張玉璽 姚曉穎 劉春鶴 王麗紅 楊姣 李士峰

甲松涂劑是我院制劑室自制的外用制劑，主要用于口腔潰瘍等疾病。甲硝唑和維生素B2是甲松涂劑中兩種主要成分。我們通過(guò)參閱有關(guān)甲硝唑和維生素B2在其他劑型中含量測(cè)定的文獻(xiàn)［1-3］，建立了用高效液相色譜法測(cè)定甲硝唑和維生素B2含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent 1100，美國(guó));電子天平(AG204，瑞士)。

1.2 試藥 甲硝唑和維生素B2對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為重蒸水;樣品為本院自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(38∶62);流速:0.8 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm;進(jìn)樣 20 μl;柱溫:25℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取甲硝唑?qū)φ掌?0 mg、維生素B2對(duì)照品12 mg置100 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，配制成甲硝唑濃度為200 μg/ml、維生素B2濃度為120 μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取甲松涂劑1 ml，置50 ml容量瓶中，精密加入流動(dòng)相至刻度，振搖，過(guò)濾，得濾液備用，做為甲硝唑和維生素B2的供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方配比制備缺甲硝唑和維生素B2的陰性甲松涂劑，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備成陰性樣品溶液。在此色譜條件下，陰性樣品、對(duì)照品和供試品溶液的色譜圖見(jiàn)圖1。甲硝唑和維生素B2的理論塔板數(shù)不低于2500，保留時(shí)間分別為3.65 min和6.05 min，陰性樣品無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)樣20 μl，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線(xiàn)性回歸。甲硝唑的回歸方程為Y=0.0449X+0.4883(r=0.9999)，維生素B2的回歸方程為Y=0.0112X-2.0573(r=0.9999)。實(shí)驗(yàn)表明甲硝唑和維生素B2分別在20～160 μg/ml和12～96 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下甲硝唑濃度為200 μg/ml、維生素 B2濃度為 120 μg/ml的對(duì)照品溶液 20 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得甲硝唑峰面積的RSD為0.79%(n=6)，維生素B2峰面積的RSD為1.12%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于制備后 0，2，4，6，8，24 h 測(cè)定峰面積，測(cè)得供試品溶液中甲硝唑峰面積的RSD=1.32%(n=6)，維生素B2峰面積的RSD=1.16%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)甲松涂劑樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法的制備后，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣3次測(cè)定，測(cè)得甲硝唑和維生素B2的RSD分別為1.02%和0.96%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)已知濃度的供試品溶液1 ml置于10 ml棕色量瓶中，稀釋至刻度。再?gòu)闹芯芰咳? ml置于10 ml棕色量瓶中，共6份。分別精密加入甲硝唑濃度為200 μg/ml，維生素 B2濃度為120 μg/ml的對(duì)照品溶液 1.0，1.0，1.0，2.0，2.0，2.0，3.0，3.0，3.0 ml，再加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.10 樣品含量測(cè)定 取3批甲松涂劑，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣20 μl，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算兩種成分含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)(%)

3 討論

3.1 從紫外光譜可見(jiàn)甲硝唑在277 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而維生素B2在267 nm、375 nm、444 nm有最大吸收。經(jīng)試驗(yàn)摸索在270 nm處甲硝唑和維生素B2均吸收良好，故選擇此波長(zhǎng)作為含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以甲醇-水(38∶62)作為流動(dòng)相時(shí)，分離效果最好，保留時(shí)間也較合理，因此選用此流動(dòng)相配比做為測(cè)定用流動(dòng)相。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用本法測(cè)定甲松涂劑中的甲硝唑和維生素B2含量，方法簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，分離效果好。陰性對(duì)照表明，在該色譜條件下，其他輔料對(duì)兩種主成分的測(cè)定無(wú)干擾，可用本法作為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

［1］海彩虹，董錦燕，盛愛(ài)軍．高效液相色譜法測(cè)定六維膠丸中維生素 B1、維生素 B2、煙酰胺含量．上海醫(yī)藥，2006，10(27):474．

［2］馮改利，蒙躍龍，李小安，等．HPLC法測(cè)定復(fù)方鋅鐵鈣顆粒中維生素B2的含量．西北藥學(xué)雜志，2006，21(5):198．

［3］梁改玲，趙梅花，仲平．高效液相色譜法測(cè)定維酶素片中維生素 B2的含量．臨床醫(yī)學(xué)，2005，10(25):85．