涂永勤，張德利，曾 緯，陳仕江，尹定華

（重慶市中藥研究院，重慶 400065）

冬蟲夏草Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.，系由冬蟲夏草菌侵染蝙蝠娥科、蝠蛾屬幼蟲而形成的蟲菌結(jié)合體，是我國特有的名貴中藥材。分布于我國西藏、青海、甘肅、云南、四川等省區(qū)海拔3000 m以上的局部高寒山區(qū)草甸地帶[1]。主治咳嗽、咳血、陽萎遺精、病后體弱、老年慢性咳嗽等疾病[2]。目前，冬蟲夏草已出現(xiàn)嚴(yán)重的供需矛盾，而人工培殖冬蟲夏草就成了解決這一矛盾最有效的方法。在人工培殖產(chǎn)業(yè)化過程中發(fā)現(xiàn)，人工培殖的冬蟲夏草常常因生長發(fā)育不良，子實體不能伸出土，而導(dǎo)致蟲草質(zhì)量不佳。本實驗主要研究環(huán)境因子對子實體生長發(fā)育的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 感菌幼蟲

小金蝠蛾 Hepialus xiaojinensis Tu et Ma，蟲種資源采自四川省小金縣崇德鄉(xiāng)崇德牧場冬蟲夏草天然產(chǎn)區(qū)。經(jīng)室內(nèi)人工飼養(yǎng)并感染冬蟲夏草菌，幼蟲感菌率85%以上，由康定中藏藥業(yè)科技有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 飼養(yǎng)工具

養(yǎng)蟲盒系特殊定制規(guī)格為20 cm×30 cm×40 cm，有紅、綠和黃3種顏色的帶蓋塑料盒。

1.2 方法

1.2.1 溫度對子實體形成的影響

在感菌幼蟲飼養(yǎng)到即將僵化時，將其集中在養(yǎng)蟲盒中飼養(yǎng)，待其僵化后，置于不同的溫度， 0℃～5℃變溫、5℃恒溫、12℃恒溫、室內(nèi)自然變溫（-10℃-5℃）和野外自然變溫下。每盒30條僵化幼蟲，每處理重復(fù)3次。觀察次年子實體的形成情況。

1.2.2 水分對子實體形成的影響

取不同含水量的基質(zhì)（含水量分別為30%、40%、50%、60%、70%和80%）放入養(yǎng)蟲盒中，再加入一定量飼料，放入即將僵化的幼蟲，蓋好養(yǎng)蟲盒蓋。以后每15 d～30 d添加1次水分，使基質(zhì)水分盡量保持在設(shè)定含水量范圍內(nèi)。每盒30條僵化幼蟲，每處理重復(fù)3次。觀察子實體生長情況。

1.2.3 光照對子實體形成與伸展的影響

當(dāng)老熟幼蟲生長到8月中旬時，進(jìn)行集中飼養(yǎng)，采用不同顏色的飼養(yǎng)盒、光照方向和強度，觀察其對子實體形成及伸展的作用。每盒30條老熟幼蟲，每處理重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度與子實體生長發(fā)育的關(guān)系

不同溫度下冬蟲夏草子實體的形成實驗結(jié)果見表1。

表1 溫度與子實體形成的關(guān)系

由表1可知，僵化幼蟲在恒溫12℃下，子實體不能分化產(chǎn)生，在恒溫0℃和5℃下，有部分能形成子實體，溫度越低，形成越多。而在0～5℃變溫下，子實體形成率大幅提高，為85.56%。野外自然變溫下，子實體形成率達(dá)97.78%，幾乎全部產(chǎn)生子實體，因此，僵化幼蟲只有在經(jīng)過一定時間0℃左右的低溫處理后，才能產(chǎn)生子實體。

2.2 水分及濕度

觀察不同含水量對子實體生長發(fā)育影響的實驗，結(jié)果見表2。

表2 不同含水量對子實體生長發(fā)育的影響

由表2結(jié)果可知，隨著基質(zhì)含水量的增加，子實體的形成率逐漸提高，50%以下的含水量不利于子實體的形成和伸展。含水量達(dá)70%時，子實體形成率為84.4%。加蓋養(yǎng)蟲盒內(nèi)的相對濕度一般都能達(dá)80%～100%，說明子實體的形成需要充足的水分和較高的相對濕度。在子實體形成階段，保持基質(zhì)含水量為60%～80%，相對濕度為95%～100%為宜，這與野外大雪及多雪年份蟲草產(chǎn)量高相一致。

2.3 光照與子實體生長發(fā)育的關(guān)系

光照對子實體生長發(fā)育與出土的影響結(jié)果見表3。

表3 光照對子實體生長發(fā)育及出土的關(guān)系

由表3可知，當(dāng)用透明薄膜（1000 lx～1200 lx）做盒蓋，使光線從上向下照射時，形成的子實體絕大多數(shù)都能伸出土外，出土率為95.45%，說明光照方向與子實體出土有關(guān)，由土表向下的光照有利于蟲草子實體出土。各色養(yǎng)蟲盒培殖和背光暗室中培殖也能形成子實體，但出土率低。用紅、黃、綠3色養(yǎng)蟲盒和處于背光暗室（0～30 lx）中培殖的子實體，出土率分別為36.78%、40.45%、47.67%和53.49%，說明只要有微弱的光照（0～30 lx）菌核仍能分化形成子實體，光照強度對子實體形成幾乎沒有影響，但光線照射的方向與子實體是否出土有關(guān)。

3 討論與結(jié)論

本研究結(jié)果表明，環(huán)境因子對冬蟲夏草子實體形成具有十分重要的作用。通過本實驗可得出幾點結(jié)論。子實體生長發(fā)育需要0℃左右的低溫刺激，溫度越低，越有利于子實體的形成，變溫有利于子實體的形成；子實體的生長還需要有充足的水分及高濕環(huán)境，要求基質(zhì)含水量為60%～80%，相對濕度95%～100%為宜；在自然界中，大雪及多雪年份，天然蟲草產(chǎn)量高，水分充足，有利于子實體的萌發(fā)生長，這與我們的研究結(jié)果一致；微光或無光照（0～30 lx）都能誘導(dǎo)子實體分化，子實體有向光性生長的特性。在野外，僵化前的幼蟲，借助土壤中微弱的光線，爬行到近土表1 cm～3 cm處，將頭向上然后僵化，這樣有利于子實體出土。在人工培殖冬蟲夏草過程中，發(fā)現(xiàn)許多蟲草形成子實體后，由于養(yǎng)蟲盒從各個方向透光，使其不能從基質(zhì)中伸出，不被發(fā)現(xiàn)而爛掉。這既是最后出土，也因生長過度而質(zhì)量低劣。

[1]楊大榮，龍勇誠，沈發(fā)榮，等.云南蟲草蝠蛾生態(tài)學(xué)的研究-Ⅰ.區(qū)域分布和生態(tài)地理分布[J].動物學(xué)研究，1987，8(1)：1.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2005年版一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[3]曾緯，尹定華.冬蟲夏草菌侵染及寄生階段的生長發(fā)育研究[J].菌物學(xué)報，2006，25(4)：646-650.