黃鳳樓,刁孟元,俞云峰,張 斌

腫瘤的多藥耐藥(multidrug resistance,Mdr)一直是腫瘤治療中最棘手的問題之一。其與一種名叫 P-糖蛋白(P-glycop rotein,P-gp)的蛋白質(zhì)密切相關(guān),P-gp共含有 1280個(gè)氨基酸組成,相對(duì)分子質(zhì)量為 170,所以又稱為 P170,是 ABC(ATP-binding cassette)家庭成員之一,能依賴 ATP將其底物泵出細(xì)胞外,對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用[1]。表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面的 P-gp可將多種抗腫瘤藥物泵出細(xì)胞外,是腫瘤細(xì)胞同時(shí)對(duì)多種抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性的原因之一,因此將編碼 P-gp的基因命名為 Mdr基因,即多藥耐藥基因。在人類,編碼P-gp的基因是 Mdr1基因,它位于第 7號(hào)染色體,約 200 kb[1]。P-gp不僅表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面,也表達(dá)于正常組織,如肝臟、胃腸道、腎臟以及血腦屏障等細(xì)胞表面,執(zhí)行不同的生理功能。近年的研究發(fā)現(xiàn),Mdr1基因的多態(tài)性可以直接影響P-gp的表達(dá),除抗腫瘤藥物外,還影響多種藥物的代謝動(dòng)力學(xué)。Mdr1基因的多態(tài)性以及 P-gp與多種疾病的發(fā)病機(jī)制存在聯(lián)系,有較重要的臨床意義。本文擬就 Mdr1基因的C3435T多態(tài)性的臨床意義做一簡(jiǎn)要綜述。

1 Md r1基因多態(tài)性概要

首先對(duì) Md r1基因多態(tài)性及其意義進(jìn)行全面研究的是德國(guó)學(xué)者 Hoffmeyer等,他們檢測(cè)了 188名患者 Mdr1基因的多態(tài)性,發(fā)現(xiàn)了 15個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位點(diǎn),并發(fā)現(xiàn)位于第 26個(gè)外顯子的 C3435T能顯著影響十二指腸P-gp的表達(dá),十二指腸 P-gp的表達(dá)水平在 3種基因型的個(gè)體中從高至低依次為 CC＞TC＞TT。且十二指腸 P-gp表達(dá)水平與地高辛在胃腸道的吸收密切相關(guān),TT基因型的個(gè)體口服地高辛之后往往有較高的生物利用度[2]。到目前為止,科學(xué)家總共在 Mdr1基因的 27個(gè) SNP位點(diǎn)上發(fā)現(xiàn)了 28個(gè)突變[3],其中以 C3435T的研究倍受矚目。但是C3435T影響P-gp表達(dá)的確切機(jī)制還不太清楚,因?yàn)镃 3435T本身是一個(gè)無(wú)意義的突變,并不影響P-gp的氨基酸序列[1]。

針對(duì) Mdr1基因多態(tài)性,特別是隨著 C3435T在人群的分布頻率的調(diào)查在世界各地的廣泛開展,發(fā)現(xiàn)各個(gè)地區(qū)、各個(gè)民族 Md r1基因 C3435T的分布頻率是不同的[1]。CC基因型在熱帶地區(qū)如肯尼亞、蘇丹的分布頻率較高,而在其他地區(qū)分布較低。Schaeffeler等[4]認(rèn)為:這可能是由于該地區(qū)感染性疾病較為流行,CC基因型的患者P-gp表達(dá)水平較高,對(duì)人體抵抗病原體的侵害是有利的。

2 Md r1基因多態(tài)性的臨床意義

2.1 Mdr1基因多態(tài)性與藥物代謝動(dòng)力學(xué) 很多藥物都是P-gp的作用底物,這些藥物在腸道的吸收、腎臟的排泄以及各組織間的分配都與 P-gp密切相關(guān)。小腸 P-pg表達(dá)于上皮細(xì)胞刷狀緣,直接影響藥物從消化道進(jìn)入血液,是影響藥物代謝動(dòng)力學(xué)的因素之一。目前這方面研究較多的藥物是環(huán)孢素和FK 506,這兩種藥都是器官移植患者長(zhǎng)期服用的免疫抑制劑。但兩者使用范圍都相對(duì)狹窄,血藥濃度過高,易造成肝腎損害,過低又達(dá)不到免疫抑制的效果?；贖offmeyer的研究結(jié)果,從單個(gè)SNP位點(diǎn)的角度而言,C3435T突變中,CC基因型的個(gè)體腸道 P-gp表達(dá)較高,不利于藥物的吸收,所以藥物生物利用度相對(duì)較低,TT基因型個(gè)體則與之相反。部分研究也證明了該觀點(diǎn)[5-7],但是目前這方面還存在很大爭(zhēng)論。也有研究發(fā)現(xiàn),C3435T與以上兩種藥物代謝的動(dòng)力學(xué)無(wú)關(guān)[8-11]。這可能歸結(jié)于以下原因:(1)藥物代謝為多因素作用的結(jié)果,腸道 P-gp對(duì)口服吸收的影響只是其中的一個(gè)環(huán)節(jié),在調(diào)查過程中很難控制其他因素的影響。(2)很多調(diào)查研究都是集中在 Mdr1基因的單一 SNP位點(diǎn)上,如廣泛研究的 C3435T、G2677T/A,而將多個(gè) SNP位點(diǎn)作為一個(gè)連鎖單元進(jìn)行研究的報(bào)道相對(duì)較少[12]。最近的一項(xiàng)研究對(duì)Md r1基因的 3個(gè) SNP位點(diǎn) C1236T、G 2677T/A和 C3435T組成的連鎖單元進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)器官移植患者口服 FK506的濃度與其組成的連鎖單元有關(guān)[13],但是這遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能闡明Mdr1基因多態(tài)性與藥物代謝動(dòng)力學(xué)的關(guān)系及其機(jī)制,因?yàn)镸d r1基因的各 SNP位點(diǎn)之間以及其他基因的 SNP位點(diǎn)之間又存在廣泛而復(fù)雜的連鎖[14]。(3)很多研究都是直接觀察不同基因型個(gè)體 P-gp表達(dá)的強(qiáng)弱,而缺乏在 RNA水平上就其轉(zhuǎn)錄、剪切、翻譯等進(jìn)行的研究,對(duì) Mdr1基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯分子機(jī)制缺乏深入的了解[15]。

2.2 Mdr1基因多態(tài)性與潰瘍性結(jié)腸炎 潰瘍性結(jié)腸炎確切的發(fā)病機(jī)制目前還不清楚,有研究顯示 Mdr1基因與其發(fā)病機(jī)制有一定聯(lián)系。其理論基礎(chǔ)就是 Hoffmeyer的研究結(jié)果,即 C3435T為 CC的個(gè)體,胃腸道 P-gp表達(dá)水平較高,有利于腸道抵御致病因子特別是細(xì)菌的侵襲,發(fā)生腸道炎癥性疾病如潰瘍性結(jié)腸炎的概率相對(duì)較小。該理論也得到了一定的實(shí)驗(yàn)支持,Panwala等[16]發(fā)現(xiàn),敲除 Md r1基因的小鼠,由于腸道 P-gp表達(dá)缺陷,失去了抵御致病因子侵襲的重要屏障,會(huì)出現(xiàn)和潰瘍性結(jié)腸炎癥狀相似的腸道炎癥,且口服抗生素可以緩解此種炎癥的發(fā)展。臨床調(diào)查也發(fā)現(xiàn),同一民族,潰瘍性結(jié)腸炎患者TT的分布頻率較健康人群高[17-18]。但令人疑惑的是,也有臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)C3435T與潰湯性結(jié)腸炎的發(fā)病存在密切聯(lián)系[19-22]。此外,還有調(diào)查發(fā)現(xiàn)G 2677T/A與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病也存在一定聯(lián)系[23]。

2.3 Mdr1基因多態(tài)性與Parkinson病 有觀點(diǎn)認(rèn)為,Parkinson病的發(fā)病機(jī)制可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)長(zhǎng)期受到有害物質(zhì)的侵襲有關(guān)。P-gp在血腦屏障廣泛表達(dá),其生理作用主要是阻止有害物質(zhì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成的損害,基于這一生理功能,很容易將Parkinson病的發(fā)病機(jī)制與Mdr1基因以及 P-gp聯(lián)系起來(lái),即血腦屏障P-gp表達(dá)較高的個(gè)體,能在一定程度上抵御外界毒性因素對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒害作用,降低Parkinson病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。調(diào)查顯示,長(zhǎng)期暴露在殺蟲劑中,且C3435T為 TT或 CT的群體,Parkinson病的發(fā)病率明顯較CC基因型高[24]。也有調(diào)查發(fā)現(xiàn),Parkinson病發(fā)病年齡較早的群體與發(fā)病年齡較晚的群體相比,TT的分布頻率較高,也說明 TT基因型個(gè)體血腦屏障P-gp表達(dá)水平較低,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)能力較弱,因而Parkinson病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)高[25]。

此外,還有研究證實(shí),位于腦組織神經(jīng)元表面的 P-gp可以將 β-淀粉樣泵出細(xì)胞外,提示 Mdr1基因以及 P-gp可能與老年性癡呆的發(fā)病機(jī)制有關(guān)[26]。

2.4 Md r1基因多態(tài)性與 HIV感染 Mdr1基因多態(tài)性與HIV感染的研究主要集中在HIV的感染風(fēng)險(xiǎn)與治療兩方面。由于多種抗HIV藥物都是P-gp的作用底物,Mdr1基因多態(tài)性以及 P-gp表達(dá)的強(qiáng)弱都與抗H IV藥物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)有關(guān),特別是 P-gp在 CD+4T淋巴細(xì)胞中仍然表達(dá),在一定程度上能阻止藥物進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮抗逆轉(zhuǎn)錄作用,更容易導(dǎo)致 HIV治療失敗。白細(xì)胞高度表達(dá) P-gp的H IV感染者,更容易對(duì)抗HIV藥物產(chǎn)生耐藥性[27]。研究表明,TT基因型的HIV感染者白細(xì)胞表面P-gp相對(duì)較少[28]。但是目前這一方面的研究同樣存在爭(zhēng)議,也有研究發(fā)現(xiàn) C3435T與 HIV抗逆轉(zhuǎn)錄治療效果以及疾病的轉(zhuǎn)歸無(wú)關(guān)[29,30],目前還無(wú)法解釋這些差異。

同時(shí)在H IV的感染風(fēng)險(xiǎn)上,P-gp及 Mdr1基因仍然起著一定的作用。這可以概括為:P-gp高度表達(dá)的個(gè)體對(duì)HIV有一定的抵抗力,在同樣的暴露風(fēng)險(xiǎn)下,感染H IV的概率相對(duì)較小,但是一旦被感染,抗H IV藥物很難進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用,治療也相對(duì)棘手[31]。

3 展望

近年來(lái),對(duì) Mdr1基因 C3435T及其意義的研究雖然取得了不少突破,但是總的看來(lái)還存在很多急待解決的問題。比如,對(duì)單個(gè)SNP位點(diǎn)的研究較多,而對(duì)多個(gè) SNP位點(diǎn)組成的連鎖單元研究較少;以目前的研究水平,還無(wú)法完全解釋各個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間研究結(jié)果的矛盾。同時(shí),對(duì) Mdr1基因轉(zhuǎn)錄與翻譯的機(jī)制還缺乏認(rèn)識(shí),對(duì)C 3435T突變效應(yīng)的分子機(jī)制也缺乏深入的研究。最近的一項(xiàng)研究顯示,雖然 C3435T屬于無(wú)義突變,該突變也不引起P-gp氨基酸序列的改變,但是可以影響其結(jié)構(gòu),進(jìn)而影響其活性,這為進(jìn)一步深入了解Md r1基因轉(zhuǎn)錄與翻譯的機(jī)制提供了思路[32]。相信隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,這些問題都將得到解決,對(duì) Mdr1基因多態(tài)性的相關(guān)研究也將更加深入。

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(本文編輯:彭潤(rùn)松)