李建國(guó) 朱艷紅 曹毅

對(duì)乙酰氨基酚(Acetaminophen，APAP)是最常用的解熱鎮(zhèn)痛藥，也是各類感冒藥常見的活性成分之一［1］。近年來，中藥治療感冒，特別是流感取得良好療效，使得不少患者選擇中西藥合用的方式治療感冒。盡管大家認(rèn)為中西藥合用能各取所長(zhǎng)，從而能更好的治療疾病，但國(guó)內(nèi)卻沒有關(guān)于中藥與西藥感冒藥合用的對(duì)其體內(nèi)代謝產(chǎn)生什么樣作用的報(bào)道［2］。外感風(fēng)寒顆粒是治療風(fēng)寒外感型感冒常用的中成藥，與APAP合用能更好治療頭痛、發(fā)熱等癥狀。因此筆者通過研究外感風(fēng)寒顆粒對(duì)APAP代謝的影響，從而為中西藥聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

外感風(fēng)寒顆粒(山東臨清華威藥業(yè)有限公司);APAP(中國(guó)生物藥品檢驗(yàn)所，1000 mg，99.6%，100018-200408);對(duì)乙酰氨基酚顆粒(安徽國(guó)正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20080409，0.5 g/片);甲醇(色譜純，sigma公司);高氯酸(A．R，廣州化學(xué)試劑廠);去離子水;BP110S電子分析天平(日本);TGL-16B臺(tái)式高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);戴安高效液相色譜儀(二極管陣列檢測(cè)器，四元泵;美國(guó));Agilent Zorbax SB C18柱(2.1 mm × 30 mm，3.5 μm);Wistar大鼠，體重(180±20)g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK粵2008-0019。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 給藥方法 大鼠50支，隨機(jī)被分成5個(gè)組，每組雌雄各半，記為A、B、C、D、E組。采用灌胃給藥，其中A組給予APAP 10 mg/kg，作為陽性對(duì)照組;B組同時(shí)給予外感風(fēng)寒顆粒水溶液600 mg/kg和APAP 10 mg/kg;C組則同時(shí)給予分別1200 mg/kg和APAP 10 mg/kg;D、E組分別給藥外感風(fēng)寒顆粒水溶液600 mg/kg、1200 mg/kg，2 h后再給予 APAP 10 mg/kg。

2.2 血中APAP濃度的測(cè)定

2.2.1 樣品處理 各組用肝素處理過的毛細(xì)玻璃管從每只大鼠的尾靜脈采血。采血時(shí)間分別是投予APAP之前及投予之后的 0.125、0.25、0.5、1、2、3 和 4 h，然后將樣品用 15%的高氯酸除去血清中的蛋白質(zhì)(5000 r/min，2 min)后上清液經(jīng)濾膜(φ0.22 μm)過濾［3］，以空白血漿為陰性對(duì)照，用HPLC分別測(cè)定血藥濃度并計(jì)算其Cmax、Tmax、AUC0-4 h。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品的配制 精密稱取干燥至恒重的對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品32.32 mg，加雙蒸餾水10 ml，配制成3.232 mg/ml的溶液，儲(chǔ)存?zhèn)溆?。取適量?jī)?chǔ)備液，加入空白血漿，按照2.2.1項(xiàng)處理血漿方法進(jìn)行處理，配制成質(zhì)量濃度為1.01，2.02，4.04，8.08，16.16、32.32 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品。

2.2.3 色譜條件［4-5］Agilent Zorbax SB C18柱(2.1 mm ×30 mm，3.5 μm);柱溫:40℃;流動(dòng)相:甲醇-水:15:85;流速:0.8 ml/min;保留時(shí)間:15 min;進(jìn)樣量:10 μl;檢測(cè)限:5 ng;理論塔板數(shù)以APAP不低于2500，分離度不低于1.5。

2.2.4 線性關(guān)系考察 取2.2.2項(xiàng)下一系列不同濃度的對(duì)照品溶液，依法測(cè)得對(duì)乙酰氨基酚峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為Y=503.45X+1.9885，r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明，對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品質(zhì)量濃度在1.01～32.32 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，依法連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚峰面積分別為45.3411，46.0910，45.4421，45.0111，46.9012，46.0410，RSD=1.08%，表明方法精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，于12 h內(nèi)每隔0，2，4，6，8，10，12 h 進(jìn)樣檢測(cè)，依法測(cè)定．結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚峰面積分別為 55.3446，56.0347，56.0044，55.2452，55.9992，55.4522，RSD=1.37%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取同一對(duì)照品溶液，分別精密加入適量對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品，按供試品溶液制備方法，平行操作6份，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明方法回收率良好。

表1 對(duì)乙酰氨基酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

圖1 對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品

圖2 空白血漿

圖3 空白血漿+外感風(fēng)寒顆粒

圖4 樣品

由圖譜可知，空白血漿及外感風(fēng)害顆粒對(duì)APAP的測(cè)定均沒有影響。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(圖1)、空白血漿(圖2)、空白血漿+外感風(fēng)寒顆粒(缺APAP陰性對(duì)照，圖3)和樣品(圖4)的高效液色譜圖。

3.2 給予外感風(fēng)寒顆粒后大鼠血漿中的APAP體內(nèi)濃度變化結(jié)果見圖5及表2。±s)

圖5 大鼠體內(nèi)APAP的平均血藥濃度-時(shí)間曲線

表2 大鼠體內(nèi)APAP的Cmax、Tmax、t1/2、AUC0-4 h結(jié)果(

結(jié)果表明，外感風(fēng)寒顆粒與APAP同時(shí)服用時(shí)，低高劑量(B、C)組都能使Cmax值升高(P＜0.05)，但只有高劑量組使AUC0-4 h值升高。而先服用外感風(fēng)寒顆粒，2 h后再服用APAP的低高劑量組都能明顯地使Cmax、AUC0-4 h值升高(P＜0.01)，提示外感風(fēng)寒顆粒能使APAP在血漿中的濃度升高，且與外感風(fēng)寒顆粒服用劑量成正比，還與兩者之間的服藥時(shí)間有一定關(guān)系。另外，伴隨APAP的濃度升高的同時(shí)，其藥物濃度最高峰出現(xiàn)的時(shí)間有提前的趨勢(shì)。

4 討論

4.1 筆者結(jié)合文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn)結(jié)果［6-7］，在大鼠血漿中的APAP濃度經(jīng)過3 h左右已基本代謝完全，因此本實(shí)驗(yàn)采用測(cè)定AUC0-4 h足以計(jì)算一次給藥后的各藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。

4.2 筆者為排除外感風(fēng)寒顆粒與APAP對(duì)各自吸收過程的影響，在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)首先做了相同濃度單給APAP和兩者合用時(shí)APAP的體內(nèi)代謝情況，發(fā)現(xiàn)APAP的血藥濃度變化曲線及Tmax、t1/2、AUC0-4 h并無并無明顯差異(P＜0.01)，但是發(fā)現(xiàn)不同給藥反而對(duì)其代謝有一定影響，故在同時(shí)給予兩藥的同時(shí)，也做了后給APAP的對(duì)照試驗(yàn)，這也是考慮到中藥起效比較慢的因素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)先服用外感風(fēng)寒顆粒時(shí)對(duì)APAP代謝影響更明顯，需進(jìn)一步進(jìn)行研究。

4.3 有文獻(xiàn)報(bào)道使用APAP過量可引起肝損害，甚至造成嚴(yán)重肝損害乃至死亡［8-12］，而本試驗(yàn)提示外感風(fēng)寒顆粒對(duì)APAP代謝有一定影響，并與劑量有相關(guān)性，建議在聯(lián)合用藥時(shí)權(quán)衡利弊［13］。

4.4 筆者僅研究了大鼠口服外感風(fēng)寒顆粒對(duì)APAP的代謝情況，需進(jìn)一步考察在人體內(nèi)兩者的相互影響情況，從而為評(píng)價(jià)中西藥聯(lián)合用藥的安全性提供更多依據(jù)。

［1］趙興晉．APAP的安全用藥．中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥雜志，2007，5(14):52．

［2］唐春燕，陳薇，陳大建，等．蔗糖對(duì)APAP體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(6):707-708．

［3］Jinfeng QI，Yumiko HONDA and Satoru MINESHITA，Simultaneous HPLC Determination of Acetaminophen and Four of Its Major Me-tabolites in Small-volume Biologic Fluids．Jpn Clin Pharmacol T-her，2002，33(6):263-275．

［4］楊俊毅，蔣學(xué)華，林舒，等．RP-HPLCC同時(shí)測(cè)定血漿中對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因的濃度．《華西藥學(xué)雜志》，2003，18(2):110-112．

［5］周芬，孫莉，劉麗京，等．反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人血漿中對(duì)乙酰氨基酚/曲馬朵及其代謝物的含量，《中國(guó)藥物依賴性雜志》，2007，16(4):271-275．

［6］Court MH，Duan SX，von Moltke LL，Greenblatt DJ，Patten CJ，Miners JO，et al．Interindividual variability in acetaminophenglucuronidation by human liver microsomes:identification of relevantacetaminophen UDP2 glucuronosyltransferase isoforms．J Pharma2col Exp Ther，2001，299(3):998-1006．

［7］Jinfeng QI，Yumiko HONDA and Satoru MINESHITA，Simultaneous HPLC Determination of Acetaminophen and Four of Its Major Metabolites in Small-volume Biologic Fluids．Jpn Clin Pharmacol T-her，2002，33(6):263-275．

［8］吳洋東，虞滌霞，劉紅艷，等．肝泰膠囊保護(hù)對(duì)乙酰氨基酚所致急性肝損傷實(shí)驗(yàn)研究《中國(guó)藥師》，2008，11(6):628-630．

［9］李鵬飛，劉麗宏，馬萍，等．LC-MS/MS同時(shí)測(cè)定人血漿中對(duì)乙酰氨基酚和右氯苯那敏濃度．《解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)》，2009，(1):33-37．

［10］吳希美，周漢良，卞如濂．小柴胡APAP肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)理研究．中藥藥理與臨床，1997，13(6):8-10．

［11］Davidson DGD，Eastham WN．Acute liver necrosis following overdose of paracetam01．Br Med J，1966，2(5):497-499.

［12］Sarah JAW，Elizabeth HJ．Interaction of caffeine with acetaminophen．Biochem Pharmacol，1993，46(11):493-501．

［13］金慧萍，李中東，焦正．對(duì)乙酰氨基酚的不良反應(yīng)與合理使用，《藥物不良反應(yīng)雜志》，2004，6(1):27-31．