羅曼宇,吳 曼,劉樹軍*,羅 萍

(1.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部臨床醫(yī)學(xué)二系,吉林長春 130041;2.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部二院腎病內(nèi)科,吉林長春 130041)

應(yīng)用微波技術(shù)將腎穿刺冰余組織重制石蠟切片的研究

羅曼宇1,吳 曼2,劉樹軍2*,羅 萍2

(1.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部臨床醫(yī)學(xué)二系,吉林長春 130041;2.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部二院腎病內(nèi)科,吉林長春 130041)

目的探討微波在腎穿刺冰余組織重制石蠟切片染色中的作用。方法應(yīng)用微波技術(shù)對(duì)58例臨床上懷疑急進(jìn)性腎炎的腎穿刺冰余組織重制石蠟切片的標(biāo)本進(jìn)行染色,并與常規(guī)切片染色結(jié)果比較。結(jié)果應(yīng)用微波技術(shù)的58例懷疑急進(jìn)性腎炎腎穿刺冰余組織重制石蠟切片的染色結(jié)果與常規(guī)切片染色結(jié)果基本無差異。結(jié)論應(yīng)用微波技術(shù)將腎穿刺冰余組織重制石蠟切片可彌補(bǔ)穿出的腎組織腎小球過少或缺失;制片染色省時(shí)且質(zhì)量好。對(duì)臨床快速準(zhǔn)確做出病理診斷、指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后有重要意義。

微波/診斷應(yīng)用;穿刺術(shù)/方法;腎炎/診斷

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0885)

近年來微波技術(shù)廣泛應(yīng)用于標(biāo)本的前期處理、光鏡特殊染色以及免疫組織化學(xué)染色等領(lǐng)域,所用時(shí)間大大縮短,且背景也得到明顯改善[1,2]。國內(nèi)外對(duì)此報(bào)道較多,但是對(duì)應(yīng)用微波技術(shù)將腎穿刺冰余組織重制石蠟切片的研究目前報(bào)道較少。

1 材料與方法

1.1 儀器 EM-350S型SANYO牌家用微波爐:合肥三洋榮事達(dá)電器有限公司;BM-V型自動(dòng)組織包埋機(jī):湖北省醫(yī)用電子儀器廠;ZH-3型石蠟切片用冷臺(tái):沈陽縱橫高技術(shù)公司;半自動(dòng)石蠟切片機(jī):英國Thermo Shandon公司。

1.2 材料 58例標(biāo)本為1998年8月-2008年10月我科臨床上懷疑急進(jìn)性腎炎患者的腎穿刺標(biāo)本。每例腎穿刺標(biāo)本分三部分,以備做免疫熒光、光鏡和電鏡(部分病例)檢查。

1.3 病理檢查 ①免疫熒光 冰凍切片免疫熒光檢測(cè),用異硫氰熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q及纖維蛋白原,用直接免疫熒光法;②光鏡 常規(guī)石蠟切片進(jìn)行HE、PAS、PASM、MASSON染色;③電鏡檢查根據(jù)臨床需要個(gè)別病例送吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院電鏡室檢查。

1.4 方法

1.4.1 腎穿刺冰余組織重制石蠟切片的制片染色方法:①腎穿刺活檢取材應(yīng)先盡量滿足免疫熒光的冰凍組織,待冰凍切片切完后,在冰凍切片機(jī)內(nèi)迅速取出冰余腎組織放入盛有生理鹽水的安瓶內(nèi),4℃環(huán)境下浸泡 15min,然后取出冰余腎組織立即放入10%中性甲醛固定液中進(jìn)行微波(600 W)固定20 s;②組織脫水:80%、85%、90%、95%、100%及100%乙醇中進(jìn)行微波(600 W)脫水各15 s,總計(jì)90 s;③透明:二甲苯Ⅰ、Ⅱ在微波(600 W)中各15 s,總計(jì)30 s;④浸蠟:常規(guī)浸蠟,蠟缸 Ⅰ、Ⅱ各10 min;⑤包埋、切片及烤片:用自動(dòng)組織包埋機(jī)包埋,冷臺(tái)冷卻蠟快,切片厚0.5 μ m,60℃烤箱中烤片1h;⑥常規(guī)脫蠟至水,以備染色;⑦染色:HE、PAS按常規(guī)染色。PASM六胺銀顯色采用微波600 W,90s,其余與常規(guī)PASM套MASSON染色相同。

1.4.2 常規(guī)石蠟切片制片染色方法:按常規(guī)制片染色方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

冰余組織重制石蠟切片的制片染色:固定、脫水、透明和PASM六胺銀顯色共用3.8 min(230 s);從固定開始到染色結(jié)束整個(gè)過程只需3.5 h(12 600 s),而且切片連續(xù),厚薄均勻一致,無切口,無刀痕,無斷裂,無破碎,無皺褶,無色素沉著。常規(guī)石蠟切片的制片染色:固定、脫水、透明和PASM六胺銀顯色共用44.17 h;從固定開始到整個(gè)染色結(jié)束需要2 d,二者所用時(shí)間差異有顯著性。冰余組織重制石蠟切片的染色結(jié)果與常規(guī)石蠟切片的染色結(jié)果相同,見下圖。

3 討論

用微波技術(shù)促進(jìn)組織切片染色是近年來開展的新技術(shù)[3]。微波是一種高頻電磁波,通常由頻率為2.5GHz的家用微波爐產(chǎn)生。極性分子(水,極性蛋白質(zhì))在電磁場(chǎng)中將以每秒25億次的頻率高速振動(dòng),隨之產(chǎn)生熱能,增強(qiáng)了細(xì)胞和組織的通透性和與染液的滲透和交換作用,組織很快著色。本研究在固定、脫水、透明以及PASM六胺銀顯色的過程中都采用了微波技術(shù)。用10%中性甲醛進(jìn)行微波固定起到了雙層固定作用,使組織從內(nèi)部到表面固定既迅速又均勻透徹。微波除了用于組織固定外,還可加速乙醇的固定兼脫水作用,對(duì)二甲苯透明及PASM六胺銀顯色也有同樣的作用。

有資料顯示[4],微波輻射的效果與被加熱的物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。水及各種水溶液能很好地吸收微波能。所以本研究從固定到透明都采用了微波技術(shù),操作十分方便。而石蠟不溶于水,它雖能透過微波,但吸收的微波能量甚微,因此本室不采用微波浸蠟,而采用常規(guī)浸蠟。有報(bào)道,整個(gè)制片染色過程都可采用微波技術(shù),但本文作者認(rèn)為并不可取,因有些步驟使用染料比較貴重,配制較麻煩,需要較多的人力物力,造成浪費(fèi),而本室改進(jìn)后的技術(shù)與整個(gè)過程都采用微波相比,切片染色質(zhì)量無明顯差異。

臨床上凡急性腎炎綜合征伴腎功能急劇惡化,無論是否已達(dá)到少尿性急性腎衰竭,應(yīng)懷疑急進(jìn)腎小球腎炎并及早進(jìn)行腎活檢?；颊呷裟艿玫郊皶r(shí)明確診斷和早期強(qiáng)化治療,可顯著改善預(yù)后。但是,在腎穿刺活檢病理檢查中,常因多種原因使部分患者被穿出的腎組織腎小球過少或缺失,本室經(jīng)大量研究,應(yīng)用微波技術(shù)將腎穿刺冰余組織重制石蠟切片,并且應(yīng)用微波技術(shù)染色獲得了理想的制片效果。因?yàn)樯睇}水為“等滲鹽水”,含0.9%氯化鈉,與正常情況下的細(xì)胞外液的滲透壓基本相等,能夠避免細(xì)胞破裂,不會(huì)讓細(xì)胞脫水或者過度吸水,所以我們?cè)诒鶅銮衅型旰?在冰凍切片機(jī)內(nèi)用刀片迅速取出冰余腎組織放入事先盛有生理鹽水的安瓶內(nèi),在4℃環(huán)境下浸泡15-20分鐘左右,然后取出冰余腎組織立即放入盛有10%中性甲醛固定液中進(jìn)行固定。

本研究結(jié)果表明,應(yīng)用微波技術(shù)將冰余組織重制石蠟切片的制片染色,既彌補(bǔ)了穿出的腎組織腎小球過少或缺失,又大大縮短了制備切片的時(shí)間。對(duì)臨床醫(yī)生快速正確做出病理診斷、指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后有重要意義。

[1]劉樹軍,張金蘭,王連友,等.腎臟穿刺病理標(biāo)本染色前的處理[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2006,10(12):1531.

[2]劉長宏,田俊芝.微波技術(shù)在Weigert來復(fù)紅彈力纖維染色中的應(yīng)用[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,9(3):416.

[3]朱振龍.微波在免疫組化中的應(yīng)用[J].河北醫(yī)藥,2003,25(1):44.

[4]劉樹軍,于洗河,王 吉,等.微波技術(shù)在腎穿刺病理檢查中的應(yīng)用[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2004,30(4):640.

Research of making renal biopsy frozen tissue into paraffin through microwave technology

LUO Man-yu1,WU Man2,LIU Shu-jun2*,et al.(1.Second faculty of clinical medicine,Bethune Department of Jilin University,Changchun130041,China;2.Department of Nephrology,Second Hospital,Jilin University,Changchun,Jilin Province130041,China)

ObjectiveInvestigated the effect ofmicrowave technology inmaking renal biopsy frozen tissue into paraffin.MethodsSelected 58 patients who are clinical suspicion of accelerated nephritis,applicated the microwave technology and dyed the paraffins which were made of frozen tissue.And then comparedwith the conventional ones.ResultsThere is no difference between the paraffins being made of frozen tissue and the conventional ones.ConclusionMaking renal biopsy frozen tissue into paraffin through microwave technology can make up the less or missing of renal glomerulus,which was time-saving and good quality.Itwasimportant significance to make pathological diagnosis,guide therapy and judge prognosis quickly and accurately.

microwave/diagnostic application,punctio/method,nephritis/diagnosis

R692.3

A

1007-4287(2010)06-0885-02

*通訊作者

羅曼宇(1987-),男,吉林長春,在讀本科生,臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)。

2009-05-20)