孫瑜,席孝賢 ,賀新懷

(陜西中醫(yī)學(xué)院,陜西咸陽712046)

千佛菌(Grirola frondosa)是一種名貴的藥食兩用高等真菌類中藥,含有多種活性組分。本研究旨在從D-半乳糖所致衰老模型小鼠出發(fā),探討千佛菌的抗衰老作用,為開發(fā)中藥新制品、延緩衰老及防治老年病提供實驗與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物制備 千佛菌干品浸泡煮沸30 min過濾,重復(fù)2次;將2次所得濾液混合,濃縮制成100%(W/V)濃度;50%濃度生理鹽水稀釋。D-半乳糖注射粉針劑制成5 mg/mL D-半乳糖生理鹽水溶液。

1.2 試劑與儀器 SDH、MDA測定試劑盒,購自南京建成生物工程研究所。723型分光光度計;KDC-40低速離心機。

1.3 動物分組 昆明種小鼠40只,雌雄各半,體重(20±2)g,按體重隨機分為4組：正常對照、衰老模型、千佛菌大(100%濃度)、小劑量組(50%濃度),每組10只,雌雄各半。

1.4 造模及用藥 參照文獻[1]除正常對照組,其余各組小鼠每日腹腔注射D-半乳糖溶液0.4 mL/只,連續(xù)6周。自21 d起,千佛菌大、小劑量組分別灌胃100%和50%濃度藥液0.4 mL/只,每日1次,連續(xù)3周。

1.5 腦組織SDH、MDA活性的測定 末次給藥12 h后,取腦組織按 1∶9比例勻漿,3 000 r/min離心15 min,制成10%的腦組織勻漿液,并參照試劑盒測定腦組織SDH及MDA。

2 實驗結(jié)果

2.1 對小鼠腦SDH活性的影響 見表1。

2.2 對小鼠腦MDA活性的影響 見表2。

表1 實驗各組對小鼠腦SDH活性的影響(±s)

表1 實驗各組對小鼠腦SDH活性的影響(±s)

注：與正常對照組比較,▲▲P＜0.01;與模型組比較,#P＜0.05,##P＜0.01。

組 別 n SDH/(U/mgprot)正 常 對 照 組 10 9.1±1.7模 型 對 照 組 10 5.8±1.2▲▲千佛菌小劑量組 10 7.3±1.9#千佛菌大劑量組 10 8.6±2.1##

表2 實驗各組對小鼠腦MDA活性的影響(±s)

表2 實驗各組對小鼠腦MDA活性的影響(±s)

注：與正常對照組比較,▲▲P＜0.01;與模型組比較,#P＜0.05,##P＜0.01。

組 別 n MDA/(mmol/mg)正 常 對 照 組 10 11.34±2.12模 型 對 照 組 10 16.91±3.19▲▲千佛菌小劑量組 10 15.52±3.17#千佛菌大劑量組 10 12.35±2.74##

3 討論

琥珀酸脫氫酶(SDH)存在于有氧呼吸細胞線粒體內(nèi)膜,不需輔酶,自身有黃素蛋白作為輔基,常用來反映三羧酸循環(huán)情況,是線粒體標(biāo)志酶之一。衰老時線粒體發(fā)生腫脹、變性、空洞化、數(shù)量減少等一系列退行性改變[2],SDH活性的衰退與線粒體損傷同時出現(xiàn)且與線粒體數(shù)目呈正相關(guān)。所以SDH活性可反應(yīng)線粒體能量代謝狀況。丙二醛(MDA)介導(dǎo)自由基損傷,有很強的生物反應(yīng)活性,能攻擊所有的生物大分子,導(dǎo)致結(jié)構(gòu)改變和功能喪失,最終引起細胞功能減退及細胞外環(huán)境發(fā)生與衰老相關(guān)改變,是生物膜磷酯中多不飽和脂肪酸受自由基攻擊的終產(chǎn)物之一。多數(shù)文獻報道,MDA水平在60歲以上老年組顯著升高,而60歲以下人群相對穩(wěn)定[3]。MDA可反映細胞損傷情況及機體衰老程度。

本實驗SDH檢測表明千佛菌可提高衰老模型小鼠SDH活性,同時降低MDA含量,且大、小劑量組間存在一定劑量依賴性,大劑量較小劑量有更顯著的治療效果。證明千佛菌可以提高機體抗氧化衰老能力,維持機體正常生理平衡。

[1]余資江,應(yīng)大君,董世武,等.半乳糖急性致衰老動物模型劑量的探討[J].解剖學(xué)雜志,2005,28(4)：424.

[2]Susan M,Tanhauser,PhilipJ,Laipis.Multiple deletions are perectable in mitochondrial DNA of aqine mice.J.Biol.Chem.,1995,270：24769-24775.

[3]Inal ME.Kanbak G,Sund E.Antioxidant enzyme activities and malondialdehyde levels related to aging[J].Clin Cheim Acta,2001,305：75.