李卓范

(青島市浮新醫(yī)院,山東 青島 266000)

血液復(fù)檢規(guī)則在血細(xì)胞計數(shù)和分類中的應(yīng)用

李卓范

(青島市浮新醫(yī)院,山東 青島 266000)

目的觀察復(fù)檢的符合率,以驗證復(fù)檢規(guī)則的適用性。方法對所檢測的3600例血液標(biāo)本中按照復(fù)檢規(guī)則需要復(fù)檢的標(biāo)本采用不同的措施進行復(fù)檢,計算復(fù)檢的符合率。同時對200例陰性標(biāo)本涂片鏡檢,計算其假陰性率。結(jié)果觀察一般性狀的符合率為100%,需重復(fù)檢測的標(biāo)本符合率為90%,結(jié)果數(shù)量異常的標(biāo)本符合率為85%,有異常細(xì)胞提示的標(biāo)本符合率為75%,需鏡檢分類的標(biāo)本77%。復(fù)檢總符合率為81.7%,假陽性率為18.3%。假陰性率為3.5%。結(jié)論該科室制定的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)是可行的。

血細(xì)胞計數(shù);分類;復(fù)檢

全自動血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用使臨床實驗室過分依賴現(xiàn)代化儀器而忽視了血細(xì)胞形態(tài)的鏡檢。有的實驗室雖已開展血細(xì)胞檢查的復(fù)檢工作,但目前國內(nèi)還沒有一個可參照的鏡檢標(biāo)本的篩選標(biāo)準(zhǔn)。因此每個實驗室應(yīng)建立適合本科室的血液檢查復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)對我科制定的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用報道如下。

1 臨床資料

1.1 標(biāo)本來源 隨機選取兩周期間的標(biāo)本,標(biāo)本均來自門診和病房患者(包括部分血液病患者)。標(biāo)本為乙二胺四乙酸二鉀(EDTAK2)抗凝全血,共3600例。

1.2 儀器與試劑 全部標(biāo)本用Sysmex HST302N流水線(XE2100自動血液分析儀2臺,SP1000推片鏡檢機1臺)檢測,并根據(jù)我科分類復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)進行復(fù)檢。需要推片染色鏡檢的標(biāo)本由SP1000推片機推片,應(yīng)用顯微鏡進行鏡檢,試劑為Sysmex公司提供的相關(guān)配套試劑。

1.3 方法 所有標(biāo)本均按標(biāo)準(zhǔn)操作流程進行全血細(xì)胞分析檢測(共進行全血細(xì)胞分析3600例),按照我室制定的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)進行復(fù)檢。需鏡檢的標(biāo)本在SP-1000i上推片并由本科工作超過10年有中級以上技術(shù)職稱的技術(shù)人員進行鏡檢和復(fù)查,對復(fù)檢結(jié)果進行分析總結(jié)。陽性標(biāo)準(zhǔn)[1]。XE-2100自動血細(xì)胞計數(shù)與白細(xì)胞分類涂片復(fù)檢規(guī)則:WBC、RBC、Hb、PLT超過檢測線性:WBC＞100×109/L、RBC＞8.0×1012/L、Hb＞250 g/L、PLT ＞1000×109/L,稀釋標(biāo)本后重新測定。WBC、RBC、Hb、PLT無結(jié)果或結(jié)果不全者,檢查標(biāo)本是否有凝塊,重測標(biāo)本。WBC＜3.0×109/L或＞20.0×109/L,涂片鏡檢。PLT＜80×109/L或＞1000×109/L,涂片鏡檢。Hb＜70 g/L,或＞200 g/L,確認(rèn)標(biāo)本是否符合要求,重標(biāo)本,涂片鏡檢。MCV＜75 fl,或＞105 fl(成人),涂片鏡檢。MCHC＞380 g/L檢查標(biāo)是否有脂血、溶血、RBC聚集,涂片檢查有無球形紅細(xì)胞。MCHC＜300 g/L,且MCV＞80 fl可能因血液輸液污染或其他標(biāo)本原因。RDW首次結(jié)果＞22%,涂片鏡檢。DC無結(jié)果或結(jié)果不全涂片鏡檢。Neu#＜1.0×109/L或＞20.0×109/L,涂片鏡檢。Lym#＞5.0×109/L,涂片鏡檢。Mono＞1.5×109/L,涂片鏡檢。Eos#＞2.0×109/L,涂片鏡檢。Baso#＞0.5×109/L,涂片鏡檢。WBC IP Message白細(xì)胞異常散點圖,涂片鏡檢。WBC IP Message未成熟粒細(xì)胞,涂片鏡檢。WBC IP Message核左移,涂片鏡檢。WBC IP Message異形淋巴細(xì)胞、異常淋巴細(xì)胞或原始細(xì)胞,涂片鏡檢。WBC IP Message原始細(xì)胞,涂片鏡檢。WBC IP Message有核紅細(xì)胞,涂片鏡檢。CBC+DC新生兒標(biāo)本,涂片鏡檢。CBC+DC血液病標(biāo)本,涂片鏡檢。采取不同復(fù)檢措施的標(biāo)本數(shù)量及比例(n=3600):不需復(fù)查的標(biāo)本2500例,占69.4%;需觀察一般性狀的標(biāo)本200例,占5.5%;需評估計數(shù)結(jié)果、需觀察細(xì)胞形態(tài)的標(biāo)本576例,占16.0%;需鏡檢分類的標(biāo)本324例,占9.0%。

總結(jié)以上復(fù)檢措施,對于所檢測的標(biāo)本,一部分為“正?！苯Y(jié)果,不需復(fù)檢,經(jīng)審核可以發(fā)放。需要復(fù)核的結(jié)果有以下4種:1)需要觀察標(biāo)本的性狀,根據(jù)標(biāo)本的量和稀薄程度評估結(jié)果的準(zhǔn)確性。2)儀器復(fù)檢。3)需顯微鏡下觀察細(xì)胞的數(shù)量來驗證檢驗結(jié)果可靠程度,如可根據(jù)WBC、PLT與紅細(xì)胞的比例估計二者的數(shù)量,在血涂片白細(xì)胞分類區(qū)域油鏡下1個血小板相當(dāng)于10×109/L個血小板,在驗證細(xì)胞數(shù)量的同時注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常。4)觀察細(xì)胞(WBC、RBC和PLT)形態(tài)并進行分類計數(shù),觀察出現(xiàn)的寄生蟲等。

2 結(jié)果

2.1 我們對3600例標(biāo)本結(jié)果按照復(fù)檢規(guī)則進行審核,結(jié)果顯示陰性不需復(fù)檢的標(biāo)本有2500例,占69.4%。例如有輕微貧血或紅細(xì)胞參數(shù)增高、但未觸動復(fù)檢規(guī)則的標(biāo)本,需觀察標(biāo)本的一般性狀如標(biāo)本的稀薄程度和顏色,以排除標(biāo)本量不足的可能性。這類標(biāo)本有200例,占5.5%。需鏡下驗證細(xì)胞數(shù)量的標(biāo)本及需觀察細(xì)胞形態(tài)的標(biāo)本共有576例,占16%。需鏡檢分類的標(biāo)本有324例,占9%。

2.2 不同的復(fù)檢措施結(jié)果與儀器結(jié)果的符合率 需觀察標(biāo)本狀態(tài)的標(biāo)本的符合,是指RBC、HGB數(shù)量減低的標(biāo)本或標(biāo)本凝固等;需儀器復(fù)檢的標(biāo)本符合指PLT結(jié)果低于60×109/L,HGB低于70 g/L等;需顯微鏡觀察評估細(xì)胞數(shù)量或形態(tài)的標(biāo)本符合是指細(xì)胞數(shù)量增高或減低,PLT聚集或衛(wèi)星現(xiàn)象,以及紅細(xì)胞出現(xiàn)各種異常形態(tài),尤其是紅細(xì)胞直方圖出現(xiàn)雙峰時紅細(xì)胞形態(tài);需鏡檢分類計數(shù)的標(biāo)本符合是指發(fā)現(xiàn)異形淋巴細(xì)胞、NRBC、某種WBC分類百分比異常以及WBC不分類的情況。

顯微鏡評估細(xì)胞及鏡檢分類計數(shù)結(jié)果的符合率:需觀察標(biāo)本性狀的標(biāo)本符合率100%;需重復(fù)檢測的標(biāo)本符合率90%;結(jié)果數(shù)量異常的標(biāo)本及有異常細(xì)胞提示的標(biāo)本符合率80%;需鏡檢分類的標(biāo)本符合率77%。

2.3 200例儀器顯示陰性標(biāo)本經(jīng)涂片鏡檢,假陰性率為3.5%。主要是有些標(biāo)本出現(xiàn)血小板聚集或巨大血小板而儀器無提示,血涂片中出現(xiàn)少量的幼稚粒細(xì)胞而儀器把它們劃為單核細(xì)胞。

3 討論

我們在XE-2100血細(xì)胞分析儀復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組制定的“Sysmex XE-2100自動血細(xì)胞分析儀和白細(xì)胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討”[1]所報導(dǎo)的復(fù)檢規(guī)則基礎(chǔ)上,結(jié)合實驗室的實際情況制定了自己的篩選規(guī)則,對門診和病房標(biāo)本進行篩檢。

我們對連續(xù)兩周所檢測的3600例標(biāo)本結(jié)果按照復(fù)檢規(guī)則進行審核,結(jié)果顯示陰性不需復(fù)檢的標(biāo)本有2500例,占69.4%。需要通過不同的方式進行復(fù)核的有1100例,其中需要觀察標(biāo)本性狀的符合率為100%;重復(fù)檢測的標(biāo)本重測后符合率為90%;需鏡下驗證細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞形態(tài)的標(biāo)本符合率為80%;需鏡下分類的標(biāo)本,符合率較低,為77%。由于分析前質(zhì)量控制做得比較好,在檢測中未發(fā)現(xiàn)有標(biāo)本不合格的情況。對出現(xiàn)冷凝集的標(biāo)本,按照本科有關(guān)操作手冊進行處理并檢測。影響標(biāo)本重測符合率的因素為小紅細(xì)胞或大血小板大量出現(xiàn),影響了血小板的計數(shù),而Sysmex 2100自動血液分析儀提供了光學(xué)法通道檢測PLT數(shù)量,通過熒光染料染色,利用PLT和RBC不同的熒光強度對其進行有效的區(qū)分,對血小板進行準(zhǔn)確計數(shù)。

儀器的提示來自結(jié)果異常數(shù)值、血細(xì)胞異常直方圖和異常散點圖、儀器的IP信息。觸及復(fù)檢規(guī)則的結(jié)果應(yīng)進行復(fù)檢,否則會造成異常標(biāo)本漏報。儀器法檢驗結(jié)果無法將患者外周血形態(tài)異常的特征表達出來,僅將儀器的計數(shù)、分類結(jié)果報告臨床,漏掉了重要的診斷信息。根據(jù)檢驗結(jié)果數(shù)值的提示以及儀器的IP信息、直方圖和散點圖提供的信息,采取不同的措施對標(biāo)本進行復(fù)檢,使我們的檢測結(jié)果能真正反映標(biāo)本的實際情況,為臨床提供有價值的診斷信息。結(jié)合實驗使用的儀器以及工作人員的素質(zhì)及人員配置制定出適合自己實驗室的復(fù)檢規(guī)則尤為重要。如果制定的規(guī)則過于嚴(yán)格,務(wù)必會增加復(fù)片率,降低工作效率;如果復(fù)檢規(guī)則制定的太寬,就有可能造成一些陽性標(biāo)本漏檢、漏報的現(xiàn)象。得益于儀器精密度的提高,目前全自動血液分析儀在計數(shù)方面已經(jīng)相當(dāng)準(zhǔn)確,對正常標(biāo)本W(wǎng)BC分類計數(shù)的符合率接近 100%。因而在WBC數(shù)量太多或太少的情況下進行推片鏡檢,可先瀏覽全片,如未發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞,可僅估計WBC計數(shù)是否準(zhǔn)確,不需要專門進行分類計數(shù),可提高工作效率且不降低準(zhǔn)確性[2-3]。

經(jīng)分析鏡檢(包括計數(shù)驗證、形態(tài)觀察和白細(xì)胞分類)總符合率為78.9%,假陽性率為21.1%。假陽性率的高低與儀器IP信息提示敏感性設(shè)置有關(guān),敏感性過高會提高復(fù)片率,同時也增加了我們的工作量;敏感性設(shè)置過低,會增加假陰性。我們實驗室鏡檢的假陰性率為3.5%。假陰性率在要求范圍內(nèi)[4]。

自動化儀器的應(yīng)用是細(xì)胞學(xué)檢驗的一場革命。不但提高了計數(shù)的精確性、準(zhǔn)確性,易于標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化,且提供了許多有用的形態(tài)學(xué)指標(biāo)。更主要的是,通過高科技“篩選”的手段,可將符合“篩選”的標(biāo)本視為正常,免去鏡檢,而節(jié)省出更多的時間用于有病理意義標(biāo)本的顯微鏡下檢查,提高形態(tài)學(xué)分析的質(zhì)量。每個臨檢科應(yīng)建立適合本科室的篩選標(biāo)準(zhǔn),以提高血細(xì)胞分析的準(zhǔn)確性。

[1] XE-2100血細(xì)胞分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組.自動血細(xì)胞分析和白細(xì)胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(7):752-757.

[2] 孫芾,王厚芳,林宏,等.顯微鏡白細(xì)胞分類標(biāo)準(zhǔn)的制定和應(yīng)用[J].中華臨床醫(yī)學(xué)雜志,2004,5(9):25226.

[3] 朱曉輝,何菊英,朱忠勇.應(yīng)用血液分析儀后復(fù)查血片的內(nèi)容、方法及程序[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2003,26(12):7852787.

[4] 叢玉隆.ISO15189認(rèn)可現(xiàn)場評審引發(fā)的對細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗問題的思考[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2008,31(7):725-728.

R446.11+1;446.11+3

A

1008-4118(2010)01-0022-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2010.01.20

2009-12-02