徐志斌，吳施衛(wèi)，陳凱彪，李秀芹，高陽

(國家海洋局南海環(huán)境監(jiān)測中心，廣東 廣州 510300)

廣東省近岸海域貝類腹瀉性毒素含量與胃含物的分析

徐志斌，吳施衛(wèi)，陳凱彪，李秀芹，高陽

(國家海洋局南海環(huán)境監(jiān)測中心，廣東 廣州 510300)

通過對2005年4月至9月廣東近岸海域貝類81個(gè)樣品的腹瀉性貝毒素進(jìn)行小白鼠生物法檢測，結(jié)果表明：（1）DSP 毒素含量值≥0.05 MU /g的有34個(gè)樣品，其中翡翠貽貝和牡蠣所占的比例最大；同種貝類的腹瀉性貝毒素存在一定的季節(jié)差異，秋季含量最高。（2）對其中腹瀉性貝毒素含量值較高的8個(gè)樣品進(jìn)行胃含物海洋微藻種類的鑒定，結(jié)果是波紋巴非蛤、三棱骨螺和結(jié)蚶胃含物樣品中含有產(chǎn)腹瀉性貝毒的利瑪原甲藻（Prorocentrum lima）和原甲藻（Prorocentrum sp.）。

腹瀉性貝毒；胃含物；廣東近岸；產(chǎn)毒藻

Abstract:The diarrhetic shellfish poisoning（DSP）contents in 81 shellfishes of coastal water of Guangdong during April 2005 to September 2005 were tested with AOAC bioassay method.The results showed that: 1)There were 34 samples in which the DSP content was greater than or equal to 0.05 MU·g-1,and the proportion of Perna viridis and Oysters were higher than other species.The same kind of shellfishes accumulated different contents of DSP because of seasonal change,and the DSP contents of shellfishes were the highest in autumn; 2)Marine microalgae in the stomach contents of the top 8 samples with high values of DSP were identified,and the results showed that there are DSP toxic algae Prorocentrum lima and Prorocentrum sp.in three kinds of shellfish samples.

Keywords:diarrhetic shellfish poisoning; stomach contents; Guangdong Province; toxic algae

近年來，中國沿海近岸水體污染日益嚴(yán)重，有毒赤潮頻繁出現(xiàn)。海洋藻毒素不僅嚴(yán)重破壞海洋漁業(yè)資源和水產(chǎn)養(yǎng)殖，惡化海洋環(huán)境，而且還可以通過食物鏈的傳遞，危害人類健康，造成人體中毒甚至死亡。腹瀉性貝毒(Diarrhetic Shellfish Poisoning，DSP)是由有毒赤潮藻類鰭藻屬Dinophysis和原甲藻屬Prorocentrum中部分藻種產(chǎn)生的一類脂溶性天然化合物，主要成分為軟海綿酸(Okadaic Acid，OA)及其衍生物[1]。軟海綿酸是海洋毒素中腹瀉性貝毒的主要毒素，毒素系長鏈聚醚毒素，分子中有羥基和羧基基團(tuán)[2]。廣東近岸海域是赤潮和貝毒素中毒的多發(fā)地區(qū)，其中原甲藻屬的利瑪原甲藻(Prorocentruyn lima)和鰭藻屬的具尾鰭藻(Dinophysis caudate)是引發(fā)1997年秋至1998年春廣東沿海赤潮的肇事藻之一[3]；中國黃海、東海和南海均發(fā)現(xiàn)有具尾鰭藻[4]；林燕棠和邱德全對大鵬灣海域、廣東沿海麻痹性貝毒及海南三亞海區(qū)的腹瀉性貝毒有過報(bào)道[5,6]；2002年秋至2003年夏廣東主要的染毒海域有大鵬灣赤控區(qū)、大亞灣及北津港等地[7]。本文對廣東省近岸海域2005年DSP毒素的特征情況進(jìn)行初步研究，并同時(shí)對春、夏、秋三個(gè)季節(jié) DSP毒素較高的部分有代表性的貝類胃含物海洋藻類進(jìn)行鑒定，以期望對DSP毒素與有毒海洋藻類的相關(guān)性進(jìn)行初步探討。

1 材料和方法

1.1 貝類樣品采集和預(yù)處理

于2005年4月至9月間，在廣東省近岸海域的16個(gè)采樣點(diǎn)進(jìn)行了貝類樣品采集，共采集了30個(gè)生物品種81個(gè)樣品，均為當(dāng)?shù)氐闹饕?jīng)濟(jì)貝類和主要養(yǎng)殖貝類。部分樣品在當(dāng)?shù)睾Ｓ颥F(xiàn)場采集，部分樣品購自當(dāng)?shù)厥袌霾⑼瑫r(shí)了解其產(chǎn)地信息。樣品采集后，立即進(jìn)行預(yù)處理：用干凈的海水洗去貝類外殼的附著物；用解剖刀將貝類的軟組織與貝殼分離，并用自來水沖洗掉附著在貝類的軟組織上的殼屑；編號后置入保鮮食品袋內(nèi)，冰凍保存轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，貯存于-26℃低溫冰箱待測。2005年貝類樣品的采集地點(diǎn)見圖1。

圖1 廣東近岸海域貝類樣品采樣站位Fig.1 Sampling sites for shellfish DSP detection in the coast of Guangdong Province

1.2 DSP 檢測方法

DSP毒素的檢測，采用中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(1992)“腹瀉性貝毒(DSP)的小白鼠生物檢測方法”[8]。用丙酮提取貝類組織中毒素，再轉(zhuǎn)移至乙醚中，經(jīng)減壓濃縮蒸干后，以 1%吐溫 60生理鹽水溶解殘留物（貝類樣品組織勻漿后進(jìn)行 5min控水；并在毒素提取液轉(zhuǎn)移至乙醚步驟時(shí)，進(jìn)行兩次水洗過程，以除去麻痹性貝毒素對DSP毒素檢測的影響）。選擇體重16～20 g的昆明系健康雄性小白鼠，每個(gè)測試樣品使用3只小白鼠。采用腹腔注射方法，由受試小白鼠的存活情況和提取液的稀釋情況，按一定關(guān)系式計(jì)算毒性量。毒性量以鼠單位表示。

國際上常用鼠單位（MU）表示貝類所含的DSP毒性。1個(gè)鼠單位（MU）的定義是使體重16～20 g的小白鼠在24h內(nèi)死亡的毒素量。本文用MU/g，表示每g殼內(nèi)全部軟組織的DSP毒性量。我國目前暫定的腹瀉性毒素警戒標(biāo)準(zhǔn)[8]是使用鼠生物測定法時(shí)，24 h內(nèi)三只小鼠死亡2只以上，即0.05 MU/g。

所有實(shí)驗(yàn)用昆明系小白鼠均購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（許可證號：SCXK（粵）2003-0001），SPF級。

1.3 貝類胃含物海洋藻類分析

從4月到9月的樣品中挑選含DSP毒性較高的貝類8個(gè)：①深圳后?！浯滟O貝—秋季（毒性值：0.40 MU/g）②大亞灣（澳頭）—波紋巴非蛤—秋季（毒性值：0.20 MU/g）③饒平海域—結(jié)蚶—秋季（毒性值：0.80 MU/g）④大亞灣（澳頭）—三棱骨螺—夏季（毒性值：0.80 MU/g）⑤ 大鵬灣（鹽田）—翡翠貽貝—秋季（毒性值：0.40 MU/g）⑥雷州灣（雷州）—大珠母貝—夏季（毒性值：0.20 MU/g）⑦安鋪港（安鋪）—南海鴨嘴蛤—夏季（毒性值：0.20 MU/g）⑧饒平沿?！O蟶—秋季（毒性值：0.40 MU/g），采用鏡檢法對貝類胃含物和消化道進(jìn)行分析，鑒定所含藻類。

2 結(jié) 果

2.1 廣東近岸海域2005年DSP毒性檢測結(jié)果

廣東近岸海域2005年貝類DSP檢測結(jié)果列于表1。在檢測的81個(gè)樣品中，“檢不出”的有20個(gè)，占樣品總數(shù)的24.7%；“有毒性反應(yīng)，檢不出”的有 12個(gè)，占樣品總數(shù)的 14.8%；超標(biāo)值大于“0.05”的有49個(gè)，占樣品總數(shù)的60.5%。從季節(jié)上看，春季，樣品檢測值介于“檢不出”～“0.10”間，占樣品總數(shù)的47.4%，其中超標(biāo)值有17個(gè)，占樣品總數(shù)的21.0%；夏季，樣品檢測值介于“檢不出”～“0.80”間，占樣品總數(shù)的16.0%，其中超標(biāo)值有9個(gè)，占樣品總數(shù)的11.1%；秋季，樣品檢測值介于“檢不出”～“0.80”間，占樣品總數(shù)的36.1%，其中超標(biāo)值有23個(gè)，占樣品總數(shù)的28.4%。

在檢測的 30個(gè)生物品種中，超標(biāo)的貝類樣品有20個(gè)品種，主要種類為：近江牡蠣（Crassostrea rivularis）、翡翠貽貝（Perna viridis）、波紋巴非蛤（Paphia (Paratapes)undulata）、菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）和結(jié)蚶（Tegillarca nodifera）等，其中近江牡蠣、翡翠貽貝和結(jié)蚶在秋季的超標(biāo)最嚴(yán)重，達(dá)到0.80 MU/g；未超標(biāo)的有10個(gè)品種，包括：梳紋加夫蛤（Gafrarium pectinatum）、海豆芽（Lingula anatine）、圓頂珠蚌（Unio douglasiae）、異毛蚶（Scapharca anomala）、文蛤（Meretrix meretrix）、對生蒴蛤（Asaphis dichotome）、雜色蛤仔（Ruditapes variegata）、泥蚶（Tegillarca granosa）、河蜆（Corbicula hitens）和凸殼肌蛤（Musculista senhausia）。

表1 廣東近岸海域貝類樣品中DSP毒性Tab.1 DSP toxicity in shellfish from the Guangdong inshore area

2.2 貝類胃含物藻類鑒定結(jié)果

在貝類毒素DSP生物法檢測基礎(chǔ)上，選取DSP毒素含量值較高的8個(gè)貝類（波紋巴非蛤、三棱骨螺、大珠母貝、南海鴨嘴蛤、縊蟶、結(jié)蚶和翡翠貽貝）進(jìn)行其胃含物及消化道中的海洋藻類鑒定，鑒定結(jié)果列于表2。從表2可知：8個(gè)貝類樣品體內(nèi)含有34種不同的海洋藻類，其中硅藻有29種，占所有物種的 85.3%，甲藻有 3種，占所有物種的8.8%，其它藻類2種，占所有物種的5.9%。硅藻是胃含物微藻絕對的優(yōu)勢種，有中肋骨條藻(Skeletonema costatum)、菱形海線藻(Thalassionema nitzschioides）、中心圓篩藻(Coscinodiscus centralis)、輻射圓篩藻(Coscinodiscus radiatus)、優(yōu)美擬菱形藻(Pseudo-nitzschia delicatissma)、垂緣角毛藻(Chaetoceros laciniosus)和斯氏根管藻(Rhizosolenia stotterfothii)等，其中中肋骨條藻出現(xiàn)頻率最高含量最大。

表2 貝類胃含物及消化道中的浮游植物Tab.2 Phytoplankton in stomach-intestine of seashell

3 結(jié)語與討論

3.1 腹瀉性貝毒素季節(jié)性變化分析

從表1可見，相同海域的同種貝類體內(nèi)DSP含量有一定的季節(jié)差異。以饒平沿海為例，詳見圖2，近江牡蠣和波紋巴非蛤的DSP毒性秋季最高，夏季和春季相近且較低，兩種貝類中近江牡蠣的季節(jié)差異比波紋巴非蛤大；貝類的貝毒素含量最高值出現(xiàn)在秋季，這與江天久等的研究結(jié)果[9]和Chan[10]報(bào)道的基本一致。

貝類主要濾食海水中的浮游生物和有機(jī)碎屑，濾水率是影響貝類攝食的重要因素之一。楊曉新[11]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：光照對貝類的濾水率沒有顯著影響；溫度對貝類的濾水率有顯著影響，在 16～31℃溫度范圍內(nèi),各鹽度下的濾水率均有隨水溫的升高而增大的趨勢；鹽度對濾水率的作用也很明顯,在16～32的鹽度范圍內(nèi)，各溫度下的濾水率均隨鹽度的升高而增大。廣東沿海四季的水溫、鹽度平均值為：春季，22.97℃，30.90；夏季，29.06℃，31.08；秋季，27.11℃，32.88；冬季，18.50℃，31.95[12]。由此可見，溫度和鹽度等主要原因極有可能引起海洋微藻的變化，從而引起貝類攝食，進(jìn)一步引起體內(nèi)毒素的含量變化。

圖2 饒平沿海近江牡蠣、波紋巴非蛤DSP的季節(jié)差異Fig.2 Seasonal variation of DSP in Crassostrea rivularis,Paphia(Paratapes)undulata in Raoping

3.2 胃含物及消化道中海洋藻類分析

在所測的8種貝類胃含物中，有3種貝類鑒定出可產(chǎn)生腹瀉性毒素的藻類：(1)紅海灣海域—波紋巴非蛤—春季 Prorocentrum lima(利瑪原甲藻)、Prorocentrum sp.(原甲藻)； (2)大亞灣（澳頭）—三棱骨螺—夏季 (原甲藻)；(3)饒平海域—結(jié)蚶—秋季(原甲藻)；其他 5個(gè)貝類樣品毒性值介于0.20～0.40 MU/g之間，胃含物中并沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)的產(chǎn)毒藻，這一結(jié)果與林燕棠等[6]的研究結(jié)果較一致；這一鑒定結(jié)果就貝類而言，其軟組織的毒素含量與貝類對有毒藻的攝食行為、貝類對毒藻的吸收和代謝能力有關(guān)，不同的貝類對攝食有毒藻后所產(chǎn)生的生理反應(yīng)差別很大，有的種類部分個(gè)體會積累有毒藻中毒死亡，有的種類會不同程度地關(guān)閉貝殼膜瓣，收縮水管，降低攝食率，而有的種類則未發(fā)生異常反應(yīng)，因此導(dǎo)致貝類體內(nèi)所含毒素不同。

李淑冰等[13]曾報(bào)道，腹瀉性毒素主要來源于外源性毒素－海洋藻類，能形成赤潮的微藻約有184～267種，其中有毒微藻約為60～78種[14]。能夠產(chǎn)生腹瀉性毒素的藻類很多，有 Dinophysis acuminata,D.caudata,D.acuta,D.fortii,D.mitra,D.norvegica,D.sacculus,D.tropos及Prorocentrum lima,P.concavum Fukuyo,P.hoffmannianum,P.maculosum,P.faustiae等[15,16]，這些有毒藻大部分為浮游性藻類，其營養(yǎng)細(xì)胞在適宜的水體中生長增殖，當(dāng)條件不宜時(shí)營養(yǎng)細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為孢囊沉積于沉積物中，在條件適宜時(shí)再次萌發(fā)為營養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行增殖。另外，齊雨藻等[17]已從大鵬灣底泥中鑒定出塔瑪亞歷山大藻（Alexandrium tamarensis）、多紋膝溝藻(Prorogonyaulax tamarensis)、短裸甲藻(Gymnodinium breves)等有毒藻類的孢囊。通過以上分析表明：本次調(diào)查貝類中存在的DSP，除來源于水體中的有毒藻類利瑪原甲藻和原甲藻外，有毒赤潮生物的營養(yǎng)細(xì)胞和沉積物中有毒藻類的孢囊也可能是本次調(diào)查貝類毒素的來源之一。

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Study of the relationship between DSP contents and stomach contents in shellfishes of coastal water of Guangdong Province

XU Zhi-bin,WU Shi-wei,CHEN Kai-biao,LI Xiu-qin,GAO Yang
(South China Sea Environmental Monitoring Center,SOA,Guangzhou 510300,China)

X55

A

1001-6932(2010)04-0444-06

2009-01-14；

2009-11-30

徐志斌（1975－），男，工程師，長期從事海洋生物生態(tài)研究工作。電子郵箱：zhibing_xu@163.com