羅建福，李建利

（1.四川省三臺縣中醫(yī)醫(yī)院，四川三臺 600000；2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所，四川成都 610031）

HPLC測定潤肺止咳顆粒黃芩苷的研究

羅建福1，李建利2

（1.四川省三臺縣中醫(yī)醫(yī)院，四川三臺 600000；2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所，四川成都 610031）

目的：建立潤肺止咳顆粒的含量測定標(biāo)準(zhǔn)，更有效地控制該產(chǎn)品質(zhì)量。方法：含量采用高效液相色譜（HPLC）測定制劑中的黃芩苷。高效液相色譜條件：KromasilODS-1C18，流動相：甲醇－0.32%磷酸（46.9∶53.1）。結(jié)果：HPLC準(zhǔn)確、可靠，回收率為95%～105%，RSD為1.85%。結(jié)論：該標(biāo)準(zhǔn)可用于潤肺止咳顆粒含量質(zhì)量控制。

潤肺止咳顆粒；黃芩；黃芩苷；高效液相色譜

潤肺止咳顆粒系四川省科學(xué)技術(shù)廳科研課題，由黃芩等藥材制成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、化痰止咳的功效。其是治療咳嗽、發(fā)熱、吐黃痰或膿痰，咽喉癢痛有效創(chuàng)新藥物。本文建立了黃芩苷的含量測定項(xiàng)目。

1 儀器與試劑

儀器：SHIMADZU高效液相色譜儀（LC-10ATVP雙泵溶劑輸送系統(tǒng)，SPD-M10AVP檢測器；CTO-10ASVP柱溫箱)；KQ-400DB型數(shù)控超聲清洗波器（工作頻率：40 kHz，功率：400 W；昆山市超聲儀器有限公司）；FA1104型電子天平（感量：0.01 mg，上海精科)；SZ-93型自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）。對照品：黃芩苷（含量測定用；批號715-200111）；由中國藥品生物制品檢定所提供。

試劑：甲醇、磷酸為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。藥品：潤肺止咳顆粒，四川省第二中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)條件

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為：甲醇-0.32%磷酸（46.9∶53.1），流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃；檢測波長為280 nm；理論塔板數(shù)按黃芩苷峰面積計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 測定方法

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1毫升含59 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品約0.1 g，精密稱定，置50 ml容量瓶中，加入70%乙醇約48 ml，超聲處理60 min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液過微孔濾膜，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液的制備 精密稱取按處方制成的缺黃芩的樣品3 g，照供試品溶液的制備方法制備。

2.3 測定波長的選擇

黃芩苷的測定波長為280 nm。

2.4 空白試驗(yàn)

按上述色譜條件，吸取供試品溶液、對照品溶液、陰性溶液各10 μl，分別注入色譜儀中。供試品色譜中，在與對照品色譜圖相應(yīng)位置上，有一相同的色譜峰，陰性溶液在此保留時間無干擾。

2.5 測定方法

分別精密吸取對照品溶液4、10 μl和供試品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系 精密稱取黃芩苷對照品5.9 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，得每毫升含0.059 mg的溶液。精密吸取上述溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μl注入液相色譜儀測定，結(jié)果見表1。

表1黃芩苷對照品線性關(guān)系考察測定結(jié)果

以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)（圖 1），并進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=3287760X-42.156 15，r=0.999 9。

由于標(biāo)準(zhǔn)曲線未過原點(diǎn)，因此每次測定時，均隨行測定2個不同進(jìn)樣量的黃芩苷對照品，記錄峰面積并算出標(biāo)準(zhǔn)曲線，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的含量。

圖1 實(shí)驗(yàn)圖

2.6.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取線性考察項(xiàng)下對照品溶液5 μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得黃芩苷峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)<3%，說明精密度良好。

2.6.3 重復(fù)性試驗(yàn) 按擬定的含量測定方法，對同一批樣品，同時制備五份樣品供試品溶液，分別精密進(jìn)樣10 μl，計(jì)算黃芩苷含量，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果RSD<2.296%，說明提取和檢測方法重現(xiàn)性好，故可行。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對照品溶液 5 μl,分別于 0、1、2、3、4、7、10 h進(jìn)樣10 μl，測得對照品峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.148%，試驗(yàn)表明，對照品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量(1.874%)的樣品0.2 g，精密稱定，分別加入對照品適量，按前述成品供試品溶液的制備方法及色譜條件進(jìn)行測定，按以下公式計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

以下列公式計(jì)算回收率。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

以上試驗(yàn)結(jié)果表明：本法回收率良好。

2.7 樣品測定

取不同批號的樣品，按前述擬定的含量測定方法進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品中黃芩苷含量測定結(jié)果（n=2）

根據(jù)以上測定結(jié)果，考慮到藥材的來源、產(chǎn)地等級、炮制加工、制劑生產(chǎn)及貯藏等因素，考慮以樣品黃芩苷平均含量的80%計(jì)算，本標(biāo)準(zhǔn)暫定本品每袋含黃芩以黃芩苷計(jì)，不得少于90 mg。

3 討論

采用HPLC對潤肺止咳顆粒黃芩苷進(jìn)行測定。結(jié)果方法可靠，操作簡便，專屬性強(qiáng)，可以作為潤肺止咳顆粒含量控制的有效方法。

原實(shí)驗(yàn)選擇中國藥典2005年版一部黃芩項(xiàng)下HPLC測定黃芩苷色譜條件，流動相為甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）干擾較大，后改為甲醇-0.32%磷酸（46.9∶53.1），分離效果良好。

根據(jù)HPLC對潤肺止咳顆粒黃芩苷測定結(jié)果計(jì)算，黃芩苷轉(zhuǎn)移率達(dá)70%以上，從而證明了工藝穩(wěn)定與合理。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版[M].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[2]彭華,周自新.黃連及其制劑中小檗堿的含量測定[J].中成藥研究,1984,6(12):13.

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[4]王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2000.

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[6]王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2000.

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Research by determine baicalin of HPLC for Runfei zhike granules

LUO Jianfu1,LI Jianli2
(1.Tradtional Chinese Medical Hospital of Santai County,Sichuan Province,Santai600000,China;2.Institute of Tradtional Chinese Medical Sichuan Province Academy of Chinese Medcial Sciences,Chengdu 610031,China)

Objective:To set up content standard of Runfei zhike granules.Methods:To determine baicalin of Runfei zhike granules by high performance liquid chromatography(HPLC).The determiation was done with a KromasilODS-1C18,mobile phase:methanol-0.32%phosphonic acid(46.9∶53.1)..ResultsThe present method was reliable and accurate,the recovery rates were 95%～105%,RSD were 1.85%.Conclusion:The standard may use to control content of Runfei zhike granules.

Runfei zhike granules;Scutellaria baicalensis;Baicalin;HPLC

R943.1

B

1674-4721（2010）12（a）-054-02

2010-06-22）