李冬梅,姜海榮,宓宇仙,孫連坤,楊 柳

(1.吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院特診科,吉林吉林市 132022;2.吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

氯沙坦對(duì)實(shí)驗(yàn)性腎衰RAS系統(tǒng)的影響

李冬梅1,姜海榮1,宓宇仙1,孫連坤2,楊 柳1

(1.吉化集團(tuán)公司總醫(yī)院特診科,吉林吉林市 132022;2.吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

目的探討血管緊張素受體拮抗劑氯沙坦(ARB)對(duì)血管緊張素受體亞型1(AT1)、血管緊張素受體亞型2(AT2)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)、血管緊張素原(AGT)基因表達(dá)的影響。方法本試驗(yàn)應(yīng)用阿霉素(ADR)復(fù)制腎衰大鼠模型,采用RT-PCR檢測(cè)AT1、AT2、ACE、AGT基因表達(dá)。結(jié)果腎衰組腎臟 AT1表達(dá)上調(diào),AT2降低,氯沙坦組轉(zhuǎn)為AT1下調(diào),AT2表達(dá)接近對(duì)照組水平;與對(duì)照組相比,腎衰模型AGT水平增高,而給予氯沙坦后其水平降低;ACE在腎衰時(shí)表達(dá)上調(diào),給氯沙坦后降低但仍高于對(duì)照組水平。結(jié)論氯沙坦可從調(diào)節(jié)血管緊張素II(Ang II)生成及受體水平角度對(duì)抗AngⅡ的作用,從而避免腎損傷。

氯沙坦;腎損傷;RAS系統(tǒng)

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1378)

腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)在腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,日益受到人們的關(guān)注。血管緊張素Ⅱ是RAS系統(tǒng)的主要活性物質(zhì),其作用主要由AT1受體介導(dǎo)。阻斷AT1受體能夠阻斷血管緊張素Ⅱ的作用,進(jìn)而阻斷RAS活性。血管緊張素受體拮抗劑對(duì)腎臟保護(hù)作用,但對(duì)其是否影響AT1受體等RAS成分的表達(dá)尚未見報(bào)道。因此,本研究應(yīng)用阿霉素復(fù)制腎衰大鼠模型,觀察血管緊張素受體拮抗劑氯沙坦對(duì)AT1、AT2、ACE、AGT基因表達(dá)的影響,從而探討RAS在腎衰發(fā)生發(fā)展過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 腎衰大鼠模型建立和檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物48只適應(yīng)1周,自由飲水進(jìn)食,測(cè)體重后隨機(jī)分組。A組16只為正常對(duì)照組,余32只按阿霉素腎衰模型方法造模。于給藥后第5周,將造模大鼠隨機(jī)分為治療組(B組)16只,對(duì)照組(C組)16只。B組給予氯沙坦1.2 mg/只/次灌胃,1次/d,C組給予同等量生理鹽水灌胃,1次/d。所有動(dòng)物均連續(xù)給藥2周,于治療結(jié)束后,在腹腔麻醉下摘取出雙腎凍于-80℃,RT-PCR檢測(cè)RAS系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)變化。

1.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)腎衰大鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量 見表1。

表1 各組大鼠血清中 BUN、Cr的含量(±s)

表1 各組大鼠血清中 BUN、Cr的含量(±s)

*P＜0.05,與對(duì)照組比較;#P＜0.05,與ADR組比較。

組別 BUN(mmol/L) Cr(mmol/L)對(duì)照組 8.78±2.45 32.05±4.81 ADR組 12.46±1.56* 44.17±4.16*ADR+ARB組 10.34±1.82# 34.51±4.28#

2.2 腎衰大鼠腎組織AT1,AT2,ACE,AGT mRNA的表達(dá) 見圖1-圖4。結(jié)果顯示,腎衰組腎臟AT1表達(dá)上調(diào),AT2降低,氯沙坦組轉(zhuǎn)為AT1下調(diào),AT2表達(dá)接近對(duì)照組水平;與對(duì)照組相比,腎衰模型血管緊張素原(AGT)水平增高,而給予氯沙坦后其水平降低;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)在腎衰時(shí)表達(dá)上調(diào),給氯沙坦后降低但仍高于對(duì)照組水平。

圖1 RT-PCR檢測(cè)大鼠腎臟A T1 mRNA的表達(dá)

圖2 RT-PCR檢測(cè)大鼠腎臟AT2 mRNA的表達(dá)

圖3 RT-PCR檢測(cè)大鼠腎臟ACE mRNA的表達(dá)

圖4 RT-PCR檢測(cè)大鼠腎臟AGT mRNA的表達(dá)

3 討論

在整個(gè)血管緊張素系統(tǒng)(RAS)中,血管緊張素原(AGT)通過腎素轉(zhuǎn)變成血管緊張素Ⅰ(Ang I),血管緊張素Ⅱ(Ang II)是Ang I通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的酶解作用生成的,是RAS主要活性肽,其主要作用是收縮血管[1]。Ang II的大多數(shù)作用是通過與AT1R結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的,AT1受體介導(dǎo)包括動(dòng)脈血壓、電解質(zhì)、水平衡、口渴、激素分泌和腎功能的調(diào)節(jié)[2]。AT1受體廣泛分布于哺乳動(dòng)物的大腦、腎上腺、心臟、血管、腎臟、肝臟等組織和器官,屬G蛋白耦聯(lián)受體超家族的一員,具有7個(gè)跨膜區(qū)域以及與G蛋白耦聯(lián)的羧基終端[3]。AT2R與AT1R的結(jié)構(gòu)差異較大,兩者之間只有32%-34%的氨基酸序列相同[4]。關(guān)于AT2R的功能目前尚未完全闡明,近年來的研究表明,AT2R的部分作用與AT1R相反,其主要功能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞分化,并介導(dǎo)血管擴(kuò)張[5]。AT2受體僅分布于腎上腺、心臟、腦(神經(jīng)元)、子宮、卵巢、腎臟和肺臟等,

ATR拮抗劑主要有AT1RA及AT2RA,目前研究較多的是AT1RA。AT1RA發(fā)揮腎保護(hù)作用的主要機(jī)制是對(duì)AT1受體的阻斷,但進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),AT1RA還能增加血漿中腎素和Ang水平,加大了Ang II與AT2R的結(jié)合,發(fā)揮抗增殖作用。AT1RA具有改善腎血流動(dòng)力學(xué)、減輕腎血管阻力、選擇性擴(kuò)張出球小動(dòng)脈、降低腎小球內(nèi)壓力、減少蛋白尿、防止腎間質(zhì)纖維化、促進(jìn)尿酸排泄等作用。ATR拮抗劑廣泛用于多種原發(fā)性及繼發(fā)性腎病的治療[6]。

氯沙坦是第一個(gè)上市(1990年開發(fā))的口服非肽類AT1受體拮抗劑,具有高效、長(zhǎng)效、低毒的特點(diǎn)。AT1受體拮抗劑的臨床應(yīng)用包括:1)治療高血壓病:AT1受體拮抗劑阻斷了Ang II所致的外周血管收縮、交感神經(jīng)興奮和壓力感受器敏感性增加等作用,從而產(chǎn)生降壓作用。許多臨床試驗(yàn)已證明單獨(dú)使用AT1受體拮抗劑對(duì)輕、中度高血壓病有效[7-8]。其降壓作用與鈉的攝入無關(guān),不影響心率,不改變腎小球?yàn)V過率,略微增加腎血流,增加尿鈉和一過性尿鉀排出,增加尿酸排出[9]。2)治療充血性心力衰竭:AT1受體拮抗劑通過阻斷RAS的作用,可降低周圍血管阻力,增加靜脈順應(yīng)性,降低左心室舒張末期壓力,從而減緩心力衰竭的發(fā)展,降低心力衰竭的病死率[7]。3)抗心室肥厚:AT1受體拮抗劑通過阻斷Ang II受體,有利于心肌肥厚的緩解。4)治療心肌梗死:現(xiàn)已有報(bào)道AT1參與心室重塑。目前正在進(jìn)行有關(guān)洛沙坦和纈沙坦對(duì)心肌梗死合并左心功能衰竭的干預(yù)性試驗(yàn)研究,預(yù)計(jì)結(jié)果將于近年揭曉[7]。5)治療糖尿病腎病:丁鶴林等研究顯示[8],洛沙坦處理過的STZ糖尿病大鼠,其糖尿病腎病的發(fā)生延緩,同時(shí)降低腎組織3型基質(zhì)金屬蛋白酶mRNA的表達(dá)。

阿霉素主要通過氧化應(yīng)激等方式誘導(dǎo)腎功能衰竭。本研究證明腎衰發(fā)生發(fā)展過程中,ANG II生成增加,AT1信號(hào)通路活性增強(qiáng),AT2信號(hào)通路活性降低,說明阿霉素誘導(dǎo)腎功能衰竭過程中,主要通過AngⅡ與AT1結(jié)合,增強(qiáng)其縮血管作用而影響腎臟血流動(dòng)力學(xué)促進(jìn)腎臟病的進(jìn)展。腎衰時(shí)AT2下調(diào)使其功能減弱,可經(jīng)減少腎血流方式促進(jìn)了腎組織損傷。氯沙坦為AngⅡ受體拮抗劑,競(jìng)爭(zhēng)性抑制AngⅡ與其受體結(jié)合,且主要與AT1結(jié)合,可阻斷Ang II引起的血管收縮、交感興奮、醛固酮分泌增多等作用。因而可以緩解腎損傷。此外,本研究結(jié)果亦證明氯沙坦可從調(diào)節(jié)受體水平角度對(duì)抗AngⅡ的作用。

綜上所述,本研究在經(jīng)ADR復(fù)制腎衰大鼠模型前提下,主要研究RAS系統(tǒng)成分腎衰發(fā)生發(fā)展過程中的作用。腎衰組RAS的水平及活性變化直接與腎損傷相關(guān),拮抗腎RAS可保護(hù)腎組織。本研究結(jié)果充分顯示RAS在腎衰發(fā)生發(fā)展過程中的作用,針對(duì)RAS的研究可將其作為藥物作用新靶點(diǎn),有助于開發(fā)新的腎臟疾病治療藥物。

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Effects of Losartan on renin-angiotensin system in the kidney of experimental renal failure

LI Dong-mei,JIANGHai-rong,MI Yu-xian,et al.(The hospital of chemicalindustry company,Jilin city132022,China)

ObjectiveTo explore the mRNA expression of AT1,AT2,ACE and AGT was determined with RT-PCR method.MethodsIn this study,after the rat model of renal failure was established by administrating with ADR.ResultsRT-PCR results showed that adriamycin inducted that upregulation of AGT,ACE and AT1,and down-regulation of AT2,but the down regulation of AGT,AT1 when adriamycin administration.ConclusionARB can competitively inhibit the acitivity of ANG II through binding with AT1,or down regulate the expression of ANG II receptor,it can protect the kidney from the injury.

Losartan;renal failure;RAS system

R961

A

1007-4287(2010)09-1378-03

2009-11-14)