陳 晶,高西蒙,王慶國(guó),孫宏宇

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱 150040)

強(qiáng)心膠囊由附子(炮)、黃芪等十味藥材組成,用于治療輕、中度慢性充血性心力衰竭的復(fù)方制劑,其中附子(炮)為君藥,經(jīng)預(yù)試驗(yàn)重現(xiàn)性不強(qiáng),因此選擇了本處方中的臣藥黃芪進(jìn)行質(zhì)量比測(cè)定,對(duì)制劑進(jìn)行質(zhì)量控制[1].

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 600E高效液相色譜儀 ;奧特 2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器;Empower色譜工作站;梅特勒 AE-240電子分析天平.

1.2 試藥

乙腈(色譜純);氮?dú)?高純氮);重蒸餾水;黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào) 110781-200412中國(guó)藥品生物制品檢定所);強(qiáng)心膠囊(050501,050502,050503自制)其余試劑為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

VP-ODS(4.6 mm×150 mm.5 μm),柱溫35℃,流動(dòng)相為乙腈 -水(34∶66),流速為 1.0 mL/min進(jìn)樣量為 20μL.蒸發(fā)光散射器漂移管溫度 105℃,氮?dú)饬魉?2.5 L/min[2-3].

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1mL含 0.65mg的溶液,即得.

2.3 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物[4],混勻,稱取5.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇 40mL,超聲提取 3次,每次 30m in,濾過,合并濾液,蒸干,殘?jiān)铀?10m L使溶解,飽和正丁醇溶液萃取4次(30、30、20、20mL),合并正丁醇溶液,用氨試液提取 2次(每次 30 mL),棄去氨層,再用正丁醇飽和水洗滌 2次(每次 20m L),將正丁醇溶液蒸干,殘?jiān)蛹状? mL使溶解于 5mL量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜濾過,棄去初濾液,收集續(xù)濾液,即得.

2.4 線性關(guān)系考察

取上述黃芪甲苷對(duì)照品溶液,分別吸取 4、8、12、16、20μL,分別進(jìn)樣,按色譜條件測(cè)定峰面積,以進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)(X),峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)(Y),回歸方程為 Y=1.672 2X+4.590 4,r=0.999 5,表明黃芪甲苷在 2.60～13.0μg之間成良好的線性關(guān)系.

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液 10μL重復(fù)進(jìn)樣 5次,按色譜條件測(cè)定黃芪甲苷積分值,RSD=1.17%.

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述制備好的供試品溶液,精密吸取20μL,分別在 0,2,4,6,8,10,12 h進(jìn)樣測(cè)定,黃芪甲苷平均峰面積積分值為 493 878.2,RSD=2.28%,表明樣品溶液在 12 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(050501)5份,按供試品溶液方法制備成樣品溶液,測(cè)定樣品質(zhì)量比,結(jié)果樣品質(zhì)量比平均結(jié)果為 0.145mg/粒,RSD=1.38%.

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知質(zhì)量比的樣品 2.5 g,5份,分別加入已配好的對(duì)照品溶液(0.111 6 mg/m L)1mL,按照供試品溶液制備的方法制成樣品溶液,依法測(cè)定計(jì)算回收率.結(jié)果見表1.

表1 加樣回收率試驗(yàn)

2.9 陰性空白溶液

按制備工藝制成不含黃芪的強(qiáng)心膠囊,按供試品溶液方法制成陰性空白溶液,吸取 20μL注入液相色譜中,結(jié)果表明空白溶液在黃芪甲苷出峰處無峰干擾.

2.10 樣品測(cè)定

取 3批樣品(050501,050502,050503)按供試品溶液制備方法制成供試品溶液,精密吸取對(duì)照品溶液 10μL、20μL、樣品溶液 20μL,注入色譜儀中,以外標(biāo)兩點(diǎn)對(duì)數(shù)法計(jì)算樣品質(zhì)量比,結(jié)果見表2.

表2 3批樣品的質(zhì)量比

3 結(jié) 語

樣品制備過程中,曾考察過索式回流提取和超聲提取 2種方法,經(jīng)比較兩者質(zhì)量比無明顯差異(超聲提取 530 428;索式回流 524 322),超聲具有提取時(shí)間短,方便,不用加熱等優(yōu)點(diǎn),因此在制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)選擇了超聲提取.

經(jīng)預(yù)試驗(yàn)考察,上大孔樹脂和不上大孔樹脂兩種處理方法中,上大孔樹脂的樣品色譜峰數(shù)目較少,但質(zhì)量比比不上大孔樹脂明顯減少,因此為減少樣品在質(zhì)量比測(cè)定結(jié)果中的損失,沒有選擇大孔樹脂處理.

通過參考文獻(xiàn)及預(yù)試驗(yàn),最后確定流動(dòng)相乙腈-水 (34∶66),柱溫 35 ℃,流速為 1.0 mL/min,蒸發(fā)光散射器漂移管溫度 105℃,氮?dú)饬魉贋?.5 L/min.

[1] 李小安.HPLC-ELSD法測(cè)定暖胃舒樂膠囊中黃芪甲苷的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2007,27(2):67.

[2] 吳巧風(fēng),范 英.HPLC法測(cè)定補(bǔ)血膠囊中黃芪甲苷的含量[J].中成藥,2003,34(5):425.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005,212.

[4] 張智圓,沈志濱,季宇彬.HPLC同時(shí)測(cè)定制草烏中三種生物堿質(zhì)量比[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2010,26(1):1-3,8.