張 穩(wěn) ，唐 瑩 ，譚勝真 ，雍蘇南 ，何澤云 ，譚元生 *

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.南華大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 衡陽(yáng) 421001）

高血壓病是當(dāng)前最常見(jiàn)的心血管疾病之一，其具有“三高三低”的特點(diǎn)。目前已認(rèn)識(shí)到降壓治療不能消除與高血壓病相關(guān)的心血管疾病危險(xiǎn)，在血壓被控制后，這些危險(xiǎn)因子依然存在[1]。高血壓病引起的左心室肥厚（LVH）已被公認(rèn)是與死亡率密切相關(guān)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，也是發(fā)生各種心血管病并發(fā)癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。本研究通過(guò)觀察SHR血壓及心臟改變來(lái)進(jìn)一步探討復(fù)方七芍降壓片的可能作用機(jī)制，為原發(fā)性高血壓的預(yù)防、診斷和治療提供客觀、有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 14 周齡 SHR 60 只，體質(zhì)量（206±17.5）g，健康雄性，批號(hào)：SCXK（滬 2008-0003）；14周齡 WKY 大鼠12 只，體質(zhì)量（213±19.4）g，健康雄性；批號(hào)：SCXK（滬2008-0003）；均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 藥物 復(fù)方七芍降壓片：每片5.5 g，湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科制備，批號(hào)：080103；卡托普利片：每片25 mg，湖南湘雅制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：0809106；硫酸氫氯吡格雷片：每片25 mg，深圳信立泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：0810112。

1.1.3 儀器 MP150十六導(dǎo)生理記錄儀（美國(guó)BIOPAC），BS-600L型高精度電子天平 （上海友聲衡器有限公司制造）；BTS-20型數(shù)字彩色圖像顯微分析系統(tǒng) （英國(guó)華粵行公司）；YH-4型壓力換能器 （航天醫(yī)學(xué)工程研究所）；KDC-2046型低溫離心機(jī)（中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司，中德光電儀器分公司）；AF100型制冰機(jī) （意大利SCOTSMAN）；D-8型切 割 式勻 漿 器 （德 國(guó) ART公司）；LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī) （廣州市華俊醫(yī)療器械有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥方法 將60只SHR稱質(zhì)量，按體質(zhì)量大小排序編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，即復(fù)方七芍降壓片高劑量組42.12 g/（kg·d）、 中劑量組21.06g/（kg·d）、 低劑量組 10.53g/（kg·d）（以下簡(jiǎn)稱復(fù)方七芍高、中、低劑量組）、卡托普利組 0.0135g/（kg·d）、硫酸氫氯吡格雷片組 0.0135g/（kg·d）；12 只 WKY 大鼠為空白組。復(fù)方七芍降壓片高、中、低劑量組，卡托普利組、硫酸氫氯吡格雷片組均以60 kg成人體表面積換算給藥。以上藥物用蒸餾水溶解稀釋，按1 mL/（100 g·只）灌胃，1次/d，連續(xù)4周?？瞻捉M以2 mL蒸餾水開(kāi)始灌胃，1次/d，連續(xù)4周。

1.2.2 SHR一般情況觀察 體質(zhì)量、皮毛、飲食、易激惹、大小便等。

1.2.3 血壓測(cè)定 溫度控制在18～22℃；濕度控制在55%～70%；室內(nèi)自然光線。應(yīng)用尾袖法連接小動(dòng)物血壓儀和MP150十六導(dǎo)生理記錄儀測(cè)量大鼠血壓。測(cè)量前將大鼠固定在錐形白布袋中，放入（37±1）℃電熱加溫箱內(nèi)預(yù)熱10 min后置于測(cè)壓臺(tái)上測(cè)壓。待MP150十六導(dǎo)生理記錄儀的記錄系統(tǒng)出現(xiàn)規(guī)律的脈搏波后，將血壓儀加壓至圖像上脈搏波振幅為0，再加壓升高30 mmHg，緩慢放氣后再次看到規(guī)律性振幅時(shí)血壓計(jì)數(shù)即為收縮壓。大鼠安靜狀態(tài)下測(cè)量3次，取其均值作為該樣本的血壓。

1.2.4 HE染色 觀察各組大鼠心臟形態(tài)、顏色、質(zhì)地、病變特征。制備心臟組織切片：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠處死,迅速取出心臟，0.9%氯化鈉注射液沖洗心臟表面及內(nèi)部血液，10%多聚甲醛固定24 h以上，常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，于心臟的中部每隔1 mm連續(xù)切取數(shù)個(gè)5μm厚的切片，做HE染色，光鏡下觀察心臟形態(tài)、顏色、質(zhì)地、病變特征性改變。

1.2.5 左心室重量指數(shù)（LVMI）的測(cè)定 觀察各組大鼠心臟及左心室形態(tài)、顏色、質(zhì)地、病變特征。左室濕質(zhì)量（包括室間隔）/體質(zhì)量之比：大鼠處死后迅速取出心臟，除去大血管殘根和結(jié)締組織，沿房室環(huán)剪去心房，沿室間隔剪去右心室，保留室間隔，左心室肌以濾紙吸干后稱質(zhì)量，計(jì)算 LVMI。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)以“x±s”表示，應(yīng)用 SPSS 11.5 軟件，采用方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR一般情況觀察

各組大鼠的體質(zhì)量、皮毛、飲食、大小便、易激惹程度在實(shí)驗(yàn)全過(guò)程中均未見(jiàn)明顯異常。用藥4周后，復(fù)方七芍降壓片高劑量組性情比空白組稍溫和，中、低劑量組和卡托普利組、硫酸氫氯吡格雷片組性情與空白組比較無(wú)明顯差異。

2.2 復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR血壓的影響

各組給藥前后比較，復(fù)方七芍降壓片低、中、高劑量組及卡托普利組SHR血壓均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中復(fù)方七芍降壓片高劑量組療效顯著；硫酸氫氯吡格雷片組及空白組血壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)果見(jiàn)表 1。

表1 給藥前后各組大鼠收縮壓的比較 ，mmHg，n=12）

表1 給藥前后各組大鼠收縮壓的比較 ，mmHg，n=12）

注：與空白組、硫酸氫氯吡格雷片組比較*P＜0.05。

藥物劑量給藥前收縮壓 給藥后收縮壓

2.3 復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR左室心肌組織的影響

光鏡下可見(jiàn)：空白組（圖1a）心肌纖維排列整齊，心肌細(xì)胞大小、形態(tài)正常；卡托普利組（圖1b）心肌間質(zhì)活躍增生，細(xì)胞橫徑增大，核明顯增大；硫酸氫氯吡格雷片組（圖1c）心肌細(xì)胞輕度肥大；復(fù)方七芍低劑量組（圖1d）心肌間質(zhì)輕度增生，心肌細(xì)胞輕-中度肥大；復(fù)方七芍中劑量組（圖1e）心肌間質(zhì)增生明顯，心肌細(xì)胞輕-中度肥大；復(fù)方七芍高劑量組（圖1f）心肌纖維排列較整齊，細(xì)胞橫徑略有增大。

2.4 復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR左心室體質(zhì)量指數(shù)（LVMI）的影響

圖1 復(fù)方七芍降壓片對(duì)SHR左室心肌組織的影響光鏡圖（HE×400）

大體病理觀察：與硫酸氫氯吡格雷片組比較，復(fù)方七芍降壓片高劑量組心臟大，顏色、質(zhì)地未見(jiàn)明顯變化，剪開(kāi)后可見(jiàn)左心室壁增厚，乳頭肌和肉柱增粗，心腔略有縮小。

與空白組比較，各組差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與硫酸氫氯吡格雷片組比較，復(fù)方七芍降壓片低、中、高劑量組及卡托普利組均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。說(shuō)明復(fù)方七芍降壓片低、中、高劑量組及卡托普利組均有不用程度的逆轉(zhuǎn)左心室肥厚作用。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠給藥后LVMI的比較 ，n=12）

表2 各組大鼠給藥后LVMI的比較 ，n=12）

組 別空白組復(fù)方七芍高劑量組復(fù)方七芍中劑量組復(fù)方七芍低劑量組卡托普利組硫酸氫氯吡格雷片組藥物劑量 g/（kg·d）—42.120 21.060 10.530 0.0135 0.0135 LVMI（mg/g）2.69±0.15 3.85±0.20 4.11±0.16 4.05±0.20 4.17±0.18 4.98±0.33

3 討論

高血壓病歸屬中醫(yī)學(xué)“眩暈”、“頭痛”、“風(fēng)?！狈懂牐洳∥辉诮j(luò)脈，陰虛陽(yáng)亢是其基本病機(jī)，瘀血貫穿于高血壓病的整個(gè)病程中，因此臨床治療高血壓病時(shí)應(yīng)緊扣陰虛、陽(yáng)亢、瘀血這三個(gè)病理環(huán)節(jié)[3]。高血壓病患者若火甚耗氣傷陰，氣陰(血)不足，血脈凝澀或瘀，或痰濕遏阻，氣機(jī)失暢，致痰瘀阻絡(luò)；若久病體衰，肝腎陰虛，或陰陽(yáng)俱損，氣血失和，或血行不暢，因虛致瘀。故不論病機(jī)屬虛屬實(shí)均可導(dǎo)致脈絡(luò)瘀滯，即“久病必虛，久病必瘀”。

復(fù)方七芍降壓片是根據(jù)高血壓病肝腎陰虛、瘀血阻絡(luò)的病理特點(diǎn)，經(jīng)過(guò)多年的臨床實(shí)踐研制的有效驗(yàn)方。由三七、白芍、桑寄生、地龍、丹參、鉤藤、天麻、杜仲、羅布麻、葛根、炒香附、甘草等組方，諸藥合用，共奏補(bǔ)益肝腎、活血化瘀之效。臨床應(yīng)用十余年，卓有療效。既往研究表明[4]：復(fù)方七芍降壓片有改善血液高凝狀態(tài)，達(dá)到治療高血壓病血栓前狀態(tài)的作用。故本課題在采用西藥組卡托普利片對(duì)照的同時(shí)，采用硫酸氫氯吡格雷片組對(duì)照，以進(jìn)一步探討復(fù)方七芍降壓片的抗凝作用。

血壓高可引起嚴(yán)重的心、腦、腎并發(fā)癥，對(duì)于高血壓病患者，首要任務(wù)是降低血壓。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者結(jié)合西醫(yī)學(xué)理論對(duì)中醫(yī)藥治療高血壓病進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)及臨床研究對(duì)復(fù)方作用機(jī)制的研究取得了很大的進(jìn)展。中藥對(duì)高血壓病造成的靶器官損害的保護(hù)作用，也成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，突出表現(xiàn)為逆轉(zhuǎn)左室肥厚，保護(hù)腎功能，抑制血管平滑肌細(xì)胞增生及其凋亡，從而延緩血管重塑。研究表明[5]SHR在4周齡已經(jīng)存在左心室肥厚；考慮在體狀態(tài)下，SHR左心室功能檢測(cè)異常與諸多因素有關(guān)[6]，如左心室肥大，激素類物質(zhì)水平，腎上腺素能刺激，心肌間質(zhì)組織，心肌內(nèi)冠狀動(dòng)脈循環(huán)情況，以及能量代謝異常等等；故本研究采用離體心臟測(cè)量LVMI。小動(dòng)物血壓儀和MP150十六導(dǎo)生理記錄儀測(cè)量大鼠血壓準(zhǔn)確性較好，尤以測(cè)量收縮壓更為精確，故動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中廣泛采用該法測(cè)量大鼠收縮壓。本研究結(jié)果表明：使用過(guò)復(fù)方七芍降壓片及卡托普利片的SHR在降低尾動(dòng)脈收縮壓的同時(shí)，左心室功能障礙的進(jìn)展得到一定程度的控制，表現(xiàn)為L(zhǎng)VMI下降。

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