(fā)還沒有形成規(guī)模。對金銀花的開發(fā)流程、生產(chǎn)加工還不盡人意，缺乏龍頭企業(yè)帶動。莖、葉及加工副產(chǎn)品在醫(yī)藥、保健品、日用品及保健飲料等方面還未充分利用，嚴(yán)重制約了金銀花的綜合利用，在金銀花的一個生長年中，4月～5月為花期，其余大量的生長期均是以枝蔓生長為主，每年被修剪的莖、葉是花產(chǎn)量的3倍以上，大量的莖和葉被浪費(fèi)掉，本文以四川南江等產(chǎn)地的金銀花為材料，測定其花中綠原酸含量，同時測定越冬期（冬至前后）的金銀花葉和莖中綠原酸含量，以期為金銀花的綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

四川南江金銀花的花、莖和葉、市售山東平邑金銀花及山東魯峰金銀花。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：AichromBond-AQ C18柱（4.6 mm×250 mm×5 μm）；流動相：甲醇-0.4%冰醋酸溶液；采用線性梯度洗脫程序：20%~30%甲醇（0 min~15 min），30%~70%甲醇（16 min~40 min）；流速：0.5 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：室溫；檢測波長：327 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱取對照品綠原酸5.000 mg，以80%的甲醇溶解，并定容至5 mL棕色容量瓶中，得1.000 mg/mL的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；儲存于冰箱（4℃）備用。

1.2.3 樣品溶液的制備

精確稱取金銀花細(xì)粉0.300 g，置50 mL具塞三角瓶中，加入40 mL 80%的乙醇，超聲（400 Hz）提取2次，每次30 min，收集合并濾液，45℃真空濃縮至浸膏。加入80%的甲醇適量，定容至50 mL的容量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜過濾，冰箱冷藏避光，備用。

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 線性關(guān)系的考察

精密吸取對照品溶液 1.5、3、6、9、12、15、18 μL，按“1.2.1”的色譜條件測定綠原酸的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=40.013 X-1.346（r=0.9999），在0.78 μg/mL~9.36 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.2 精密度的考察

取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，綠原酸的保留時間的RSD=0.766%,綠原酸的峰面積的RSD=1.174%，表明該儀器的精密度良好。

1.3.3 方法的穩(wěn)定性考察

取南江金銀花的花，按樣品溶液制備方法制樣，制得的樣品溶液在室溫下放置 0、3、6、9、12、15 h 后檢測。結(jié)果表明，綠原酸的保留時間的RSD=0.725%，峰面積的RSD=2.362%，表明該樣品的穩(wěn)定性良好。

1.3.4 方法的重現(xiàn)性考察

取南江金銀花的花5份，按樣品溶液制備方法制樣，結(jié)果表明，綠原酸的保留時間的RSD=0.336%，峰面積的RSD=1.120%，結(jié)果表明該方法的重現(xiàn)性良好。

1.3.5 加樣回收率試驗

準(zhǔn)確稱量5份南江金銀花的花，重量為0.3067、0.2974、0.2945、0.3094、0.3002 g，準(zhǔn)確加入一定量綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，按樣品溶液制備方法制樣，結(jié)果見表1。測定結(jié)果平均回收率為99.96%，RSD為4.00%。

表1 樣品中綠原酸回收率測定結(jié)果Table 1 Add-sample recoveries of methods

2 結(jié)果與討論

以不同品種金銀花為研究對象，按照不同部位分別制樣，按樣品溶液制備方法制樣，在“1.2.1”的色譜條件下測定，記錄其峰面積，計算綠原酸的含量，結(jié)果見圖1和表2。

表2 不同產(chǎn)地金銀花中綠原酸含量比較Table 2 contrast of Chlorogenic Acid concentration in Honeysuckle %

從圖1和表2看出，不同產(chǎn)地的金銀花樣品中綠原酸含量差別較大：南江金銀花的花蕾中綠原酸含量最高，達(dá)到6.2348%。分析原因其一可能與其生產(chǎn)地氣候、土壤相關(guān)，因為金銀花生長的氣候、土壤、管理、光照、采摘時間等因素的不同，決定了不同產(chǎn)地的金銀花中綠原酸含量的差別[4]，南江金銀花的花和葉中綠原酸含量均很高，這與南江的氣候地理條件密切相關(guān)，南江縣平均海拔1100 m,平均日氣溫16.3℃，立體氣候和小氣候明顯，光照充足，生態(tài)環(huán)境優(yōu)異，非常適合金銀花生長。其次綠原酸含量與其加工炮制工藝相關(guān)，本次所取的南江金銀花是通過酶法處理干燥而成，而市場上購買的山東金銀花是通過自然干燥加工而成，可能在干燥過程中綠原酸氧化酶分解了部分綠原酸所致。

金銀花不同器官部位的綠原酸含量差異較大。南江金銀花的花蕾中綠原酸含量最高，葉中綠原酸含量其次，莖中綠原酸含量很低，僅有0.3047%。冬至?xí)r期的南江金銀花葉中綠原酸含量很高，達(dá)到4.5251%，比山東平邑金銀花的花蕾中含量還高出25.6%。在金銀花的一個生長年中，僅被修剪的莖、葉是花產(chǎn)量的3倍以上，金銀花葉在市面上價格比花蕾低得多，大量的葉和莖均被廢棄，其資源利用率僅為20%。

作為藥食兼用的金銀花在生產(chǎn)中主要取自于金銀花的花，大量的葉作為廢棄物丟掉，尤其在越冬期的葉中綠原酸含量非常高。此外，研究表明金銀花葉中的黃酮類物質(zhì)含量是花的2.78倍，而黃酮類化合物同樣具有較強(qiáng)的抑菌、抗菌作用[5]。因此很有必要對金銀花莖、葉及加工副產(chǎn)品在醫(yī)藥、保健品、日用品及保健飲料等方面的應(yīng)用進(jìn)行深度開發(fā)、綜合利用，提高其附加值。

3 結(jié)論

四川南江金銀花與山東平邑金銀花及山東魯峰金銀花中綠原酸含量比較表明：南江金銀花中綠原酸含量比山東平邑和魯峰金銀花中的綠原酸高，為6.2348%；南江金銀花在越冬期的葉中綠原酸含量較高，達(dá)到4.5251%，莖中含量較低，僅0.3047%。

[1]國家藥典委員會.中國藥典，I部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：177

[2]閻巧娟，韓魯佳，江正強(qiáng).金銀花中綠原酸提取純化工藝的優(yōu)化[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2002，7(2):22-26

[3]羅磊，郭曉園.金銀花中綠原酸的研究進(jìn)展[J].工藝探討，2008(8)：60-63

[4]包衛(wèi)華.不同產(chǎn)地加工的金銀花中綠原酸含量的研究比較[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,18(7):1075-1076

[5]楊敏麗.不同品種的金銀花及金銀花的不同部位中綠原酸含量的比較研究[J].分析測試學(xué)報,2006,25(11):122-124

Study on the Content of Chlorogenic Acid from Honeysuckle（Flos lonicerae）

DAN Chun，LIN Zhi-wei，LEI Ning-fei*，YAN Xue-feng，GUO Cheng-fei,ZHUANG He
（College of Materials and Chemistry&Chemical Engineering,Chengdu University of Technology,Chengdu 6100059，Sichuan,China）

2010-03-29

四川省青年基金(07zQ026-039)

但春（1973—），女（漢），講師，博士，主要從事天然產(chǎn)物研究與開發(fā)工作。

*通信作者