呂 英，劉家福，鄭世民*

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

益生素（Probiotic）又稱微生態(tài)制劑或活菌制劑，是一類活性微生物添加劑。是從動物或自然界分離、鑒定或通過生物工程人工組建的有益微生物，經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、干燥、加工等特殊工藝制成的含有活菌并用于動物的生物制劑或活菌制劑。畜禽應(yīng)用益生素后，能夠改善腸道微生態(tài)環(huán)境，正常情況下，腸道內(nèi)絕大多數(shù)為固有性菌群（如腸桿菌、鏈球菌和乳桿菌等），極少量為其他菌群（如葡萄球菌、嗜血桿菌等）。益生素能在消化道特別是腸道內(nèi)發(fā)育、繁殖并發(fā)揮有益作用，促進(jìn)畜禽生長發(fā)育，提高飼料轉(zhuǎn)化率[1-2]，降低幼畜幼禽死亡率，防止消化道疾病，提高機(jī)體免疫力；作為新型綠色添加劑的益生素，由于其無殘留、無污染以及不產(chǎn)生耐藥性等特點，有其獨特的優(yōu)越之處，因而益生素已成為很有前途的新型飼料添加劑。隨著人們食品安全意識的不斷提高，微生態(tài)制劑以其高效的保健功能、無毒副作用、無殘留、不環(huán)境污染等優(yōu)點成為替代抗生素較為理想的產(chǎn)品[2-3]。

本試驗應(yīng)用酸性非特異性酯酶染色法系統(tǒng)地研究了雛雞飼喂益生素后，其免疫器官細(xì)胞免疫動態(tài)變化，旨在揭示益生素對雛雞免疫器官的細(xì)胞免疫增強(qiáng)效果，為益生素在畜禽飼喂中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

1日齡健康羅曼褐雛雞150只，購自哈爾濱某孵化場。

1.1.2 益生素

益生素Ⅰ：廣州市希普生物飼料有限公司生產(chǎn)，批號為粵飼添字（2001）031002號，主要成分乳酸菌、雙歧桿菌和酵母菌?；罹鷶?shù)＞1010cfu·mL-1，按產(chǎn)品說明使用。

益生素Ⅱ：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院病理教研室研制。主要成分為乳酸菌和雙歧桿菌。活菌數(shù)＞1010cfu·mL-1。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計及動物處理

1日齡羅曼褐商品公雞雛150只，隨機(jī)分為四組：即益生素Ⅰ組（簡稱PⅠ組，50只）、益生素Ⅱ（簡稱PⅡ組，50只）、對照組（簡稱C組，50只）。PⅠ和PⅡ組雛雞于1日齡分別連續(xù)灌服益生素Ⅰ或益生素Ⅱ稀釋液3 d，每天1次，C組同時灌服生理鹽水。三組雛雞嚴(yán)格隔離，分別飼養(yǎng)。

1.2.2 檢測材料采取

PⅠ、PⅡ、C組雛雞于應(yīng)用益生素后1、4、7、10、18 d，每組隨機(jī)抽取相同數(shù)量雛雞心臟采血處死，快速采取免疫器官胸腺和脾臟，并作相應(yīng)處理后低溫保存?zhèn)錂z。

1.2.3 檢測指標(biāo)和方法

免疫器官T細(xì)胞數(shù)量檢測-組織切片及酸性非特異性酯酶染色法（ANAE）用100×10油鏡，每張涂片查200個相應(yīng)器官細(xì)胞，計數(shù)TANAE+淋巴細(xì)胞數(shù)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

用SAS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，分析組間差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 應(yīng)用益生素雛雞胸腺T細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)變化

結(jié)果見表1。

雛雞應(yīng)用益生素后，其胸腺皮質(zhì)和髓質(zhì)T細(xì)胞數(shù)量均不同程度高于對照雛雞，于4～10 d差異顯著或極顯著（P＜0.05或P＜0.01），說明益生素能夠增強(qiáng)胸腺的細(xì)胞免疫，并在飼喂后4～10 d作用明顯。益生素Ⅰ組又不同程度高于益生素Ⅱ組，于7 d差異顯著（P＜0.05）。說明益生素Ⅰ的免疫增強(qiáng)效果強(qiáng)于益生素Ⅱ，益生素Ⅰ是商品益生素，菌種包被較好，菌種相對益生素Ⅱ數(shù)量較多，這可能都是其效果較好的原因。胸腺是雞的中樞免疫器官，從結(jié)果可以看出，雛雞在發(fā)育過程中，胸腺中T細(xì)胞不斷發(fā)育成熟，細(xì)胞免疫逐漸增強(qiáng)，說明雛雞在生長的過程中，免疫系統(tǒng)不斷完善。同時，可看出，益生素能夠促進(jìn)免疫器官胸腺的成熟，能夠增強(qiáng)細(xì)胞免疫。

2.2 應(yīng)用益生素雛雞脾臟T細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)變化結(jié)果見表2。

表1 雛雞應(yīng)用益生素后胸腺T細(xì)胞數(shù)量變化Table 1Change of T cells number in thymus of the probiotics fed chickens（103·m-2）

表2 雛雞應(yīng)用益生素后脾臟T細(xì)胞數(shù)量變化Table 2 Change of T cells number in spleen of probiotics fed chickens

雛雞應(yīng)用益生素后，其脾臟T細(xì)胞數(shù)量均不同程度高于對照雛雞，其中紅髓和動脈周圍鞘較對照雛雞于4～10 d差異顯著或極顯著（P＜0.05或 P＜0.01），淋巴小結(jié)于 7、10 d差異顯著（P＜0.05）；說明益生素能夠增強(qiáng)脾臟的細(xì)胞免疫，并在飼喂后4～10 d作用明顯。同時益生素Ⅰ組又不同程度高于益生素Ⅱ組，紅髓和動脈周圍鞘于7 d差異顯著（P＜0.05），其他未見統(tǒng)計學(xué)差異。說明增強(qiáng)脾臟細(xì)胞免疫的效果，益生素Ⅰ強(qiáng)于益生素Ⅱ。商品益生素可能由于其工藝成熟，所以免疫增強(qiáng)效果強(qiáng)于自制益生素。

3 討論與結(jié)論

胸腺是禽類的中樞免疫器官，是骨髓多能干細(xì)胞繁殖、分化為成熟T細(xì)胞的場所，成熟T細(xì)胞進(jìn)入血液，隨血液循環(huán)轉(zhuǎn)移至脾臟等其他淋巴器官組織；脾臟作為禽類最大的外周免疫器官，對血液中循環(huán)抗原發(fā)揮免疫應(yīng)答，免疫器官功能正常與否和機(jī)體全身免疫狀態(tài)密切相關(guān)。T淋巴細(xì)胞主要承擔(dān)動物有機(jī)體的細(xì)胞免疫，因此，其功能和數(shù)量異常直接影響著細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。

本研究發(fā)現(xiàn)，雛雞應(yīng)用益生素后，無論是中樞免疫器官—胸腺，還是外周免疫器官—脾臟的T細(xì)胞數(shù)量均較相應(yīng)未飼喂益生素的對照雛雞明顯增加，表明益生素可增加免疫器官T細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫水平。益生素Ⅰ組雛雞的T細(xì)胞數(shù)量增加較益生素Ⅱ組雛雞更加明顯，說明益生素Ⅰ的細(xì)胞免疫增強(qiáng)效果強(qiáng)于益生素Ⅱ，這是因為益生素Ⅰ制作工藝精良使其食入后仍有大量活菌存在，體內(nèi)有益菌群多于益生素Ⅱ，大量有益菌能夠增強(qiáng)T細(xì)胞對抗原刺激的反應(yīng)性。Harsharnjit等報道，長期服用益生素可減少胃腸道感染，因其有益菌不僅起到機(jī)械性防御作用，還會刺激機(jī)體產(chǎn)生非特異性免疫應(yīng)答作用[4]。姚淑蘭等發(fā)現(xiàn)，添加EM菌寶和加酶益生素不但均可顯著提高貴妃雞對粗蛋白的利用率，而且可顯著增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，說明免疫水平增強(qiáng)[5]。石寶明等研究了基礎(chǔ)日糧中添加益生素對仔豬生長性能和腸道菌群的影響[6]。結(jié)果表明，益生素能夠促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，增強(qiáng)機(jī)體抵御疾病能力。Leuschner等研究發(fā)現(xiàn)，適當(dāng)劑量及菌種的益生素，可提高動物機(jī)體整體狀態(tài)和免疫水平[7]。Simone報道，乳酸桿菌能誘發(fā)Peyer氏淋巴結(jié)和全身（脾、外周血）的細(xì)胞免疫反應(yīng)[8]。蔡訪勤報道，酸性乳酸桿菌和嗜熱性鏈球菌能促進(jìn)脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞對Con A的增殖反應(yīng)，提高巨噬細(xì)胞的C3b受體活性，增強(qiáng)其抗腫瘤作用[9]。Inooka研究發(fā)現(xiàn)，納豆芽孢桿菌能顯著提高仔雞脾臟T淋巴細(xì)胞比例，增強(qiáng)雞細(xì)胞免疫功能[10]。Karimi等報道，益生素能夠改善動物腸道菌群平衡狀態(tài)，提高機(jī)體免疫應(yīng)答功能[11]?，F(xiàn)已證實益生素能夠產(chǎn)生對機(jī)體有益的物質(zhì)，對動物健康有益，已有許多微生態(tài)制劑被普遍認(rèn)可為完全安全的。

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