權(quán)中會

（西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院西安寵物醫(yī)院，陜西西安 710065）

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的雞常見傳染病，既可以經(jīng)呼吸道、消化道等途徑水平傳播，也可經(jīng)卵垂直傳播，雞一般終生帶菌。該病引起大批雛雞死亡、生長緩慢及種雞產(chǎn)蛋量和種蛋的孵化率降低，給生產(chǎn)和育種工作帶來很大損失，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一[1]。陜西咸陽某雞場飼養(yǎng)的1萬余只肉雛雞群從5日齡開始不斷出現(xiàn)死亡病例，至10日齡時雞群死亡率達11%。病雛精神沉郁，呼吸困難，有的有白色下痢，多數(shù)未出現(xiàn)白痢而死亡。剖檢可見病雛肝脾腫大，肝表面有黃白色壞死灶，肺有灰白色增生灶，心肌見有灰白色增生結(jié)節(jié)，卵黃吸收不全。臨床診斷疑似雛雞白痢。為確診疾病，進行了病原分離，并應(yīng)用微生物自動分析系統(tǒng)對分離的細菌進行編碼鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、S.S瓊脂平板，按常規(guī)方法配制[2]。

1.1.2 微生物自動分析系統(tǒng) 包括細菌編碼分析儀、細菌生化鑒定卡以及與之配套的生化培養(yǎng)液，均為湖南長沙天地人公司出品。

1.1.3 實驗動物 3日齡雛雞10只。

1.2 方法

1.2.1 細菌分離純化及培養(yǎng)特性觀察 無菌采集病死雞肝、脾、腎、肺等組織，分別接種于營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、S.S瓊脂平板，置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后觀察，挑單個典型菌落進行純菌增殖。

1.2.2 細菌形態(tài)學(xué)鑒定 病料觸片、培養(yǎng)物涂片，自然干燥，火焰固定，革蘭氏染色鏡檢。

1.2.3 細菌生化鑒定 取培養(yǎng)16 h的待檢菌株純培養(yǎng)物置于生化專用培養(yǎng)液中，調(diào)整細菌濃度至0.5麥?zhǔn)蠁挝唬鳛樯囼灳?，用無菌加樣滴管取生化試驗菌液分別加入生化試驗卡孔中，每孔加試驗菌液150 μL。蓋上卡片蓋板，將卡片置35℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)16 h后，取出卡片，觀察結(jié)果。

1.2.4 結(jié)果判斷 將培養(yǎng)的試驗卡置于細菌編碼分析儀內(nèi)，儀器可根據(jù)各生化孔顏色變化情況自行判讀生化試驗結(jié)果為陽性（＋）或陰性（－），并計算和判斷出該組生化結(jié)果所對應(yīng)的細菌編碼和細菌名稱。

1.2.5 動物試驗 取3日齡雛雞10只。將分離到的單個菌落接種于營養(yǎng)肉湯中，置37℃溫箱中增菌培養(yǎng)6～8 h后，取2 mL菌液，用生理鹽水稀釋4倍，每只0.1 mL口服接種5只，另外5只分別口服接種0.1 mL生理鹽水，隔離飼養(yǎng)作為對照。

2 結(jié)果

2.1 細菌分離純化及培養(yǎng)特性 病料接種后，在普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中呈均勻混濁生長，管底有沉淀物。在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長出均一、無色、半透明、表面光滑、閃亮、隆起、邊緣整齊的針尖大小的菌落，生長較為瘠薄。在麥康凱瓊脂平板和S.S瓊脂平板上呈相似于營養(yǎng)瓊脂的形態(tài)，只是長得更茂盛。

2.2 形態(tài)學(xué)鑒定 細菌為革蘭氏陰性、兩端稍圓、中等大小的細長桿菌，單在，無芽孢和莢膜，不能運動。

2.3 生化特性

結(jié)果見表1。

2.4 菌種檢索 微生物分析儀自動讀取生化試驗結(jié)果，將細菌編碼為302501，并檢索出該菌為雞白痢沙門氏菌（Salmonella pullorum），鑒定值為0.89，相似度為1，為很好的鑒定結(jié)果。

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2.5 動物試驗 接種3 d后，試驗組雛雞拉典型的白色稀糞，表現(xiàn)聚群癥狀，4 d后死亡1只，5 d后死亡2只，第6天死亡1只，第7天停止死亡，雞體消瘦，精神頹廢，被毛松亂，發(fā)病癥狀與雞白痢典型癥狀一致。剖檢時病變與典型雞白痢病變一致。對照組雞群正常。取發(fā)病死亡雞肝臟病料制成抹片，革蘭氏染色、鏡檢，并將病料接種于麥康凱瓊脂上24 h后觀察結(jié)果。鏡檢結(jié)果為革蘭氏陰性短小桿菌，麥康凱培養(yǎng)基表面有光滑、邊緣整齊、透明的圓形小菌落，均與從原發(fā)病雞病料分離出的菌株一致?？梢耘袛鄰脑l(fā)病雞中分離出的細菌為雞白痢沙門氏菌。

3 討論

3.1 雛雞白痢以表現(xiàn)白色下痢為特征，排稀薄如漿糊狀糞便，出現(xiàn)“糊肛”現(xiàn)象，影響排糞。由于積極地采用藥物預(yù)防，近年來明顯的雛雞白痢不再時常發(fā)生，而不表現(xiàn)白色下痢特征的急性敗血型、肺型及腦型雞白痢在臨床上則較多見。而且在有些情況下，雛雞因其他原因也可表現(xiàn)白色排泄物增多，甚至出現(xiàn)“糊肛”現(xiàn)象，如高蛋白水平飼料、傳染性支氣管炎、傳染性法氏囊病、痛風(fēng)等，均可見白色排泄物增多，所以，雞白痢病的病名并不完全符合臨床實際情況，甚至可造成誤診，所以很有必要進行病原分離和鑒定。

3.2 微生物自動分析系統(tǒng)細菌鑒定具有高效、便捷和準(zhǔn)確等優(yōu)點。國內(nèi)第一套較完整的技術(shù)先進、性能可靠、操作方便的微生物專利新產(chǎn)品，配套供應(yīng)細菌分析儀、細菌生化鑒定和抗生素敏感性測定卡。它采用細菌鑒定新理論“雙歧—矩陣”法作為編碼分析的數(shù)學(xué)模型，克服了經(jīng)典值分析法（最大似然法）的不足，排除了不可能出現(xiàn)的編碼存在于鑒定編碼之中的情況。但是，未知菌必須經(jīng)過染色和預(yù)試驗，初步分科，才能確定試驗選用的試驗卡，如腸桿菌科試驗卡、微球菌科試驗卡、芽孢桿菌試驗卡、奈瑟菌/嗜血桿菌試驗卡、弧菌科試驗卡、非發(fā)酵菌試驗卡、棒狀桿菌試驗卡、彎曲桿菌試驗卡、厭氧菌試驗卡、真菌試驗卡。而美國Biolog全自動微生物分析鑒定儀利用微生物對不同碳源進行新陳代謝的利用率差異進行細菌鑒定，只需確定細菌革蘭氏染色陽性與陰性、或厭氧與否，從而選定革蘭氏陽性菌鑒定板、革蘭氏陰性菌鑒定板或厭氧菌鑒定板[3]。

[1]亢繼俊，寧官保，牛藝儒．麻雞白痢沙門氏菌的分離鑒定和中藥對其耐藥性的消除作用[J]．中國獸藥雜志，2007，41（11）:37-40.

[2]李健強，李六金.獸醫(yī)微生物學(xué)實驗指導(dǎo)[M].西安:陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1998:44-48.

[3]鐘映梅，張峻峰，劉洪雨，等.應(yīng)用微生物生化分析儀對仔豬水腫病病原的鑒定[J].中國獸醫(yī)雜志，2006，42（9）:23-24.