孫曉盈,王 海,高 申,謝 風(fēng)

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林長春 130033)

Fbgβ455基因多態(tài)性與CRP協(xié)同作用對動脈粥樣硬化的影響

孫曉盈,王 海,高 申,謝 風(fēng)*

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林長春 130033)

目的研究血漿纖維蛋白原Fbgβ455基因多態(tài)性與此反應(yīng)蛋白CRP的協(xié)同作用對動脈粥樣硬化的影響。方法采用限制性長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)檢測血漿Fbgβ455基因態(tài)性及免疫比濁法檢測CRP。結(jié)果心肌梗塞組與冠心病組患者外周血基因組DNAFbgβ455多態(tài)性分布G/G,G/A,A/A具有顯著性差異(P＜0.05);心肌梗塞組與冠心病組中血漿高敏CRP與Fbgβ455多態(tài)性分布無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。結(jié)論血漿Fbgβ455等位基因型G/A,A/A可能是急性心肌梗塞發(fā)病的遺傳性危險因素,Fbgβ455與CRP在動脈硬化的發(fā)生過程中無協(xié)同作用。

纖維蛋白原;C反應(yīng)蛋白;限制性長度聚合酶鏈反應(yīng);基因多態(tài)性

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1449)

目前研究已證實在急性心肌梗塞或腦梗塞的患者中血漿纖維蛋白原及C反應(yīng)蛋白的濃度顯著高于正常水平。但從基因水平上分析冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生時二者的基因多態(tài)性是否具有協(xié)同作用,

目前尚無報道,本文作以下研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗對象 心肌梗塞血清標(biāo)本收集2006年10月-2007年8月吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院心內(nèi)科,急診科等72例,其中男39例,平均年齡58歲;女33例,平均年齡62歲。診斷符合WHO心肌梗塞的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組冠心病血清標(biāo)本收集2006年10月-2007年2月吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院心內(nèi)科78例,其中男43例,平均年齡61歲,女35例,平均年齡65歲。診斷符合WHO冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn),部分經(jīng)冠狀動脈造影證實。

1.1.2 主要試劑 全血基因組DNA提取試劑盒、PCR擴增試劑盒及HaeⅢ限制性內(nèi)切酶(大連寶生物工程有限公司、引物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)

1.2 方法 采用分子生物學(xué)技術(shù)——限制性長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)。

1.2.1 標(biāo)本收集及處理

取靜脈血(2%EDTA抗凝)2 ml用于提取白細胞做基因檢測,枸櫞酸鈉抗凝血7 ml用于檢測血漿Fbg。

1.2.2 外周血基因組DNA提取

1.2.3 PCR擴增DNA

Fbg 引 物 設(shè) 計:上 游:5′-GGAATGCAATCTCTGCTACCT-3′

下游 :5′-TGTCGTTGACACCTTGGGAC-3′

1.2.4 HaeⅢ限制性內(nèi)切酶酶切

1.2.5 1%瓊脂糖凝膠電泳

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用統(tǒng)計軟件SPSS11.5分析,其中兩組(心肌梗死組與對照組)Fbgβ455G/A基因頻率及等位基因頻率分布進行 χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Fbgβ455G/A多態(tài)性分布圖

圖1 Fbgβ455G/A多態(tài)性分布

圖1中顯示從左向右第一條帶是異常突變雜合子G/A型;第二條帶為正?；騁/G型;第三條帶為異常突變純合子A/A型;第四條帶為未經(jīng)酶切的Fbgβ455基因 ;M 為 maker。

2.2 心肌梗塞組與冠心病組患者外周血基因組DNAFbgβ455多態(tài)性分布

心肌梗塞組與冠心病組患者外周血基因組DNAFbgβ455多態(tài)性分布G/G,G/A,A/A具有顯著性差異(P＜0.05),兩組G和A等位基因頻率均有顯著性差異,P＜0.05,見表1。

2.3 心肌梗塞組與冠心病組Fbgβ455多態(tài)性分布與血漿高敏CRP濃度的關(guān)系

心肌梗塞組與冠心病組中血漿高敏CRP與Fbgβ455多態(tài)性分布無顯著相關(guān)性(P＞0.05),且心肌梗死患者血漿高敏CRP濃度明顯高于對照組(P＜0.005)。(見表2)

表2 心肌梗塞組與冠心病組Fbgβ455多態(tài)性分布與血漿高敏CRP濃度的關(guān)系

3 討論

目前發(fā)現(xiàn)β纖維蛋白原455G/A基因多態(tài)性表現(xiàn)為455G/G,455G/A,455A/A三種基因型,且G/A或A/A基因型的個體血漿纖維蛋白原水平明顯高于G/G,A/A和G/A基因型個體的缺血性心腦血管疾病發(fā)生率明顯高于G/G型個體[1]。長期以來CRP被當(dāng)作感染與炎癥的經(jīng)典指標(biāo)[2]。細胞因子尤其是由肝細胞和激活的巨噬細胞分泌的白細胞介素-6(IL-6),在斑塊破裂和血栓形成中也起著重要的作用,白細胞介素-6可誘導(dǎo)CRP和纖維蛋白原的分泌。在心肌梗塞等動脈硬化時刺激肝細胞刺激因子白細胞介素-6(IL-6)產(chǎn)生增多,而IL-6主要促進肝細胞合成分泌Fbg,導(dǎo)致血漿Fbg水平的增高[3]。CRP是Fbg的一種趨化因子,Fbg又使巨噬細胞粘附到內(nèi)皮表面從而移植到內(nèi)膜。CRP趨化單核細胞,單核細胞誘導(dǎo)組織因子的產(chǎn)生而促進凝血過程。又因為Fbgβ-455G/A位點鄰近IL-6反應(yīng)區(qū)域,與該位點連鎖的基因位點Fbgβ-148也位于IL-6反應(yīng)區(qū)域附近,它的變異可通過IL-6介導(dǎo)使Fbg表達增加。從理論上講二者在動脈硬化發(fā)生時應(yīng)具有協(xié)同作用,但本實驗中心肌梗塞組Fbgβ-455多態(tài)性分布與CRP無相關(guān)性,原因一方面可能是血清CRP水平受自身CRP基因多態(tài)性調(diào)控,且IL-6基因變異也會影響CRP釋放入血;另一方面,標(biāo)本量較少也是影響本實驗結(jié)果的重要原因。以上問題還有待于今后進一步探討。

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[2]Kim YJ,Shin YO,Bae JS,et al.Beneficial effects of cardiac rehabilitation and exercise after percutaneous coronary intervention on hsCRP and inflammatory cytokines in CAD patients[J].European journal of physiology,2008,455(6):1081.

[3]Dorsch MF,Barrett JA,Lawrance R A,et al.Premature coronary artery disease shows no evidence of linkage to loci encoding for tissue inhibitors of matrix metallopro2 teinases[J].J Hum Genet,2003,48(10):508.

The relationship between fibrinogen,polymorphismβ-455G/A,hs-CRP and artherosclerosis

SUN Xiao-ying,WANG Hai,GAO Shen,et al.(China-Japan Union Hospital of Jilin University,Changchun130033,China)

ObjectiveTo investigate the relationship between gene frequency 、allele frequency of Fgβ455G/A and pathological change degree of myocardial infarction(MI)、blood plasma Fg、CRP.MethodsAdopt molecular biology restricted length polymorphism reaction and observe results by agarose gelelectro There is no significant difference between CRP and polymorphism of DNAFgβ455in bothgroupMI andCHD(P＞0.05)phoresis under extreme ultraviolet lamp.Test the level of Fg and CRP by coagulogram analysator ACL900 and beckman autoanalyser.ResultsThere is significant difference on polymorphism of DNAFgβ455 G/G,G/A,A/A、allele frequency of G and A between two groups(P＜0.05).ConclusionAllelotype G/A,A/A of Fgβ455 is probably heritage risk factor of AMI;The level of Fg is affected by polymorphism of Fgβ455;3 the high sensitive CRP is not affected by polymorphism of Fgβ455.

fibrinogen;C reactive protein;Restricted length polymorphism reaction;polymorphism of gene

R541.4

A

1007-4287(2010)09-1449-02

吉林省科委資助項目

*通訊作者

2009-12-02)