何 英,萬德云,張玉興

(1.吉林大學(xué)體育學(xué)院,吉林 長春 130026;2.吉林大學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院;3.長春中醫(yī)學(xué)院)

榆黃蘑提取物對保護(hù)肝臟作用的初步探討

何 英1,萬德云2,張玉興3

(1.吉林大學(xué)體育學(xué)院,吉林 長春 130026;2.吉林大學(xué)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院;3.長春中醫(yī)學(xué)院)

目的探討榆黃蘑提取物的保肝作用,為開發(fā)利用榆黃蘑提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法給動物灌胃給藥,腹腔注射環(huán)磷酰胺制作小鼠肝損傷模型,測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性和丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果榆黃蘑提取物沉淀部分大劑量(0.8 g/kg/d)和中劑量(0.4 g/kg/d)組對降低肝損傷小鼠血清中ALT和AST的含量有顯著效果,上清液小劑量(0.4 g/kg/d)組對降低AST含量也有顯著效果;沉淀部分中劑量和上清液小劑量組對MDA含量也有顯著降低作用。結(jié)論榆黃蘑提取物沉淀部分和上清液均具有明顯的保肝作用。

榆黃蘑;提取物;肝臟;保護(hù)

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1368)

榆黃蘑(Pleurotus citrinipileatus Sing),隸屬于擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina),層菌綱(Hymenomycetes),傘菌目(Agaricales),側(cè)耳科(Pleurotaceae),側(cè)耳屬(Pleurotu),也叫金頂側(cè)耳,在植物學(xué)上被稱為金頂蘑,又稱榆黃菇、玉皇蘑或黃蘑。野生的榆黃蘑子實(shí)體多發(fā)生于多雨的夏秋季節(jié),腐生于多種倒木上,主要分布于東南亞、歐洲、美洲和中國等地[1]。

榆黃蘑子實(shí)體金黃色,色澤鮮艷,其營養(yǎng)豐富,味道鮮美,并且榆黃蘑富含多種有效成分,是一種具有藥用功能的名貴珍稀食用菌。經(jīng)常食用能補(bǔ)充賴氨酸不足,降低膽固醇,也可治療腎虛陽萎和痢疾等病患[2]。其所含的多糖作為一種宿主免疫增強(qiáng)劑,具有抗腫瘤 、抗病毒、抗自由基 、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用。本次實(shí)驗(yàn)利用環(huán)磷酰胺致肝損傷動物模型初步探討榆黃蘑保肝作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 小白鼠,由吉林大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物科提供,體重22-25 g,雌雄各半。

1.2 藥品及主要試劑 榆黃蘑,市售長白山區(qū)采集的野生榆黃蘑子實(shí)體,精縮干燥品,注射用環(huán)磷酰胺由江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn),ALT、AST試劑盒購置北京北化康泰臨床試劑有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 普瑞系列可調(diào)移液器;22PC可見分光光度計;BS224電子天平。

1.4 實(shí)驗(yàn)樣品的制備 將干燥的榆黃蘑子實(shí)體粉碎機(jī)粉碎,按料水比1∶15加入蒸餾水,100℃恒溫水浴提取1 h,重復(fù)2次,過濾、合并提取液,濃縮至約500 ml,加乙醇至80%,沉淀12 h以上。倒出乙醇溶液,沉淀再加水溶解,過濾,濃縮至約200 ml,再加乙醇至80%,沉淀12 h以上。合并80%乙醇溶液,沉淀部分濃縮成膏狀備用。

1.5 動物實(shí)驗(yàn)及指標(biāo)測定 取昆明種小鼠80只,隨機(jī)分成空白對照組、模型組、沉淀部分大、中 、小劑量組、上清液(80%乙醇提取物)大、中、小劑量組。沉淀部分大、中、小劑量組分別灌胃0.8 g/kg/d、0.4 g/kg/d和0.2 g/kg/d提取的榆黃蘑沉淀部分水溶液0.2 ml/10 g體重;上清液大、中、小劑量組分別灌胃1.86 g/kg/d、0.8 g/kg/d和0.4 g/kg/d榆黃蘑的80%乙醇提取物0.2 ml/10 g體重,空白對照組和模型組分別給予同體積純凈水。早晚各一次,連續(xù)12 d,期間第3 d和第10 d腹腔注射環(huán)磷酰胺85 mg/kg,空白對照組腹腔注射氯化鈉注射液0.2 ml/10 g體重。第13 d將小鼠摘除眼球取血,3 000 r/min離心15 min,取血清,按試劑盒操作方法,測定血清中ALT和AST活性,采用硫代巴比妥酸法測血清中MDA含量[4]。

2 結(jié)果

2.1 榆黃蘑提取物對小鼠血清中ALT活性的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示,腹腔注射環(huán)磷酰胺后,模型組與對照組比較ALT明顯升高,有顯著性差異(P＜0.05),說明造模成功。沉淀部分大、中劑量組ALT活性與模型組比較明顯降低,有顯著性差異(P＜0.05)。其它組與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。

2.2 榆黃蘑提取物對小鼠血清中AST活性的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示,腹腔注射環(huán)磷酰胺后,模型組與對照組比較AST明顯升高,有非常顯著性差異(P＜0.01)說明造模成功。沉淀部分大、中劑量組和上清液小劑量組與模型組比較明顯降低,有顯著性差異。其它組與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。

2.3 榆黃蘑提取物對小鼠血清中MDA含量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示,腹腔注射環(huán)磷酰胺后,模型組與對照組比較MDA明顯升高,有顯著性差異(P＜0.05)。沉淀部分中劑量組和上清液小劑量組與模型組比較明顯降低,有顯著性差異(P＜0.05)。其它組與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。

表1 榆黃蘑提取物對小鼠ALT、AST、MDA活性的影響

3 討論

環(huán)磷酰胺(CY)致肝毒性的機(jī)理為:CY進(jìn)入體內(nèi)經(jīng)肝臟P450氧化裂環(huán),生成有活性的中間代謝產(chǎn)物,與DNA等生物大分子發(fā)生共價結(jié)合,因此肝臟是CY的代謝活化器官也是毒作用靶器官。動物實(shí)驗(yàn)證明CY致小鼠肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化增強(qiáng),肝組織中丙二醛(MDA)含量升高,谷胱甘肽耗竭,微粒體細(xì)胞色素P450下降。本實(shí)驗(yàn)表明,給小鼠腹腔注射CY 85 mg/kg可致小鼠血MDA含量升高,說明動物模型成立。給予榆黃蘑提取物沉淀部分中劑量組和上清液小劑量組與模型組比較明顯降低,說明榆黃蘑沉淀物和上清液對CY致肝損傷小鼠有一定的拮抗作用。

臨床也觀察到CY可引起部分患者肝功能損害,血清轉(zhuǎn)氨酶升高,并出現(xiàn)血清ALT或AST活性升高[5]。ALT主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi),當(dāng)肝細(xì)胞損傷時,細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶能就入血中,引起血ALT升高。AST也存在于肝細(xì)胞內(nèi),并分布于線粒體中,當(dāng)肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重時,線粒體內(nèi)AST釋放入血,使血清中AST升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,給小鼠腹腔注射CY 85 mg/kg可致小鼠血清ALT、AST升高,榆黃蘑沉淀大劑量和中劑量組可以降低CY致肝損傷小鼠血清中ALT和AST的活性,上清液小劑量組對降低AST活性也有顯著效果。說明榆黃蘑沉淀和上清液對CY致肝損傷小鼠有一定的拮抗作用。提示,榆黃蘑可作為臨床減少CY毒副作用的補(bǔ)助藥品或保健食品進(jìn)行開發(fā)利用。

[1]圖力古爾,李 玉.我國側(cè)耳屬真菌的種類資源及其生態(tài)地理分布[J].中國食用菌,2001,20(5):8.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院 .中藥大辭典[M].上海科學(xué)技術(shù)出版社,1986:24-38.

[3]陳 湘.黃蘑多糖提取及除蛋白方法的實(shí)驗(yàn)研究[J].平頂山工學(xué)院學(xué)報,2007,16(2):1671.

[4]楊 李,唐 瑛,左 娟,等.硫代巴比妥酸法測定血清脂質(zhì)過氧化物方法的改進(jìn)[J].華南國防醫(yī)學(xué)雜志,2004,18(1).

[5]Ma B,Yeo W,Hui P,et al.Acute toxicity of adjuvant doxorubicin and cyclophosphami for early breast cancera retrospective review of Chinese patients and comparison with an iistoric Western series[J].Radiother Oncol,2002,62(2):185.

Discussion on extract of Pleurotus citrinopileatus in liver-protective effect

HE Ying1,WAN De-yun2,ZHANG Yu-xing3.(1.P.E.School of Jilin University,Changchun130026,China;2.Appilied Techonology Institute of Jilin University;3.Chinese Medicine Institute)

ObjectiveTo study the liver-protection effect of extracts of Pleurotus citrinopileatus,provide the experimental foundation for the development Pleurotus citrinopileatus.MethodsPleurotus citrinopileatuswas perfused stomache to the miceswith liver injury models induced by intraperitoneal injection of Cyclophosphamide.The activities of alanine transaminase(ALT),aspartate transaminase(AST)and the content malondialdehyde(MDA)in serum were determined.ResultsLarge dosage(0.8 g/kg/d)of the mushroom precipitation of Pleurotus citrinopileatus and middle dosage(0.4 g/kg/d)to reduce the cyclophosphamide group of liver injury in mice serum ALT and AST in a significant effect;Supernatant small dosage(0.4 g/kg/d)group in the lower AST also a significant effect;in the middle dosage of precipitation part and small dosage group of supernate in the MDA have obviously reduced role.ConclusionThe precipitation part and the supernate of Pleurotus citrinopileatus have protecting effects for liver.

Pleurotus citrinopileatus;extract;liver-protective effect;Cyclophosphamide;Cicer;Protect

R961

A

1007-4287(2010)09-1368-02

2009-06-30)